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加标样品和标准品相差6小时,结果糖精钠就漂移的很厉害。有时候序列跑的太久连苯甲酸和山梨酸也跟着飘了,大神们有什么解决办法吗? 方法参照5009.28-2016做的[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007210934422174_4788_4065900_3.png[/img]
液相色谱做糖精钠保留时间漂移,
离子色谱是液相色谱的一种,但常规中低端主机系统配置的均是等度泵,配合淋洗液发生器可实现复杂样品中阴阳离子的梯度洗脱。但糖和氨基酸类的分析需要用到水、NaOH和NaAc三种不同种类流动相的比例混合梯度,此时,需要用到类似于液相的四元梯度泵系统。对于四元梯度系统来说,保留时间的漂移原因相对比等度系统要多。本文仅介绍在一次寡糖分析时碰到保留时间漂移时的故障排查思路。一次用Thermo的CarboPac PA20做单双糖和寡糖分析实验中碰到保留时间不稳定的现象。通常情况下用PA20做糖分析时,如果洗脱程序是低浓度NaOH(小于100mM)等度洗脱,还需要在洗脱程序后面加5-10min的清洗程序(一般用200mM的NaOH溶液),然后再恢复到初始洗脱浓度平衡,否则,系统中残留的由样品或流动相引入的CO2会影响待测糖的保留时间。本次实验由于需要做寡糖,在流动相中加入了洗脱能力更强的NaAc溶液,足以消除CO2对保留时间的影响,但在系统充分平衡后仍存在如图1所示的漂移现象,难道哪里出问题啦?http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092822311007_01_1766730_3.png图1,保留时间漂移谱图首先检查氮气减压阀,看压力指数是否在正常范围内。在此次分析用到的三种不同的流动相中,由于NaOH溶液是强碱性溶液,在空气中放置时容易吸收空气中的CO2,使洗脱效果发生变化。为防止NaOH受空气中CO2的干扰,常常需要在盛NaOH溶液的流动相瓶口加氮气保护(如图2,瓶口蓝色管路为氮气管线),氮气减压阀一般调到3-6psi为宜,当压力过大时会影响泵的正常工作,从而导致保留时间漂移。但检查减压阀,压力指数正常啊。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016092822325302_01_1766730_3.png图2、加氮气保护的流动相瓶接下来怀疑是流动相没有混匀或流动相配制原因,重新用新的50%NaOH溶液和NaAc配制并充分混匀后仍有漂移。既然不是氮气和流动相的原因,会不会是比例阀出了故障呢?于是手动配了份NaOH和NaAc混合溶液,走100%的A通道,重复进了几针标准品,重复性竟然很好,见图3.基本可以断定是比例阀出了问题,于是打了400报修电话,维修工程师第二天就上门了,工程师换好比例阀以后,配制了新的流动相梯度洗脱走出的谱图见图4,终于恢复了良好重现性,心情大好,接着实验,顺便赞一下赛默飞的售后响应速度哈。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609282234_612516_1766730_3.png图3、100%A通道谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609282234_612517_1766730_3.png图4、新换比例阀之后的谱图