原子吸收光谱仪在制药业功能分析中的应用

智能文字提取功能测试中

制药学功能分析研究中的应用 作为新药品探索过程的一部分，有必要确定和表征离子通道的调节物，这无论是在闭口处还是在敞口处(离子通道是一个整体膜蛋白，它用于调节离子如 Na*， K*和 Ca 穿过细胞血浆膜的通过量)。这类研究通常需要做大量的实验来筛选出无用的药物。 过去，采用许多不同的技术包括荧光(例如Ca"通道)和放射性示踪(Na 采用 22Na 通道，K*通道采用86Rb)来实现以上的筛选。这两类技术都存在问题：荧光法是非直接方法，会因因扰不能精确反映自然水平，而放射性示踪法使用了高能量的同位素，这意味着严重的危险性并需要特殊的安全防范。因此有一种潜在要求，需要一种无安全隐患并可快速进行大量鉴定的健全、可靠和直接的方法。 针对这种要求，采用进行火焰原子吸收法测定 Rb 是近来比较有竞争力的做法。此法具有简易、特定性和快速的优优，并且不包含危险物质。由于自然生物界中不存在Rb，所以使用 Rb 作为示踪物是该方法的基本原理，它包括两部分。第一部分包括培养细胞并以注入 Rb， 随后激发需要研究的通道。第二部分鉴定细胞表层和已溶解细胞碎片中的Rb。1999年由 Terstappen 发表的一篇论文中(参见参考文献1)描述了该程序：细胞在细胞培养皿中培养48小时，然后在37℃下在包含 Rb+的细胞缓冲液中培育4小时。当测试调节细胞活性的物质时，可知这些物质在4小时的最后30分钟中已增加了。采用相似的缓冲液(但以K*代替 Rb*) 冲洗细胞层去除多余 Rb*的示踪离子。然后用 KCL 激话离子通道，并培养10分钟后去除表层液体，再以1%的 Triton X-100 溶解细胞并收集溶解产物。 在波长780.0nm 处以空气/乙炔焰(1.1L/min 乙炔)测定表层液体和溶解产物中Rb 含量。两种溶液均需以电离缓冲剂0.1% m/V Cs+/1% v/v HON3 稀释10-25倍。使用该方法在0-1000ug/L (ppb)浓度之间可得到极好的线性关系和50pg/L 的实际检出限。细胞碎片和使用去垢剂不对测量造成影响。采将溶液转移到自动进样器试管中，可达到每小时 200个样品的测量率。 然后可计算出/) 表层中Rb*的量 ( 表层中的Rb*量+溶解产物中的Rb+量 ) 以下给出结论种类的-一个例子(取自参考文献1中)： 可见， 100uM 的 ATP 激发了 P2X 型接受体中约76%的 Rb*。如图所示，在不同浓度级的苏拉明下，即随着苏拉明量的逐渐增加，此物质的析出会受到抑制。到了1.0mM时基本上阻塞(即当量Rb*达到了一个基本浓度级)。使用100pM的 ATP类似物(a，β亚甲基ATP)和核苷UTP， 如其Rb*析出物量不高于基本浓度级，1以指示无激活现象发生。 通常采用 IC50 图作为介绍表格，此处 IC50采用半最高抑制浓度。以下例子是一个图表实例，说明IC50值为1.1uM的前提下， TEA 在研究的浓度范围内无效果(表层液体中 Rb 量不变)，然而抑制物A却具有强烈影响(表层中 Rb 含量显著下降)。 从该方法中获得的信息使制药公司清楚哪些药物化合物是值得全面研究的。 结论 这些结果显示利用原子吸收法对非放射性Rb+析出物进行测定，是离子通道功能分析(使用Rb+传导率的)的一种高效方法。该方法十分可靠不受干扰，也不存在安全隐患。此外与以前使用的方法相比，采用的设备较为简单，成本也相对较低。 ( 参考文献1. Terstappen， G. C .，分析生物化学，1999年272卷，第 1 49-1 5 5页 )