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关键词:Gj-1000高压气体基因枪目的:Gj-1000高压气体基因枪的正确使用酵母基因枪转化一 钨粉的制备1. 60mg(w)放在离心管中加入无水乙醇,用超声波粉碎机至手感温度发烫;2. 1000r/min离心10s,去掉上清液;3. 加1ml无水乙醇,漩涡振荡3~5分钟;4. 静止1分钟;5. 1000r/min离心10s,去掉上清液;6. 加1ml消毒蒸馏水,旋涡振荡,离心沉淀,弃掉上清液;7. 重复(6)三次;8. 在沉淀的金粉或钨粉中加入50%甘油,浓度为60mg(钨粉)/ml。二 DNA子弹的制作1. 振荡50%甘油中的钨粉,使之成为悬浮液;2. 取50μl的悬浮液于离心管中(此管可以打6枪,根据实验样品的多少与分成几个小管);3. 取一个小管在液体上的壁处用加样器加入5~10μl的质粒DNA(浓度为1μg/μl),振荡30s,再在小管壁上加入20μl亚精胺(0.1M),振荡30s。边振荡便加入50μlCaCl2溶液(2.5M),漩涡振荡30s~1min,之后静置1min,重复(漩涡振荡30s~1min,之后静置1min)5次左右,冰上静止30min,15000r/min离心10s,弃掉上清液;4. 加入150μl70%的乙醇,吹打一下沉淀,若沉淀均匀散开,则离心(3000r/min 10s),弃掉上清液,加入无水乙醇,进入第(5)步操作。若吹打不散,则用超声波振散,条件为,加70%的乙醇600μl,功率200W,超声波作用1s,4~6次,然后离心,弃掉上清液;5. 加入250μl无水乙醇,不破坏沉淀,静置1min,离心(1000r/min 10s)弃掉上清液;6. 加入大于60μl无水乙醇振荡使成为悬浮液,如悬浮良好,可将此悬浮液用加样器取10μl分别滴在钢膜上,共可加样在6片钢膜上。这样平均每片钢膜为:0.5mg钨粉,0.8μgDNA(以5μl质粒DNA计,质粒多一些效果会好一点)。三 实验前的准备1. 75%的已醇对枪室,样品圆筒室及气体加速管包括封口螺母进行消毒灭菌;2. 将可破裂圆膜在100%乙醇中浸泡15min消毒,然后再无菌条件下干燥:钢膜则在121℃高温消毒20min后烘干(也可用75%乙醇消毒);3. 清洁高压管道,在新装基因枪或重新移动位置时,连接高压气体钢瓶与压力调节阀、表系统的的高压管道的一端接口,另一端先不与基因枪的接口相连,握住此端朝向地面,使钢瓶放气(小流量)冲洗此管1~2s,再连接到基因枪上;4. 消毒操作工具。四 操作步骤1. 打开气体瓶阀,调节压力使发射压力达到试验工作要求的范围;2. 开动真空泵;3. 选择所需压力的爆破膜(100MP),将它放在钢膜螺母的内圆孔的台肩上,将钢膜螺母旋在储气仓螺口上,用球形扳手将螺母旋紧 ,确保不漏气;4. 将涂有DNA微粒的钢膜的放在钢膜架上,等干后用镊子夹起放在弹膜架的圆孔中(带有微粒的一面朝下),旋紧钢膜封口螺母;5. 用镊子将涂有待转化酵母的YPD平板放入基因枪样品架上,此样品架可在样品室内选择合适的位置(4.5cm);6. 将已装上DNA的弹膜座装在已装好样品的样品室,安装方法:将手柄往下移并旋转至卡住,这样发射腔筒下平面与升降座上平面之间扩大了空间,可将将样品室与弹膜座放在升降底座上,当手柄放开后,样品室上升,是三件体结合在一起,件与件之间都有密封圈密封;7. 按下真空开关,真空泵开始工作,真空表指示针指示真空下降,当真空度达到0.085~0095Mpa时,即可按高压触发按钮向储气仓内充气,(若真空抽不上,可能三件体没有合上,可移动一下三件体),同时观察高压气体监测表的的压力值。在达到爆破膜的爆破压力时,瞬间产生一个气体冲击波轰击钢膜,同时钢膜表面的微弹(包覆DNA微粒)通过垫网继续高速飞行射入靶细胞;8. 关闭真空按钮,按下真空释放钮,使系统卸荷并将样品取出。这样一次基因导入试验完毕;9. 按下手柄,取出样品室与弹膜座,从样品室的样品皿座上取出样品皿,盖上盖子,编号记录实验内容及条件;10. 从弹膜座圆孔穴中取出钢膜,接着拧下封口螺母,从圆孔台肩上取出已穿孔的爆破膜;11. 从步骤3开始重复操作,完成所有的样品处理;12. 关机:枪用完后应关闭氦气瓶阀,并在真空泵仍处在工作状态,按下高压触发开关是氦气压解除。关闭电源总开关。从插座上拔下电源线插头;13. 实验完毕后进行整理清洁工作。一般用75%的乙醇清洗。
刚进实验室的时候,听说了基因枪这个东西,刚听说的时候,觉得好高级呀,基因枪啊,听着就那么神秘,总想去试用一下基因枪,感觉感觉这么高端的仪器有什么妙用。只可惜呀,我做的方向根本就用不到基因枪,这个东西对我来说总是个谜一样的东西。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211162036_404683_1306303_3.jpg 其实呢,我也有好多机会看我同学使用基因枪,只是呢,呆过实验室的人好多可能都有同样的感觉,那就是没有用过的东西呢,没有做过的实验,总是觉得很高级,很神奇。反正呢,我就是这样,比如说我没有做过很多很多人都做过的mapping,好多人都给我讲过这个东东的原理,但我就是总也听不明白。基因枪我也央着我同学给我讲过,但是我除了对打枪这个字眼特别熟悉外,总是觉得什么飞行膜,可裂膜什么的总是那么神秘,还有那特别贵特别贵的金粉呀,想亲自试一把。 终于啊,我盼到了这个机会,我的实验也需要基因枪了,真好,先把理论努力的学习了一大遍,然后拉着我同学教我。开开那装着叫做惰性气体的氦气的氦气瓶,就感觉自己打开了一扇神奇的窗啊,感觉真好! 用金粉做好子弹,散布在飞行膜上,再把烟草叶片放到平皿里,放进基因枪,啪啪啪按上那么三四个纽,就听到“砰”一声响,放气,打开基因枪,取出已经被轰击过的烟草叶片,一枪就算打完了。原来一切就是如此简单,只有做过的人才知道……
各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局(药品监督管理局): 为适应各地对医疗器械监督管理工作的需要,现将基因枪等产品的分类界定通知如下: 一、基因枪:以氦气为动力,以干电池为起动电源,把DNA微弹或颗粒药物直接发射到人体或动物的细胞、组织或器官。作为Ⅲ类医疗器械管理。 二、排龈止血剂:主要成分为硫酸铁。用于和排龈线一起使用进行排龈止血,也可以直接使用对止血部位进行摩擦进行止血。作为Ⅲ类医疗器械管理。 三、Intercept血小板光化学处理(PCT)系统:处理和储存血小板的体外光化处理系统。通过灭活血小板中的病原体和白细胞,从而降低在输注血小板制品时因病原体和白细胞污染而造成的相关风险。作为Ⅲ类医疗器械管理。 四、眼睛冲洗器:由冲洗瓶(罐)、喷嘴、保护盖和生理性海水组成。生理性海水主要成分为海水提取液,经纯净水稀释后制成。用于清洁、清除眼内污物。作为Ⅲ类医疗器械管理。 五、液体敷料:主要成分为脂肪酸酯和少量茴香。喷涂在溃疡压力性Ⅰ期红斑期、Ⅱ期未破损的水疱期皮肤或风险区域皮肤表面,限制表皮水份的流失,防止皮肤干燥等。起到物理覆盖、隔离保护受伤皮肤。作为Ⅲ类医疗器械管理。 六、同步交变治疗机:用于使人体内磁性变异细胞聚合的多极细胞聚合体(肿瘤)离散,并逐步还原成正常细胞的磁性排列,从而治疗肿瘤等疾病。作为Ⅲ类医疗器械管理。 七、腕式防打鼾器:配带于手腕上,通过输出弱电脉冲刺激使用者手腕,促使使用者改变睡姿,减轻打鼾症状。作为Ⅱ类医疗器械管理。 八、背部护理系统:利用自身重力作为牵引力,缓解关节和关节盘的压力。用于帮助预防和减轻背、颈、肩、膝部以及关节的疼痛。作为Ⅱ类医疗器械管理。 九、自动眼操仪:通过1.5v直流电驱动微型电机与偏心轮组成的振动器振动按摩触点,对眼部相应穴位进行自动按摩,预防近视的发生与发展。作为Ⅱ类医疗器械管理。 十、水凝胶乳垫(不含药):提供益于伤口愈合的最佳湿润环境,防止细菌污染和伤口脱水,吸收排脓,并提供清凉的解痛覆盖层。作为Ⅱ类医疗器械管理。 十一、视频眼震观察系统:将摄像头安装在眼镜支架上,通过监视器观察眼睛。作为Ⅱ类医疗器械管理。 十二、封闭式血液冷藏周转箱:由箱体、冷却匣、手推车、塑料锁扣等可选配件组成。在带绝缘隔热体的周转箱中用铝制冷却匣对血液进行冷却。作为Ⅱ类医疗器械管理。 十三、开放式血液冷藏周转箱:由冷藏板、篮筐、平板车组成。在密封血袋外部利用铝制冷藏板对血液进行冷却。作为Ⅱ类医疗器械管理。 十四、传染病防护罩:将传染病病人放置在罩内进行搬运、运输和观察。罩内由吹风设备产生负压状态,确保罩内病原体不会扩散到罩外。作为Ⅱ类医疗器械管理。 十五、体外矫形器:应用于人体的脊柱和四肢等部分,预防及矫正畸形,固定骨折。体外矫形。作为Ⅱ类医疗器械管理。 十六、医用防护鞋:供医疗机构医务人员在特殊场所(如手术室、重症监护室等)使用,防止血液、污水污染或锋利器械损伤。作为Ⅱ类医疗器械管理。 十七、防褥疮翻身垫:用于术后或卧床不能自理的病人,定时翻身,防止褥疮的产生。作为Ⅰ类医疗器械管理。 十八、眼科用棉签:用于眼科治疗时擦除渗出的液体,无止血和护创功能。作为Ⅰ类医疗器械管理。 十九、产品连接电缆:将电刀负极板与高频电刀发生器相连接。不作为医疗器械管理。 二十、全自动加样器:用于全自动化样本、试剂的稀释、分配、混匀及相关数据的文档自动化管理等操作。不作为医疗器械管理。 二十一、SCS清洗液:用于BN*Ⅱ系统,BN Prospec系统和BCS系统的清洗溶液。不作为医疗器械管理。 二十二、多关节等速力量测试与训练系统:用于康复运动训练,使人体肌肉在任意一点产生最大力量。产品主要由中央控制系统、多关节运动模块、下肢运动模块和职业康复模拟运动模块及背部屈伸运动模块等组成。不作为医疗器械管理。 二十三、热循环仪:用于科学研究中的DNA片断扩增。不用于临床诊断。不作为医疗器械管理。 二十四、润滑油:用于牙科手机芯轴的润滑。不符合医疗器械定义,不作为医疗器械管理。 二十五、健脊塑身仪:通过肌肉锻炼,增强心肺功能,促进血液循环,强化背脊部位的深层肌肉力量。塑身美体,改善坐、立、行走的姿态。不作为医疗器械管理。 二十六、试管加热器:用于临床上采集卵泡前对试管进行预热。不作为医疗器械管理。 二十七、内窥镜托架:在操作时临时放置内窥镜的托架。不作为医疗器械管理。 二十八、注射泵/输液泵支架:为已安装的注射泵和输液泵供电。通过内部的红外线接口,在已安装的输液泵或注射泵之间进行信息传送。不作为医疗器械管理。 二十九、空气采样仪及配套琼脂条:用于测量空气中传播的细菌、微生物的浓度。不作为医疗器械管理。 三十、风速仪:用于测量通过空气采样仪的空气流速度。不作为医疗器械管理。 三十一、骨髓、脐带血有核细胞体外分离试剂盒:不接触人体,用于体外提取有核细胞。有核细胞是细胞治疗的基础。不作为医疗器械管理。 三十二、显微镜恒温台:为生物显微镜观察提供恒定温度。不作为医疗器械管理。 上述凡界定为医疗器械的产品,从2006年12月1日起执行调整后的类别。从发文之日起,有关食品药品监督管理部门可受理该类产品的注册申请。 国家食品药品监督管理局