秦皮的活性成分中天然产物检测方案(制备液相色谱)

智能文字提取功能测试中

组分D3的二维制备 快速 多组分自动化 制备型二维液相色谱 Preparation 2D-LC System 植物提取物全组分纯化 For the total isolation of natural products extract 药物杂质多组分纯化 For the purificat of pharmaceutical impurities 苏州汇通色谱分离纯化有限公司 Soochow High Tech Chromatography CO.，LTD INTRODUCTION 企业介绍 苏州汇通色谱分离纯化有限公司是一家以自主知识产权技术和产品为核心，具有独立研发能力的高新技术企业。主要以药厂、生物制品企企、高纯度化学制品企业、质量鉴定单位、大学、科学研究机构、生物技术公司为目标客户，提供高效、高选择性制备色谱分离柱产品；高纯度产品色谱纯化工程设计以及高纯度产品纯化服务。 OUR ADVANTAGE 企业优势 专业：是一家以自主知识产权技术和产品为核心，具有独立研发能力的高新技术企业。 求实：拥有一支由多名教授、博士和硕士组成的技术服务团队和技术成果转换产品。 开拓：为客户提供高科技纯化产品，共纯度化学品和生物制品以及提纯系统解决方案。 创优：我们将中西方先进的技术和国内的实际水平相结合，成功的把理论和实践结合。 ABOUTUS 关于我们 2D-LC简单原理： 特点： 1.集样品的净化与浓缩及分离测定于一体，能起到样品预处理的作用，分析柱受到的污染少，而且大大减少了溶剂用量，避免大量样品的手工前处理工作，可以直接进样分析，加快了分析速度； 2.进样量大，灵敏度高，适合做大量样品的痕量分析； 3.联用降低样品损失和遭受污染的风险，消除了水蒸气及光照的负面影响，提高方法的可靠性和重要性； 4.能从复杂的多组分中排除干扰物质，有选择性的针对感兴趣组分分析； 5.容易实现自动化。 应用条件： 1.样品组分必须被两种或两种以上的色谱模式分离。这些分离维应该显示出不同的选择性； 2.经一种模式分离的样品组分不应该在其后续的分离维中被混合。 制备备 2D-LC 设备流程图： 第一维和第二二维分离模式的分离-富集原理如图所示。该装置的第一维分离可以将复杂的天然产物分离成18个可重复获得的组分或有效部位，第二维分离使其进一步分离，得到单体化合物，全部的分离工作在计算机控制下，极大地提高了系统性分离制备的效率，为植物提取物全组分纯化，药物杂质多组分纯化提供了高效、可靠的平台。 植物提取全组分纯化 植物提取物化学成分组成极为复杂，建立一种高效、高通量、系统性地分离制备植物提取物的方法是植物提取物全组分纯化的先决条件。传统的色谱分离方法对于复杂的植物提取物体系存在色谱分辨率低、峰容量低、样品峰重叠等一系列问题，难以实现高通量、系统性的分离制备。而二维色谱的分离制备因为其良好的正交性、更高的峰容量、较高的分辨率和高通量等特点，具有广阔的应用前景。 应用实例 葛根中葛根异黄酮的分离纯化 葛根 (Radix puerariae) 是《中国药典》(1995年版)收载的原植物葛根或粉根的干燥根，2000年正式被国家卫生部批准为药食两用植物，可用于新型中药和功能性保健(食)品的研究和开发。葛根主要药理活性有效成分是异黄酮，具有防治和改善心脑血管疾病、抗氧化、抗肿瘤、护肝、解酒、益智、调节内分泌系统等功能，另外葛根异黄酮也有类似大豆黄酮的大豆苷、染料木素苷等糖苷和苷元，葛根质量通常以葛根素等异黄酮的含量作为主要评价标准。本实验以葛根提取物为对象，以 2D-LC为手段，高通量、系统性的分离制备葛根异黄酮化合物。 图一葛根提取物分析色谱图(分析色谱柱： C18-P(5um， 4.6mm×150mm)；流动相A： 0.1%甲酸水溶液；流动相B：0.1%甲酸甲醇溶液；流速：：11.0mL/min；柱温：25℃；梯度洗脱：0-50min， 5%B-95%B；检测波长：254nm。) 图二葛根提取物的一维分离样品色谱图(制备色谱制：C18(49mm×460mm， 10um)；流动相A：0.1%甲酸水溶液；流动相B：0.1%甲酸甲醇溶液；流速：30.0mL/min；梯度洗脱：0-50min，5%B-95%B；检测波长：254nm。) 组分F6的二维制备 图三葛根提取物组分6的二维分离色谱图(二维制备条件与一维相同) 过二维分离纯化之后，得到3-羟基葛根素，葛根素，3-甲氧基葛根素，大豆苷，大豆苷元，染料木素等，纯度均超过90%。 应用实例 利拉鲁肽化学成分的分离纯化 利拉鲁肽作为一种新型长效 GLP-1类似物，与人 GLP-1 具有97%的序列同源性，人 GLP-1可以结合并激活 GLP-1受体。GLP-1受体为天然 GLP-1 的靶点， GLP-1是一种内源性肠促胰岛素激素，能促进胰岛β细胞增生和分化，明显保护并改善胰岛β细胞功能。本实验以利拉鲁肽粗品为对象，以2D-LC为手段，高通量、系统性的分离制备利拉鲁肽粗品中化学成分。 t/min 图一利拉鲁肽粗品色谱图(分析色谱柱： MultoHigh-BIO 300-5 C4 (4.6mm×250mm， 5um)；流动相： (A)100mM磷酸二氢铵(pH3.7)：乙腈=900：100(B)乙腈：水=800：200；流速：1.0mL/min；梯度洗脱：0-5min， 50-50%B； 5-35min， 50-80%B； 35-40min， 80-80%B；检测波长：215nm。) 图二一维制备色谱图(制备色谱柱： HT-0DS-P-5(20mm×250mm，5um)；流动相：(A)100mmol碳酸氢钠缓冲盐：乙腈=90：10 (B) 100mmol碳酸氢钠缓冲盐：乙腈=50：50；流速：20mL/min；梯度洗脱：0-30 min， 30-40%B；检测波长：215nm。) 图三组分D3二维制备色谱图(二维制备条件与一维相同) 过二维分离纯化之后，得到9个纯度超过95%的组分。 药物杂质多组分纯化 根据ICHQ3A的要求，当原料药最大日剂量大于2g/天，杂质的鉴定阈值为0.05%；当原料药最大日剂量小于等于 2g/天，则该杂质的鉴定阈值为0.1%或日摄入量1.0mg(以较低者为准)。因此在进行药物质量研究过程中，经常需要对未知杂质进行定性处理，而定性一般需要使用高分辨质谱仪去研究，那么得到药物杂质的纯品是十分有必要的。 应用实例 多粘菌素的分离纯化 多粘菌素(polymyxin) 是发现于多粘杆菌 (Bacillus polymy xa) 培养液中的抗菌性多肽，有A、B、C、D、E等五种。抗菌谱相互类似而范围宽广，特别对革兰氏阴性细菌作用颇强，毒性较弱。本实验以多粘菌素为对象，，以2D-LC为手段，对其中的杂质进行分离纯化。 图一多粘菌素分析色谱图(分析色谱柱：依利特 Supersil (200mm×4.5mm， 5um)；流动相： (A)30mM 硫酸钠缓冲溶液(pH=2.3)(B)乙腈；流速：1mL/min；等度洗脱：80%A-20%B；检测波长：210nm。o t/min 图二一维制备色谱图(制备色谱柱： C18(250mm×30mm， 10um)；流动相： (A)30mM硫酸钠缓冲溶液(pH=2.3)(B)乙腈；流速：24mL/min；等度洗脱：80%A-20%B；检测波长：210nm。) 组分D1的制备 图三D1二维制备色谱(制备色谱柱： C18色谱柱(250mm×20mm)；流动相：(A)30mM硫酸钠缓冲溶液(pH=2.3) (B)乙腈；流速：20mL/min；等度洗脱：80%A-20%B。检测波长：210nm。) 11个一维组分进行二维分离后得到9个组分，其中有4个化合物纯度达到90%以上，5个化合物纯度达到95%。 苏州汇通色谱分离纯化有限公司 地址：：江苏省苏州市工业园区星湖街218号生物纳米园A2楼112室 电话：0512-68322217 传真：0512-68322067-802 邮箱：sales@huitongsepu.com 网址： http：//www.huitongsepu.com 制备型液相色谱系统应用于秦皮中活性成分的分离纯化制备型二维液相色谱系统 HT-2D-LC产品特点：1、集样品的净化与浓缩及分离测定于一体，能起到样品预处理的作用，分析柱受到的污染少，而且大大减少了溶剂用量，避免大量样品的手工前处理工作，可以直接进样分析，加快了分析速度；2、进样量大，灵敏度高，适合做大量样品的痕量分析；3、联用降低样品损失和遭受污染的风险，消除了水蒸气及光照的负面影响，提容易实现自动化。HT-2D-LC应用条件 1.样品组分必须被两种或两种以上的色谱模式分离。这些分离维应该显示出不同的选择性；2.经一种模式分离的样品组分不应该在其后续的分离维中被混合。二维液相色谱是将两种分离机理不同而又相互独立的液相分离模式串联起来构成的分离系统。样品经过第一维的色谱柱进入接口中，通过浓缩、捕集或切割后被转移进入第二维色谱柱及检测器中。根据不同的分离目的，正相色谱（RPLC）、离子交换色谱（SEC）、亲和色谱（HT  HT-2D-LC优化分离制备条件，应用该方法一次可获得40个以上的单体化合物，分离效果显著、分离效率高、较常规制备液相系统而言速度更快，相应组分经二次分离后纯度高；全部的分离工作在计算机控制下完成，极大地提高了中药等天然药物系统性分离制备的效率。为样品中有机高分子化合物的制备分离、活性筛选提供了高效、可靠的平台。案例分离谱图：本案例以秦皮为对象，以自主研发的HT-2D-LC制备型二维液相色谱系统优化分离制备条件，应用该方法一次可获得40个以上的单体化合物，分离效果显著、分离效率高、较常规制备液相系统而言速度更快，相应组分经二次分离后纯度高；全部的分离工作在计算机控制下完成，极大地提高了中药等天然药物系统性分离制备的效率。为样品中有机高分子化合物的制备分离、活性筛选提供了高效、可靠的平台。