异常细胞计

NovoCyte Penteon是一台灵敏的流式细胞仪，具有5激光和多达30个荧光通道。它具有出色的灵敏度、分辨率、速度和灵活性。它还具有7.2 log的宽动态范围以及全自动补偿功能，让用户能够在同一实验中检测暗淡信号和明亮信号。在上一代智能化流式细胞仪基础上，提供了更强大的处理能力，以适应更高端的使用需求。搭载自动上样系统NovoSampler Q，兼容40管流式管架、 24/48/96/384孔板等多种上样方式，还可以整合到不同的实验室自动平台。简便及友好的NovoExpress 软件，在数据获取、分析及报告方面带来更可期待的用户体验。仅限研究使用。不可用于诊断目的。- 5激光30荧光通道- 超凡灵敏度和分辨率- 软件功能强大，支持数据边获取边分析- 智能化设计，操作无需人工值守，简化工作流程- 高通量检测自动完成- 10^7.2宽动态范围检测，无需电压调节- 高速收集，最高可达100,000次/秒- 准确的体积法绝对计数功能，无需计数微- 优异的散射光分辨率，可检测小至100nm的颗粒具有流体反馈控制机制始终保持非常稳定的流速。在各种样品流速下具有出色的稳定性，可在不同的操作条件下提供一致的结果。新版NovoExpress，继续保留传统的优秀功能之外，提供了更多高级分析方法：- 细胞周期分析模块：除了之前的Watson Pragmati算法之外， 又新增了Dean Jet Fox（DJF）分析模型。为G1，S和G2 / M的定量拟合、以及其他参数（如CV's和G2 / G1 比率）的量化提供了更多选择， 尤其适合药物处理后的不规则周期分析。- 细胞增殖分析模型：自动分析细胞增殖，快速识别细胞分裂代数，并计算增殖指数，便于定量。- 热图数据显示：用户定义参数的颜色，方便快速查看并同时比较多个样品。 应用领域：- 癌症/免疫学- 药物及疗法开发- 病毒感染研究- 疫苗开发- 细胞生物学- 干细胞- 微生物学/水生生物学- 植物学性能指标：激光器数量5激光器配置UV/紫色/蓝色/黄色/红色荧光通道30工作原理：无与伦比的光电检测器硅光电倍增管 (SiPM) 是基于硅基底的固态半导体器件，具备光子能级灵敏度，动态范围为 7.2 个数量级，是一款具有光子计数功能的紧凑检测器。NovoCyte Penteon 设计中的创新光学器件包含 30 个独立的 SiPM，可收集并处理来自每个荧光通道的信号。出色的散射光分辨率，可检测小颗粒NovoCyte Penteon 散射光检测光学系统和信号处理电子器件经过优化，可以分辨粒径小至 0.1 µ m 的颗粒。凭借这种优异的分辨率，可轻松识别和分析血小板、细菌和各种亚微米颗粒。高重现性和稳定性NovoCyte Penteon 和 NovoCyte Quanteon 的液路系统专为提供高性能而设计。NovoCyte Penteon 和 NovoCyte Quanteon 拥有其他流式细胞仪无法比拟的液路一致性和稳定性。使用蠕动泵的其他仪器通常会受到液路脉动的影响，导致绝对细胞计数不一致和不准确。应用：凋亡分析细胞凋亡也称为细胞程序性死亡，是细胞调控自身死亡的过程，通过激活特定通路使细胞发生收缩、凝聚，并最终通过吞噬作用被清除。这与坏死细胞死亡形成鲜明对比，坏死细胞死亡时细胞失控死亡并裂解，可产生免疫反应异常激活等有害影响。因此，凋亡细胞以非常有序的方式死亡，可限制其对周围细胞和组织的破坏。多种方法可用于测定细胞死亡并区分其为凋亡还是坏死。NovoCyte 流式细胞仪具有自动补偿设置和宽荧光检测动态范围，可轻松对检测进行定量，无需调整 PMT 电压免疫表型分析免疫状态与疾病状态、治疗效率以及对疫苗等外部刺激的反应有关。免疫表型分析可快速识别候选细胞类型、亚类和功能。由于免疫细胞可能影响疫苗的免疫原性及其效能，因此监测多种免疫细胞群的频率以及特定细胞亚群（如单核细胞、NK 细胞、T 细胞和 B 细胞）的分化或活化状态至关重要。NovoCyte 流式细胞仪可同时定量分析多种白细胞，以便更好地了解患者的免疫状态并监测机体对传染病的免疫反应。细胞增殖细胞增殖是一种重要功能，是高度结构化的事件，如果不受控制，会导致疾病。我们可以通过绝对细胞计数或使用染料（例如 CFSE）测量增殖。当 CFSE 标记的细胞发生分裂时，染料在子细胞之间平均分配，随着染料的不断稀释，我们可以测量 CFSE 荧光随时间的损失。此外，还绘制染料的平均荧光强度 (MFI) 与细胞浓度随时间的变化曲线，以揭示两者之间的反比关系。这类分析方法通常用于观察 T 淋巴细胞活化的变化。图：使用 CFSE 测量 Jurkat T 细胞增殖。A) 使用 CFSE 标记 Jurkat T 细胞，并通过 NovoCyte 流式细胞仪分析细胞随时间的变化，以测定细胞分裂。每个峰值都对应于一个单独的时间点。B) 使用随细胞分裂产生的信号稀释，绘制绝对细胞计数与 CFSE 的平均荧光强度 (MFI) 随时间的变化曲线。细胞因子检测细胞因子是免疫细胞对病原体、自身免疫或治疗药物的激活反应所必需的小分子。细胞因子的信号传导可以调节基因调控、先天免疫反应和适应性免疫反应以及炎症。因此，测量细胞因子产生并确定细胞因子产生的来源对于深入了解免疫反应非常重要。基于微球的流式细胞术检测是测量细胞因子的高效方法，可以使用具有不同荧光强度的混合微球来测量单个样品中的多种可溶性分析物。细胞内蛋白质检测对细胞内蛋白质的检测和分析有助于细胞亚群和细胞过程的额外表征。为分析非细胞表面蛋白质，需要进行细胞固定和破膜。然而，许多磷酸特异性抗体与许多基于去垢剂的常用破膜方法（用于细胞内染色）不兼容。在确定磷酸特异性抗体的适宜固定和破膜方法时，需要特别注意。最常见的方法是用 1.5% 多聚甲醛固定，然后用 100% 甲醇破膜。虽然这种方法适用于多种抗体，但请注意，并非每种磷酸特异性抗体都适用。此外，在异质性样品中鉴定不同的细胞群，需要对表面蛋白连接的磷酸化蛋白进行染色。必须特别考虑这些表位对固定剂的敏感性，并采取相应预防措施，避免损害表位。因此，样品在固定前可能需要对特定的表面标记物进行染色细胞周期分析正常的人体细胞是含有恒定数量 DNA 的二倍体。在细胞分裂的过程中，DNA 合成导致总 DNA 含量翻倍，随后在有丝分裂后恢复正常的 DNA 含量。利用 NovoCyte 流式细胞仪，可以进行详细的细胞周期分析，了解肿瘤细胞分化、细胞转化以及细胞与化合物之间的相互作用。图：在 10 µ g/M MG132 或 500 µ g/M 5-FU 处理 16 小时后，使用 ACEA NovoCyte 流式细胞仪分析 A549 细胞的细胞周期分布。NovoExpress 内置的细胞周期分析模块中的图像显示了处于 G0/G1 期（绿色）、S 期（黄色）和 G2/M 期（蓝色）的细胞。与正常未处理的细胞相比，MG132 处理的细胞停滞在 G2/M 期，而 5-FU 处理的细胞停滞在 G0/G1 期。

随着动物健康理念的深入，大家对爱宠的健康关注度有了极大的提升。兽医师对诊断设备要求也越来越高，动物血液分析仪作为检验科最核心的设备之一，承担的责任也越来越大。SF-Cube 动物血液检测技术平台 激光散射结合荧光染色多维分析技术S-Scatter，散射光，前向、侧向散射光检测细胞大小、复杂程度F-Fluorescence，荧光，侧向荧光检测细胞内核酸物质含量Cube，由散射光和荧光信号组成的三维立体分析技术真正适合于动物血液的分析技术平台，三维分析技术、新一代的荧光染色技术等等，提升了白细胞的分类准确度，能够发现更多的异常细胞例如杆状细胞、有核红细胞，为临床提供更多参考价值。第三代荧光染色技术效果更优 染色技术的发展历程基于人医平台的染色技术用于动物血液细胞染色；升级了白细胞DNA染色的信噪比和网织红细胞测试中RNA的信噪比；基于第二代染色技术结合动物专用SF-Cube平台技术，开发出针对动物白细胞分类和网织红细胞识别的染色技术。染色技术的比较第三代荧光染色技术结合动物专用的SF-Cube平台技术是动物血液分析的最前沿技术，随着动物临床中对检测结果要求不断提高，传统的荧光染色技术在异常样本白细胞分类、网织红细胞计数准确度上结果存在不准确问题。第三代荧光染色技术克服传统技术上的壁垒，让白细胞分类和网织红计数结果准确性更优。淋巴与中性粒区分的更好传统的染色技术，存在淋巴与粒细胞难以区分的问题，导致白细胞分类异常，基于荧光染色3.0技术，在淋巴与中性粒区分度上更好，白细胞分类结果更准确。网织红结果更准在区分动物的再生性和非再生性贫血以及贫血的程度，网织红参数是一个非常重要的评估指标，第一代荧光染色技术在特异性和抗干扰能力上有局限性，影响异常样本的测试结果准确性，不利于动物的临床诊断和治疗。抗干扰好结合核酸后激发光波长为650nm，避免了生物体内源物质和药物荧光分子信号干扰。 特异性好碱基嵌入结合方式等手段，极大提高了RET荧光染料对RNA的识别能力，同时降低了其对DNA的响应, 使得RET检测准度大大提高。高敏感性光学检测系统，全新高特异荧光染液极大提高RET通道检测的性能。

主要特征：功能：血细胞分类计数器设置了四种计数方式(血片、单独巨核、简易骨髓、组化),可对32种细胞计数，功能分：粒／红、髓／红比，粒系总数、红系总数、巨系总数及细胞个数和百分比。采用16*2大字符液晶显示，交直流两种供电方式，方便实用。粒系：原粒、早粒、中粒、晚粒、杆状、分叶、嗜酸、嗜碱红系：原红、早红、中红、晚红、巨早、巨中、日晚、其它1巨系：原始、幼稚、颗粒、产板、裸核、小原、小幼、小巨其它：原始、幼稚、浆、网状、淋巴、异淋、单核、其它2组化：-、+、++、+++、++++ 随着医疗科学技术的不断进步，细胞计数器已经广泛应用于各临床医疗机构。在其为临床提供准确可靠数据的同时，也有许多影响因素使检测结果产生误差，给临床医师的诊断和治疗带来诸多不便。白细胞计数　　白细胞计数假性：　　1、血液采集因素　　血液采集过程中若采血处发生炎症、采血管中抗凝剂的剂量不足、血液和抗凝剂的混合不均匀，导致了标本中血小板的凝聚。处理措施：采血操作要规范，采血管里要有适量的抗凝剂，并且抗凝剂与血液标本要充分混合后再行检测，如果细胞计数器计数再次不准，需重新采血。　　2、气候因素　　由于天气气温较低，血液中的蛋白质发生沉淀出现沉淀小团块，细胞计数器直方图显示血小板右边曲线无下滑趋势。处理措施：保持室内温度适中，标本加温至37℃，行离心，离心后使用等量生理盐水置换血浆，充分混合标本，再行检测。　　3、疾病因素　　①在高脂血症、异常血红蛋白症等疾病中血红细胞无法正常溶解，细胞计数器直方图显示左侧淋巴峰升高。处理措施：将样本稀释两倍进行离心，离心后使用等量的生理盐水置换血浆，然后充分混合样本，再次进行检测，其结果要乘以样本稀释的倍数。　　②如果血液是来自新生儿、溶血性贫血患者，由于幼红细胞的存在，细胞计数器直方图显示淋巴峰双峰。处理措施：放弃细胞计数器，使用显微镜计数。　　③如果血液来自急性失血、脾切除手术后溶血性贫血、真性红细胞增多症、慢性粒细胞性白血病等疾病患者，老中青血小板同时释放参与了机体的血液循环，导致了大型血小板比率。处理措施：放弃细胞计数器，使用显微镜计数。　　白细胞计数假性降低：　　1、气候因素　　由于气候寒冷导致白细胞聚集。处理措施：将样本加温至37℃，充分摇匀后，再用细胞计数器检测。　　2、非气候因素　　白细胞出现聚集，但是与气候原因无关，细胞计数器直方图右侧显示一波峰，标本涂片同时出现凝集。处理措施：将样本加温至37℃，或者使用生理盐水置换血浆，充分混合后重新检测。红细胞计数　　红细胞假性：　　1、红细胞假性绝大部分原因是由人为造成的，标本放置时间过久后发生分层未能充分混合，底部吸样。处理措施：使样本充分混合，可以防止其发生假性升高。　　2、红细胞假性还存在一种原因即患者出现大量脱水时，血液浓缩，红细胞数目增多。处理措施：给予患者补液，脱水症状解决后再用细胞计数器进行检测。　　红细胞计数假性降低：　　红细胞发生凝集时平均红细胞体积值增大，镜下可见凝集小块。处理措施：将样本至于37℃水浴箱加温5分钟后，将样本摇匀，再进行检测。血红蛋白　　血红蛋白假性：　　1、乳糜标本因素　　乳糜标本中由于液体浑浊不清，检测时标本吸光度(OD值)升高，导致了血红蛋白数值假性。处理措施：采用等量的盐水置换血浆，二者充分混匀后再行检测。　　2、白细胞因素　　由于白细胞数目异常(高于100.0×109/L)，检测时标本吸光度(OD值)升高，导致了血红蛋白数值假性。处理措施：用HiCN分光光度测定法测定血红蛋白，比色前要高速离心，取上清液比色。血小板计数　　血小板计数假性：　　1、血液标本中存在血小板、红细胞、细胞碎片、以及由于冷凝集素导致的细胞凝集等，会导致血小板计数假性。处理措施：小细胞会诱发血小板计数结果升高，新型的细胞计数器，建议使用自动设置浮标界限方法的方式来避免误差。对于冷凝集素引起的细胞凝集现象，用37℃水浴约5分钟，进行检测，如仍发现不准确，重新采血检测。　　2、当试剂不合格时，可以影响到血小板的计数，会出现假性升高。处理措施：更换合格试剂后再检测。　　血小板计数假性降低：　　1、血液采集后放置时间过久，这是导致血小板计数假性降低Z常见的原因，由于标本放置时间过久，血小板离开人体一段时间后容易发生变形、自溶等些列反应，细胞计数器漏查导致误差的发生。处理措施：标本采集后及时检测。　　2、采集到血液标本后要与抗凝剂充分混匀，避免血小板由于体积较小，容易粘附于血管破损处及组织，同时发生聚集，导致了血小板计数假性降低。处理措施：采血时要迅速，采集血液后要与抗凝剂充分混合并及时检测。　　3、如有巨大血小板情况发生，血小板计数也会降低。处理措施：使用显微镜进计数。　　综上所述，随着现代医学科学技术的进步和发展，临床检验结果日益成为临床诊断、治疗和抢救中不可缺少的重要依据，化验结果受很多因素的影响，要想取得准确的检验结果就要在实验的每一步骤中认真操作，把人为因素引起的误差降到Zdi。　　根据所有检验工作者的经验，细胞计数器要求专人管理与维护，做血常规检测时尽量选用静脉血，应在2小时内对样本进行测定，每天随机做质控，以消除过失误差，尽量减少偶然误差和系统误差，同时自动进样器检测也要随时观察，包括细胞计数器运行是否正常，是否卡管，是否有结果异常，发现问题及时解决，妥善处理，及时纠正潜在引起检验结果因素的影响，提高检验质量，以提高检验结果的准确性，更好地为临床诊断和治疗服务。细胞培养技术中，细胞计数是一项基本功，对于标准化培养条件以及需要定量的实验来说都关键。这里介绍使用血细胞计数器对细胞进行计数的经典方法以及中间一些需要注意的细节。制备细胞悬液：对于贴壁生长的细胞，我们需要使用胰酶消化的方法使细胞从培养皿表面脱落根据需要加入合适体积的培养基，将细胞进行中和及稀释，以得到均质的细胞悬液。要求尽可能将细胞吹打散开，不要残留任何细胞团准备血细胞计数器：使用70%乙醇将盖玻片和血细胞计数器清洁干净将将盖玻片润湿（使用水或呼一口气，目的是使盖玻片与血细胞计数器接触更紧密，易于粘连），并覆盖至血细胞计数器上台盼兰染色（可选）：如果需要计算细胞的活力，则需要将细胞悬液和0.4%台盼兰等体积混合室温孵育3-5分钟，使台盼兰进入死细胞，使死细胞着蓝色血细胞计数器加样：使用吸管将细胞悬液或细胞/台盼兰混合液滴加到血细胞计数器计数池的边缘。此时液滴将在虹吸的作用下进入盖玻片下方的计数池以同样的方式在另一侧的计数池中也加入细胞悬液将计数板放置几分钟使细胞扩散，同时用吸水纸吸除多余的液体细胞计数：在100倍显微镜下，移动计数板将视野对准计数板的中央大方块，该方块四周有一圈3条平行线包围，中间有密集的网格。中央方块区差不多刚好可以填满整个视野使用手持式计数器记录计数池四个角以及中央方块内的细胞数（1-5号位置，经典的current-protocol推荐每个方块细胞数应不大于20-50），并重复记录另一侧计数池中的细胞数，总计十个方块。计数的方法是只计算上边和左边压线的细胞，而右边和下边压线的细胞不予计算（下图，总体原则是“计上不计下，计左不计右”，判断标准为是否接触三条边线的中间线）。如果有多个细胞没有吹散成团存在，此时只可记为一个细胞。如果团块很多，则可能需要重新吹打甚至消化直至绝大多数细胞为单个细胞