三磷酸腺苷二钠的水分测定

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广 东 药 学 院 学 报JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY第21卷第2期2005年4月Vol 21 No. 2Apr 2005 广东药学院学报 (ACAD J GCP) 2005，21(2) 三磷酸腺苷二钠的水分测定 佟爱东 邓兆勇 (广州市药品检验所生测室 广东广州510160) 摘 要 目的 测定三磷酸腺苷二钠的水分含量。方法卡尔费休氏法：①采用国产卡氏试剂，以齐(乙二醇甲醇)=60 40为溶剂滴定；②采用进口(双溶液)卡氏试剂滴定。结果两种试剂测定的回收率分别为96.0%，RSD=4 9%(n=10)； 99. 0%，RSD=3.5%(n=11)，样品测得结果相符。结论国产与进口的卡氏试剂均可用于三磷酸腺苷二钠的水分含量测定，方法简便，准确。适用于药品的质量控制。 关键词 三磷酸腺苷二钠；卡尔费休氏法；水分测定 中图号 R9277 文章编号：1006-8783(2005)02-0153-02文献标识码：A Water con tent in adenosine triphospha te disod ium reagent TONG Ai-dong，DENG Zhao-yong (Guangzhou Institu te forDrug Control， Guangzhou 510160， China) Abstract To detemm inate the water content of adenosine tripho sphate disodium reagent by solvent titration Homemade KarlFishcher reagent with glycolmethano1 (40 60) and imported Karl Fischer (Hydranal) reagent (two-discrete solution) were usedand the results compared Average recoveries for homemade reagent titration and imported reagent titration were 96. 0% (RSD=4 9%， n=10) and 99. 0% (RSD=3. 5%， n=11)， respectively Key words adenosine triphosphate disodium； Karl Fischer， water content 三磷酸腺苷(ATP)是存在生物体内的高能量化合物，直接参与能量代谢，作为辅酶有改善机体代谢的作用。药用 ATP为二盐盐，带三个结晶水.三磷酸腺苷二钠质量标准各国药典均无收载。仅日本药局方外医药品规格(1997)卫生部药品标准(1998)4收载。其水分测定日本采用卡氏水分剩余滴定法，部颁标准采用五氧化二磷减压干燥法。本文参照日本药局方外法，建立三磷酸腺苷二钠的费休氏滴定法，方法简便、准确，适合于日常检验控制产品质量。 仪器与试药 瑞士万通(Metrohm)785滴定仪配703型卡氏水分滴定台，日本岛津(Shimadzu L ibror AEU-130)电子天平。卡氏试剂(天津四友 KFR-06无比吡啶卡尔费休试剂)、无水甲醇、乙二醇。德国产(Sigma-Aldrich)卡试试剂(Hydranal1Solven、 HydranalTitrant)均为市售。 三磷酸腺苷二钠原料：日本协和发酵株式会社进口(批号：K930529、K320470、K330501)；意大利 ( 作者简介：佟爱东，女，学士，副主任药师。 ) ( 研究方向：生化药品的检验。 ) Pro. Bio. Sint厂生产(批号：03/01901、03/02001、03/02101)；江门甘蔗化工(集团)股份有限公司提供(批号：20030303、200304011)；上海太平洋高科技有限公司提供(批号：200306041、200307053)。 2 实验方法与结果 2.1 方法(一) 2.1.1 卡氏试剂(天津四友)的标定 取(Z乙二醇甲醇)=6040混合溶液40 mL置滴定杯中，开启滴定仪自动用卡氏试剂消除溶剂中的水分，达平衡后，精密称取蒸馏水20mg加入滴定杯中，用卡氏试剂滴定至终点。重复数次，以水重与消耗的卡氏试剂mL数计算滴定度为3.1994(RSD=1 0%，n=3)。 2.1.2 回收率的测定 取(乙乙醇甲醇)=60： 40混合溶液40mL，置滴定杯中，滴定仪自动用卡氏试剂消除溶剂中的水分，达平衡后，精密称取意大利Pr. Bio Sint厂生产批号为03/02001的样品约100mg，充分溶解后，用卡氏试剂滴定至终点，计算含水量为8.05%、7.45%、8.18%，平均=7.89%(RSD=49%，n=3)。同法，取中(乙醇醇甲醇)=6040混合溶液 40 mL，精密称取该样品适量和蒸馏水 10mg充分溶解后，用卡氏试剂滴定至终点，计算回收率，结果见表1. 表1 方法(一)回收率的测定结果 Tab1 Recovery of hom emade reagent titration m/mg 样品 水量 理论值 V(卡氏试剂)/ 测得 回收率/ mL 水量 % 69.6 10.0 15.49 4.408 1410 91.0 67.6 10.0 15.33 4.801 15.36 100.2 54.5 10.0 1430 424 13.58 95.0 104.4 10.0 18.24 5.396 17.26 94.6 115.6 10.0 19.12 5.699 18.23 95.3 1028 10.0 18.11 5.623 17.99 99.3 108.7 10.0 18.58 5.764 18.44 99.2 153.8 10.0 22. 13 6.538 20.92 945 148.3 10.0 21.70 6.478 20.73 95.5 115.6 10.0 19.12 5.699 18.23 95.3 x=960%；RSD =2 9%(n=10) 2.1.3样品的测定： 取(乙二醇甲醇)=6040混合溶液 40 mL，精密称取样品约100 mg依法测定。结果见表3。 2.2方法(二) 2.2.1卡氏试剂的标定 取 Hydranal Solvent溶剂40mL置滴定杯中，开启滴定仪用 Hydranal-Titrant卡氏试剂自动消除溶剂中的水分，达平衡后，精密称蒸馏水20mg加入滴定杯中，用卡氏试剂滴定至终点。重复数次，以水重与消耗的卡氏试剂 mL数计算滴定度为4.6556(RSD=0.4%n=4)。 2.2.2回收率的测定取 Hydranal Solvent溶剂40mL，置滴定杯中，滴定仪自动用卡氏试剂消除溶剂中的水分，达平衡后，精密称取意大利 Pro. Bio Sint厂生产批号为03/02001的样品约100mg，充分溶解后，用卡氏试剂滴定至终点，计算含水量为7.35%、7.03%、7.92%，平均=7.43%(RSD =6 1% n=3)。同法，取 Hydranal Solvent溶剂 40 mL，精密称取该样品适量和蒸馏水 10mg充分溶解后，用卡氏试剂滴定至终点，计算回收率，结果见表2。 表2方法(二)回收率的测定结果 Tab. 2 Recovery of i ported reagent titration m /mg 样品 水量 理论值 V(卡氏试剂)/ 测得 回收率/ mL 水量 % 62.8 10.0 14.67 3.279 15.27 1041 65.0 10.0 14.83 3.156 14.69 99.1 422 10.0 13.15 2837 13.21 100.4 92.3 10.0 16.86 3.405 15.85 94.0 114.2 10.5 18.99 4198 19.54 1029 110.8 10.0 18.23 3.751 17.46 95.8 110.4 10.0 18.20 3.879 18.06 99.2 106.3 10.0 17.90 3.866 18.00 100.6 163.4 10.3 22.44 4.899 228 101.6 155.8 10.3 21.88 4.643 21.62 98.8 150.8 10.0 21.20 4.233 19.70 93.0 x=99 0%； RSD =3. 5%(n=11) 2.2.3 样品的测定 取 Hydranal Solvent溶剂 40mL，精密称取样品约100mg依法测定。结果见表3. 表3 样品测定结果 Tab 3 Detection results of the sample 厂家 批号 方法一 方法二 w/%RSD/% w/%RSD/% 日本协和 K330501 8.4 4.5 9.9 4.3 K930529 8.6 6.8 8.0 0.5 意大利 K320470 9.6 7.0 9.9 5.7 03/01901 9.0 6.6 8.2 5.7 03/02001 7.9 4.9 7.4 6.1 03/02101 7.6 8.9 8.4 3.2 江门甘化 20030303 10.3 6.0 9.0 2.3 200304011 9.3 5.9 8.1 9.0 上海太平洋 200306041 7.9 9.2 9.9 6.9 200307053 7.9 4.8 10.8 7.8 3讨论 3.1：方法的选择 三磷酸腺苷二钠结构上含有3个结晶水，理论含水量为8.9%，该品有吸湿性。部颁标准采用五氧化二磷减压干燥法测定，不易将全部水分蒸发除掉，只能测出约7%含水量。日本采用卡氏水分剩余滴定法：将样品放入溶剂中，准确加入一定量的卡氏试剂充分溶解、反应后，用标准水溶液滴定剩余的卡氏试剂。该法优点在于能保证卡氏试剂与样品所含水充分反应，但方法繁琐，耗时。中国药典二部2000年卡氏水分测定法中没有收载剩余滴定法。 3.2卡氏试剂的影响 Karl Fischer于1935年报道测定水含量的新方法至今，该方法得到了广泛的应用，卡氏试剂也在不断改良。商品化卡氏试剂有单一溶液和双溶液交61。天津四友生产的无吡啶卡氏试剂为单溶液，含碘、二氧化硫、有机碱与甲醇，为中国药典2000年版二部附录收载方法。三磷酸腺苷二钠在甲醇中溶解度低，参照日本药局方外医药品规格(1997)三磷酸腺苷二钠水分测定方法，加乙二醇作为助溶剂，乙二醇甲醇体积比为6040。德国 (SigmaA ldrich)产卡氏试剂为双溶液：HydranalSolvent 为溶剂， Hydranal-Titrant为滴定剂。Hydranal Solvent溶剂由咪唑、二氧化硫与甲醇组成，Hydranal-Titrant 滴定剂由碘与甲醇组成。由于含有机碱咪唑三磷酸腺苷二钠在 Hydranal Solvent溶剂中可溶解，直接测定。表3所示，两种试剂的测定结果基本一致。 (下转第157页) 样品测定时，称样量为150.00mg。如前所述，样品称量引起的不确定度主要是分析天平校准不确定度，则供试品称样量m，相对标准不确定度U(m，)=0.01/(150.00 k)=3.8×10。 2.2.2.3 体积V 滴定样品时，由于滴定体积的重复性已经在重复性引入不确定度已经考虑，标定溶液与供试品测定应严格控制温度并保持一致性，可认为温度产生的标准不确定度可忽略不计。因此，同样仅需考虑体积校准的不确定度，因而U(V)=U(V-) =0.00086. 2.3 滴定样品的合成不确定度 同样，按下式计算非水滴定样品的合成相对标准不确定度 2.4 扩展不确定度 已知标定时的消耗滴定液体积为8.30mL，根据浓度计算公式，得标准溶液的浓度 Gucp==0.1032mol/L，已知滴定样品消耗滴定液体积7.15mL，根据含量计算公式，得盐酸麻黄碱的含量为99.21%。因此，合成标准不确定度U(CHON·HCl))=99.21%X0.00143=0.142%。取包含因子k=2(置信概率约95%)，含量测定扩展不确定度为2×0.14%=0.28%，含量测定结果可表示为：(99.21±028)%(k=2)。 (上接第154页) 3.3取样量日由于三磷酸腺苷二钠含水量大，取样量应为50~100 mg。 取样量大，消耗卡氏试剂多，滴定时间长；取样量少，相对误差大。 3.4搅拌速度 测定时应注意一致。大力、均匀，使供试品充分溶解。可设制程序，加样品后强搅拌10~15min再滴定。搅拌速度对测定的结果影响大，磁搅拌指示为3时，测得某一样品含水量为7.6%；而采用磁搅拌指示为7时，测得其含水量则变为8.5%。 ( 参考文献 ) 3 总结 3.1 需要指出的是，实际上终点判断对滴定体积的影响是不可忽略，因为操作者对颜色判断差异也会引起误差，滴定不到终点或过量均会引入终点体积的不确定度，据文献[1]约为 0.0002。 3.2 HCI4由基准试剂 KHP标定。KHP的有效成分，即与其分子总数有关的自由质子的数目，使标定的 HCD溶液的浓度可溯源至SI国际单位制。由于 HCD溶液的浓度是由 KHP来测定，而不是直接计算得到，因此不需要与HCD4的分子量或其质量有关的不确定度来源信息。 3.3确定各主要不确定度来源，了解其对被测量及其不确定度的影响，是分析测定的不确定度评估中最困难的，因为一方面有些不确定度来源可能被忽略，另一方面有些不确定度来源可能会被重复计算。 3.4 由于冰醋酸随温度升高而膨胀，体积变化较大。如在滴定供试品时与标定时温度有差别，则应重新标定或作浓度校正。若温度相差在±10℃内，需对滴定液的浓度进行校正，此时应考虑温度不确定度分量的影响。 3.5 滴定体积的不确定度分量是最大的，其次是重复性。称量过程和基准试剂的纯度处于同一数量级。 ( 参考文献 ) ( [1]国家技术监督局.中华人民共和国国家计量检定规程 (容量仪器)[M].中国标准出版社，2000.4-6. ) ( (2004-12-10收稿；2005-04-06修回) ) ( 北京：人民卫生出版社，2003.639. ) ( [2]李良铸，由永金，卢盛华著.生化制药学[M].北京：中国 医药科技出版社，1991.231. ) ( [3]日本药局方外医药品规格 [S]. 1 997.227-229. ) ( [4]中华人民共和国卫生部药品标准二部(第六册.生化药 品第一分册)[S].1998.1-2 ) ( [5]马广慈.水分测定法的近期进展[J].药物分析杂志， 1984，4(2)：120. ) ( [6]USP25[S].2000.2085-2 0 86. ) ( (2005-01-03收稿；2005-03-08修回) ) Tsinghua Tongfang Optical Disc Co.， Ltd.All rights reserved.