病毒采样器

来自32个国家的239名科学家在本周一（2020年7月6日）发行的《Clinical Infectious Diseases》期刊上，发表了一封给世界卫生组织（WHO）的公开信，信中概略描述了他们发现的证据，即悬浮在空气中的病毒微粒，也会让人感染新冠肺炎。据路透社报道，世界卫生组织(WHO)周二承认，新冠病毒在空气中传播的“证据正在浮现”，此前一群科学家呼吁WHO更新有关新冠肺炎如何在人与人之间传播的指南。“我们一直在讨论将空气传播与气溶胶(aerosol)传播作为新冠病毒传播方式之一的可能性，”WHO新冠疫情技术主管Maria Van Kerkhove在新闻发布会上表示。关于SARS-CoV-2病毒的气溶胶传播再次成为热点。Coriolisμ生物气溶胶采样器被证实可以成功地应用于评估SARS-CoV-2的空气污染，（doi： https://doi.org/10.1101/2020.05.24.20110346 ）并且因为其液体采样的特性可结合快速分析方法（如RT-qPCR等），可以快速得到结果，大大缩短了卫生部门反应时间，可用于应急突发状况的现场应用，及早预防、发现和控制SARS-CoV-2的传播。近日，Bertin根据自己以及客户的应用经验，给出了使用coriolis生物气溶胶采样器评估空气中SARS-CoV-2病毒污染状况的最佳操作流程：从采样到分析。采样：使用Bertin Coriolisμ采样器，采样流速200L/min（采样器最大采样流速300L/min）,建议总采样时间为20~30min，标准的收集液为PBS缓冲液，如果后续想要结合病毒培养方法对样品进行综合评估的话，推荐采用DMEM或MEM培养基作为收集液，建议收集液体积为5~15ml。样品保存：采样结束后，应马上将样品分装于适当的离心管中，样品可在4℃条件下保存24h，如果想要保存更长时间，可以-20℃或者-80℃储存。分析：采样后，如果采样时收集液体积在15ml左右，推荐采用切向流过滤等方法对样品进行浓缩；如果采样收集液在5ml左右，可以直接取150μL样本进行RNA或DNA提取。后续可采用qPCR等快速分析方法，快速得到检测结果；也可结合qPCR和培养法综合评估空气中SARS-CoV-2病毒污染状况。仪器清洁：局部清洁灭菌的话，可使用高压灭菌锅、70%酒精等对收集杯、进气口、U型管进行；对采样器进行整体灭菌的话，可在收集杯中装满70%酒精，然后让仪器在最高流速下运行15min即可达到灭菌效果，或采用H2O2蒸汽灭菌设备对采样器进行整体灭菌。 Coriolis μ 是一款创新的基于湿壁气旋原理的生物气溶胶采样器，主要应用于空气质量控制、环境污染研究、制药、食品、兽医工业、生物医学和健康环境的空气质量监测等领域。 1. 100~300LPM高流量，可有效收集低粒径颗粒物，如病毒；2. 可选长时间采样组件，采样时间长达6小时，长时间在特定地点采集，整批处理；3. 与非培养分析方法（PCR、免疫分析、细胞计数、ATP生物荧光等）兼容，大大缩短分析时间，也可几种分析方法联用。4. 几个小时内可得灵敏特异结果；5. 15ml恒定体积可防止液体过载，也可用于分装样品，用于不同的分析方法；6. 可用于采样不能用培养法的生物污染，采集后用固相细胞计数法进行定量； 因其快速、便捷、高效的产品特性，Coriolis μ采样器广泛应用于：l 工作场所、建筑和室内l 工业场所l 自然地点l 牲畜设施和农场l 食品和化妆品工业l 药品工业目前全球范围内每日确诊患者数量还在增加，国内目前也存在局部散发和聚集病例出现。但是，只要我们充分了解并掌握了新型冠状病毒的特点、传播方式、预防措施等，积极实行疫情防控“四早”策略，做到早发现、早诊断、早隔离、早治疗，把联防联控机制落实到实处，建立起完整的全民有效的防控网络，新冠病毒将无处可逃！

新冠病毒确认可通过气溶胶传播2019年末以来，新冠病毒的爆发性疫情对世界范围产生了巨大影响。该病毒也从最早的原始毒株不断变异，其主流毒株的传染性也逐渐增强。经过广泛的科学论证，普遍认为目前世界范围内流行的奥密克戎毒株既可以通过常见的飞沫、黏膜接触等传播，也可以通过气溶胶形式进行传播。2020年10月20日，世界卫生组织（WHO）认定气溶胶可以传播新冠病毒，在接下来的六个月里，通过官方文件确认了气溶胶可以携带病毒，并留在空气中。在我国2022年颁布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第九版）》中，也明确说明了传播途径包括“在相对封闭的环境中经气溶胶传播”。 01生物气溶胶什么是气溶胶？气溶胶是指悬浮在气体介质中的固态或液态颗粒所组成的气态分散系统。其中，包含生物性物质的气溶胶，例如病毒、细菌、真菌、花粉、过敏原、立克次体、衣原体、动植物源性蛋白、各种菌类毒素和它们的碎片和分泌物等，被称作生物气溶胶。生物气溶胶主要来源于土壤、植被、水体等源排放和动物（包含人类）、医院、养殖场、垃圾填埋场、污水处理厂等源排放。生物气溶胶在传染病、公共卫生、大气环境、食品安全、生态环境、气候变化、生物反恐、疾病检测以及环境与健康等方面均有重要影响。生物气溶胶颗粒形成后，便可在较长时间内悬浮于空气之中并且保持感染活性，因此可持续产生感染风险。 根据科学研究，新冠病毒的粒径约为0.1μm，而新冠病毒也可能附着于其他气溶胶颗粒上，常见的生物气溶胶颗粒的直径范围在0.01~10μm之间，因此粒径范围在0.1-10μm之间的生物气溶胶均可能含有新冠病毒。而对于生物气溶胶的检测也构成了对流行病学调查、风险评估等工作的重要组成部分。不同于污染区域的表面采样或者对人筛查使用的鼻咽拭子采样，要实现对漂浮在空气中看不到摸不着的生物气溶胶进行检测，必须首先经过特殊的生物气溶胶采样器对生物气溶胶进行富集。 新型冠状病毒（图源：新型冠状病毒国家科技资源服务系统） 02捕获生物气溶胶 生物气溶胶是传播病毒细菌的方式，要如何对它进行捕获并进一步检测它呢？生物气溶胶采样器可以实现。生物气溶胶在空气中看不到、摸不着、闻不到，几乎无影无踪，在空气中直接对生物气溶胶进行详细生化指标测试极为困难，因此在很长一段时间内，人们对于空气中的生物气溶胶的性质知之甚少。为了研究空气中的生物气溶胶，就需要开发气溶胶采集器，通过物理方法将空气中微生物富集到采样载体上，以便于我们对空气环境中浓度低、颗粒小的微生物进行充分的分析研究。对于生物病原体的采集，要求采样器具有高效的采样效率、合理的粒径采集区间、优秀的工作稳定性与可靠性，且需要能够充分保持被采样物质的生物学特征，例如活性、核酸片段等信息，以用于后续细胞生物学和分子生物学方法的进一步研究。 03新冠病毒的气溶胶采样 疫情以来，大家对于核酸PCR检测已经再熟悉不过了，通过核酸PCR检测，能够发现人体中是否存在新冠病毒。对于人体新冠病毒的检测，通过咽拭子采样，其有严格的标准采样动作要求。同样，对空气中新冠病毒检测采样也有着严格的要求。 ①便于核酸PCR检测。对于空气中的细菌和真菌分析多采用传统的营养基培养计数法，但由于新冠病毒必须在生物体细胞内进行繁殖，不能在营养基上直接培养，因此针对新冠病毒筛查的气溶胶富集采样方法不应使用传统方法。核酸PCR检测是针对病毒含有的核酸进行检测分析，不需要培养病毒，并且具有非常高的灵敏度，因此适用于新冠病毒的检测。②采样方法不破坏病毒核酸。由于PCR检测的是新冠病毒的RNA核酸，因此采样方法应不破坏生物的分子结构和生物活性。③采样后样品体积小。PCR检测方法对于样品量体积需求低，往往只有200μL，为了更灵敏地检出可能存在的新冠病毒，气溶胶采集器的采样载体应尽可能做到体积小、采集效率高，液体采样基的采样后体积或者用于在洗脱固体采样基后得到的洗脱液体积宜小于1mL。④对于小直径气溶胶颗粒采样效率高，采样颗粒直径覆盖范围广。根据前文论述，粒径范围在0.1-10μm之间的气溶胶均可能含有新冠病毒，因此针对新冠病毒的气溶胶采样器应有效采集以上粒径范围的生物气溶胶。⑤采样流量大、可连续采样时间长。新冠病毒在空气中处于气溶胶状态时浓度往往较低。为了进一步提高生物气溶胶检测的灵敏度与覆盖范围，提高采样的时效性与可靠性，具有大流量采样能力和长时间采样可靠性的采样器，更适合实际应用场景的使用。⑥具有生物安全性设计。新冠病毒具有非常强的感染能力，对环境的采样载体应具有良好的生物安全性设计，采样之后采样载体能够充分密封保存，采样设备便于灭活洗消和更换耗材与一次性部件，避免采样载体或者误操作等因素造成对操作人员的潜在危险。⑦环境适应性好。我国由于地跨多个地理纬度，各地大气、温度环境各不相同。作为环境采样装置，应具有较好的温度、湿度、气压适应能力，尤其可以在低于零度的环境中使用，使用固体采样基的采集器在这方面具有优势。⑧结构简单，使用方便，采样载体易于保存。对于实际应用场景的采样，往往需要由一线防疫人员经过简单的训练即可正确操作使用，因此可靠、简单的结构搭配易于保存的固体采样载体更有利于生物气溶胶检测的广泛使用。 04不同类型的采样器及特点自然界中含有大量微生物气溶胶，其中粒径为0.1~10.0μm的微生物气溶胶与人类健康关系密切。空气中针对不同应用场景、不同目标微生物的气溶胶的采样方法种类繁多。根据采样原理的不同，国标GB/T 38517-2020中罗列出了多种常见的生物气溶胶采样器类型，主要分为撞击式采样器、冲击式采样器、过滤式采样器、离心式采样器、静电吸附采样器、自然沉降采样器等，以及基于这些原理的大流量采样器。 撞击式采样器撞击式采样器是一种利用惯性作用，通过喷嘴、喷口或裂隙的加速作用把生物气溶胶粒子采集到固体介质表面的气溶胶采样装置。撞击式采样器通常分为筛孔式和狭缝式，主要区别为气溶胶通过的喷嘴、喷口或裂隙形状不同，不同形状对应的采样流量也不同。安德森采样器是最常见的筛孔式采样器，使用层叠的带有不同孔径的筛孔收集不同粒径范围的气溶胶颗粒，工作流量一般为28.3L/min。作为一种可靠的空气微生物采样器，国际微生物会议和美国政府工业卫生学家协会推荐为标准空气微生物采样器，也是应用最广泛的空气微生物采样器。其通过直接将空气浮游菌采集到营养琼脂平皿上，采样后可直接进行培养，对在培养基上形成的菌落数进行计数即可以反推出采样时的浮游菌数量。但是这种采样器不能长时间工作，否则气流的冲击会造成营养琼脂平皿的过度失水。安德森采样器适用于对于医院、超净间、公共场所、制药车间等场所的浮游菌检测和相关科学研究。由于病毒必须在细胞内繁殖，使用琼脂平皿的安德森采样器不能有效地培养出病毒斑迹，同时为了适配比浮游菌颗粒更小的病毒气溶胶颗粒，对于包括新冠病毒在内的病毒采样往往使用经过特殊空气动力学设计、具有更大流量、采集颗粒能力更强的狭缝式撞击式采样器。撞击式采样原理图冲击式采样器冲击式采样器是一种利用气流对液体的冲击、清洗或雾化等原理，能够使具有足够大惯性的生物气溶胶粒子撞击液体并进入液体介质中的气溶胶采样装置。通常可以分为全玻璃液体冲击式采样器、气旋冲击式采样器等。这类采样器的最大特点是可将空气中的微生物直接富集到液体中，方便后续的试验分析，经常用于野外环境的采样和现场快速检测。但其采样流量小，多适用于高浓度的生物气溶胶采样，且采样液体积有限，随着采样的进行，液体会挥发，不能用于长时间、大流量的冲击采样。 冲击式采样器原理图过滤式采样器过滤式采样器又叫滤膜式采样器，是一种当生物气溶胶粒子通过各种滤材时，由于滤材小孔对粒子的阻留或／和滤材对粒子的静电吸引阻留作用，将粒子捕获在滤材上的采样装置。过滤采样被认为是最简单且有效的采样方式，其结构相对简单，通常由采样滤膜载体和气泵组成，可根据使用的需求，灵活调整采样流量。此类采样器具有采样效率高、流量可调节范围广、操作简单等特点，但受滤膜材质的影响，过滤式采样器采样效率在长时间工作后可靠性会下降，不适宜用于超过30min的长时间采样。 离心式采样器离心式采样器是一种让气体以高速旋转所产生的离心力将生物气溶胶粒子与气流分开并撞击到固体介质表面上或富集到液体介质里的采样装置。此类采样器也称之为气旋式采样器，多采用液体为采样介质，因其结构的差异又有湿壁气旋式和干壁气旋式之分。湿壁气旋采样器采样过程中，生物气溶胶颗粒接触湿的采样管内壁，进而进入采样液中。此种采样器的特点是采样效率高，采完后的液体样品可以直接用于后续试验分析，但也受到采样液易挥发、采样过程不稳定及易污染等缺点的限制。干壁气旋采样器采用旋风分离的方法，将生物气溶胶样品撞击进入采样液中，其能在一定程度上减少采样液挥发等问题，但对于0.5μm 以下粒子（例如病毒） 的采样效率往往较低。离心式采样器常用于环境中细菌、真菌、孢子等生物颗粒的采集与后续分析工作。 旋风分离技术原理静电吸附采样器：静电吸附采样器是一种使用多种方法使生物气溶胶粒子带上电荷，在电场的作用下通过静电吸附收集生物气溶胶粒子的采样装置。目前常用的带电方式是电极高压放电，但是该方法有可能造成生物体活性降低和结构破坏。静电富集采样往往被集成于长期连续工作的纸带式收集与监测系统之中。 自然沉降采样器自然沉降采样器是一种利用生物气溶胶粒子在重力作用自然下沉降到采样面（即微生物营养琼脂平皿表面）的采样器。其特点是等待菌体自行沉降，所需采样时间较长，采样效率低，且不能采集到长期漂浮在环境中的浮游菌。但是这种方法所需仪器设备少，可在部分场景下替代安德森采样器，常用于洁净间、医院等场所的辅助例行检查。类似于安德森采样器，其采用的培养基也不能用于培养病毒。 自然沉降采样 针对不同种类采样器的工作原理和特点，结合对新冠病毒采样的要求，下表对各类采样器对新冠病毒气溶胶采样的适用性进行了比较。 狭缝式撞击采样器安德森采样器冲击式采样器过滤式采样器离心式采样器静电吸附采样器自然沉降采样器采样后便于核酸PCR检测√❌√√√√❌不破坏病毒核酸√√√❌√❌√采样样品体积小√❌❌❌❌√❌采样效率高，采集粒径覆盖广√√√√❌√❌采样流量大√❌❌√√√❌可长时间连续稳定采样√❌❌❌❌❌√生物安全性设计√❌❌√√√❌环境适应性好√√❌√❌√√结构简单，使用方便，采样载体易于保存√√❌√❌√√综合对含有新冠病毒气溶胶的采样需求，狭缝式撞击式采样原理的采样器具有最好的适应性。 本节相关技术原理图片部分来自文献《Methods for Sampling of Airborne Viruses》，MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY REVIEWS, Sept. 2008, p. 413–444 05 BC500生物气溶胶采样器 BC500生物气溶胶采样器是基于狭缝式撞击式采样原理进行设计开发的一款高效、便携、全天候的大流量生物气溶胶采样器。该设备配备生物性气溶胶采样载体及洗脱液，可以满足以上对生物气溶胶颗粒采样的多方面要求，适用于如细菌、病毒、真菌、芽孢等生物气溶胶颗粒的富集采样。该设备可以单独使用，也可与生物气溶胶报警器联合使用，实现监控、报警、采样一体化操作，满足多种生物气溶胶采样的要求。其特点包括： l参考最新国标设计：《GB/T 39990-2021 颗粒 生物气溶胶采样器 技术条件》；l设备联动采样：可以和生物气溶胶报警器联用，在生物气溶胶报警器报警同时，触发启动生物气溶胶采样器自动实施；l采样效率高：对于小粒径气溶胶颗粒采样效率高；l环境适应性好：采样性能不受环境温湿度变化影响；l生物安全性高：采集后可保持密封状态，设备整体便于洗消；l人机工程设计：生物气溶胶采样载体便于安装，设备可单手携带、一键操作、移动采样；l运输方便：标配携行箱，适应铁路、水运、公路、空运等运输方式。

GR-1353型空气微生物采样器产品简介GR-1353型空气微生物采样器（以下简称采样器）是我公司精心研制的一种专门用于采集空气中微生物的采样仪器，它基于安德森撞击法原理，按一定流量抽取空气，使气流中的微生物粒子加速撞击到含营养琼脂培养基的培养皿表面，经培养形成肉眼可见的菌落，对菌落进行计数并根据采样体积计算空气中活个体的浓度。广泛地用于卫生防疫、疾病控制、制药工业、食品工业、医院、科研教育等部门，为评价空气环境微生物污染危害及其防治措施提供依据。依据标准JJF 1826-2020《空气微生物采样器校准规范》GB/T18204.3-2013《公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物》工作原理GR-1353型空气微生物采样器模拟人体呼吸道的解剖结构及其空气动力学特征，采用惯性撞击原理，将悬浮在空气中的微生物粒子，按大小等级地分别撞击收集在采样介质表面上，然后取出采样介质进行培养，用于监测细菌、真菌、病毒等的物理尺寸、形状、浓度、粒径分布及做进一步微生物分析。 功能特点◆ 可选配二级、六级、八级分层级的安德森采样头◆ 配撞击式吸收瓶采样，可用作液体撞击式微生物气溶胶采◆ 标准撞击法筛孔式工作方式◆ 可用于浮游菌、真菌、生物气溶胶等的采样◆ 无刷高负压采样泵，电子流量计，恒流采样◆ 内置锂电池，电池工作时间大于8小时◆ 内置无线通讯接口，可选配蓝牙打印机◆ 高性能工业级核心控制板，实时操作系统◆ 海量数据存储、数据存储量大于8000组◆ 具有USB接口，采样数据可以通过U盘导出◆ 具有实时时钟，可设置定时采样，间隔多次采样◆ 自动测量温度、气压，自动计算标况采样体积◆ 体积小、重量轻，携带方便◆ 大尺寸中文点阵式液晶屏，自动调节对比度，可在零下30度正常工作◆ 掉电保护功能，来电自动采样 技术指标主要参数参数范围分辨率准确度采样流量(5～30)L/min0.1L/min优于±2.5%采样时间1min～99h59min1min不超过±0.2%计前压力(-30～0)kPa0.01kPa优于±2.5%流量稳定性优于±2.5%流量重复性优于±2.0%负载能力大于20kPa（28.3L/min 流量时）电池工作时间大于8小时捕获率≥98%六级安德森采样头（标配）第l级：7 .0μm第二级：4.7μm – 7.0μm第三级：3.3μm – 4.7μm第四级：2.1μm – 3.3μm第五级：1.1μm – 2.1μm第六级：0.65μm – 1.1μm采样周期99小时59分内任意设置噪声≤60db工作电源220V/AC或DC12V功率≤ 45W主机大小210×250×310（mm） 5.0Kg采样头大小194mmH×106mmD 1.8Kg创新点：GR-1353型空气微生物采样器它基于安德森撞击法原理，按一定流量抽取空气，使气流中的微生物粒子加速撞击到含营养琼脂培养基的培养皿表面，经培养形成肉眼可见的菌落，对菌落进行计数并根据采样体积计算空气中活个体的浓度；模拟人体呼吸道的解剖结构及其空气动力学特征，采用惯性撞击原理，将悬浮在空气中的微生物粒子，按大小等级地分别撞击收集在采样介质表面上，然后取出采样介质进行培养。 空气微生物采样器