口香糖中抗氧化剂检测方案

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实验 用Agilent 1120一体式液相色谱仪 ，分析口香糖中的抗氧化剂 应用报告 Angelika Gratzfeld-Huesgen 摘要 安捷伦仪器： 1120一体式液相色谱仪 EZChrom Elite Compact 软件 HC-C18(2)柱 Agilent 1120一体式液相色谱仪是常规分析型液相色谱的一种选择。它是-款使用方便、性能可靠的整机式液相色谱仪。其优越的性能使之能对所分析的化合物可获得高精确度的保留时间和峰面积，以及低检出限，尤为适合抗氧化剂的分析。本应用报告中的数据表明： 应用领域： ·保留时间精确度小于 0.07% RSD 食品质量与控制 ·基线分离峰的峰面积精确度小于0.3% RSD ·全部所测抗氧化剂的检出限均低于1到75 ng。 食品行业广泛使用抗氧化剂。例如，饼干、水果蛋糕、糖果、核桃，以及口香糖中都使用丁羟基茴香醚(BHA)。已经证明使用这类化合物不安全，所以，法规限定了其在食品中的最大许可浓度。婴儿食品中不能添加某些抗氧化剂，如BHA，因为它们影响维生素D的摄取。BHA对血清脂肪和胆固醇水平也有负面影响。 在本研究中，我们分析了8种抗氧化剂，并测定了其保留时间和峰面积的精确度。另外，还测定了这些化合物的检出限(LOD)。检测了实际口香糖样品中BHA的水平。 仪器 · Agilent 1120一体式液相色谱仪包括配有脱气机的梯度泵、带样品盘的自动进样器、柱温箱和可变波长检测器，见图1。 ·Agilent HC-C18(2)， 高碳载量，150x4.6 mm，5um粒径柱 ( ·Agilent EZChrom Elite Compact 软件 ) 色谱条件 ·流动相： A：水+0.045%TFA B：乙腈+0.045%TFA ·梯度：10到90%B，15分钟 ·流速：1.5mL/min ·进样量：5uL 。柱温：40°C ·检测波长：260nm 峰宽：>0.0025 min 响应时间：0.06s 1.维生素C 2. 没食子酸丙酯 (PG) ( 3.2，4，5-三羟基苯丁酮 (THBP) ) ( 4. 特丁基对苯二酚 (TBHQ) ) 5.丁羟基茴香醚(BHA) ( 6. 4-羟甲基-2.6 - 二(特丁基)苯酚 (ionox 100) ) ( 7. 丁基羟基甲苯(BHT)8.抗坏血酸棕榈酸酯(ACP) ) 结果与讨论 我们选择8种抗氧化剂测定了保留时间和峰面积的精确度，还对检出限进行了评价。采用常规色谱条件，流速1.5mL/min，15分钟梯度洗脱，所有化合物均得到了良好分离，见 图2. ( 表1列出了本研究中所用的浓度水平。用1：10稀释溶液测定保留时间和峰面积的精确度。结果见表2。 ) 图1 Agilent 1120一体式液相色谱仪 图2 上图一抗氧化剂标准品，1350-200ng，1：10稀释 下图一抗氧化剂标准品， 135-20ng， 1：100稀释 甚至对于那些峰高小于或等于20 mAU的色谱峰，峰面积精确度也小于0.3%，结果非常好。维生素C(峰1)的峰面积精确度因该化合物在溶液中不断分解而受到影响。ACP (峰8)的精确度受ACP峰前干扰峰的影响。这两个峰没有完全分开，在12 mAU 左右定量不如其它完全分离的化合物好。 色谱峰 化合物 储备液 mg/10 mL 1：10 稀释 进样5pL 1：100 稀释 进样5 pL (每次进样 ng) (每次进样ng) 1 维生素 C 20 1000 100 2 PG 21 1050 105 3 THBP 15 750 75 4 TBHQH 21 1050 105 5 BHA 11 500 50 6 lonox100 14 700 70 7 BHT 27 1350 135 8 ACP 4 200 20 表1 所分析的抗氧化剂的浓度水平 所有化合物的保留时间精确度(RSD)小于0.05%。图3显示了6次连续分析的叠加色谱图。 用1：100稀释溶液的色谱图计算检出限，见图2，结果列于表3. 色谱峰 化合物 保留时间 峰面积 峰高 3 % RSD %RSD (mAU) 维生素C 0.04 2.01* ~200 PG 0.03 0.08 ~400 THBP 0.02 0.12 ~200 TBHQH 0.01 0.23 <25 BHA 0.02 0.21 <15 lonox 100 0.01 0.10 <20 7 BHT 0.01 0.26 <50 8 ACP 0.01 1.74** ~12 表2 保留时间和峰面积精确度(*分解；**干扰峰影响积分) 色谱峰 化合物 S/N=3 1：100 稀释溶白的检出限 (ng) 维生素C 2 PG 3 THBP 4 TBHQH 5 BHA 6 lonox100 7 BHT ACP 2 表3 图3 抗氧化剂的检出限(*快速分解使测定困难) 6次连续进样的色谱图重叠 用本研究所建立的方法测定了口香糖中的BHA含量。图4显示了标准品和口香糖提取物的色谱图。为了看得更清楚，在图5中将图4中9到13分钟部分的色谱图放大显示。样品的制备是将14.1 g无糖口香糖切成小块，用乙腈在超声水浴中提取30分钟。其它条件见图1。1g口香糖可以测出25 ppb BHA。由于没有测定回收率，这只是个相对值。 结论 用Agilent 1120一体式液相色谱仪分析了抗氧化剂。用该仪器分析这些化合物可以达到很高的精确度。保留时间精确度小于0.05% RSD，基线分离峰的峰面积精确度RSD小于0.3%。检出限均小于75 ng， 维生素C和没食子酸丙酯的检出限小于1 ng。对实际样品的分析中，1g口香糖经过在超声水浴中用乙腈提取，检测到了25 ppb 的BHA。 Angelika Gratzfeld-Huegen是安捷伦科技公司在德国Waldbronn的应用化学家 www.agilent.com/chem/1120：in C 2007 安捷伦科技公司 2007年10月1日印刷发行号5989-7456CHCN 图4 上图一口香糖提取物，下图一抗氧化剂标准品 图5 图4的放大显示，口香糖提取物(上图)和10.55分钟处的BHA， 相当于25 ng/g 或25 ppb ...Agilent Technologies