小麦种子中淀粉酶活性检测方案(紫外分光光度计)

智能文字提取功能测试中

美析仪器MACYLAB INSTRUMENTTEL-400-616-4686 TEL-400-616-4686 淀粉酶活性的测定实验方案 原理α-淀粉酶及β-淀粉酶，名各有其一定的特性，如β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下则发生钝化，通常提取液同时有两种淀粉酶存在，测定时，，可根据它们的特性分别加以处理，钝化其中之一，-，即可测出另一酶的活性。将提取液加热到70℃维持15分钟以钝化β-淀粉酶，便可测定α-淀粉酶的活性。或者将提取液用 pH3.6之醋酸在0℃加以处理，每钝化α-淀粉酶的活性，：，以测出β-淀粉酶的活性。淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3，5-二硝基水杨酸试剂测定。由于麦芽糖能将后者还原生成3-氨基-5-硝基水杨酸的显色基团，在一定范围内其颜色的深浅与糖的深度成正比，故可求出麦芽糖的含量，以麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。 实验材料仪器及试剂 1、实验材料：萌发的小麦(芽长1厘米左右) 2、仪器：离心机； 恒温水浴； 美析 UV1700分光光度计。 3、试剂： (1)1%淀粉溶液； (2)0.4N NaOH； (3) pH5.6的柠檬酸缓冲液：A、称取柠檬酸20.01克，溶解后稀释至1升；B、称取柠檬酸钠29.41克，溶解后稀释至1升。取A液13.7毫升与B液26.3毫升混匀，即为 pH5.6之缓冲液。 (4)33，5-二硝基水杨酸：精确称取3，5-二硝基水杨酸1克溶于20毫升1N氢氧化钠中，加入50毫升蒸馏水，再加入30克酒石酸钠，待溶解后，用蒸馏水稀释至100毫升，盖紧瓶塞，勿使二氧化碳进入。 (5)麦芽糖标准液：称取麦芽糖 0.100克溶于少量蒸馏水中，仔细移入100毫升容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。 操作步骤 1、酶液的提取： 称取2克萌发的小麦种子(芽长1厘米左右)，至研钵中加一克石英砂，磨成匀浆倒入25毫升具塞刻度试管中，用蒸馏水稀释至刻度，混匀后在室温(20℃)下放置，每隔数分钟震荡一次，放置15-20分钟，离心，取上清液备用。 上海美析仪器有限公司 2、α-淀粉酶活性的测定： (1)取试管4支，注明两支为测定管。 (2)于每管中各加酶提取液1毫升，在70℃恒温水浴中((水温度的变化不应超过±0.5℃)准确加热15分钟，在此期间β-淀粉酶受热而钝化，取出后迅速在自来水中冷却。 (3)在试管中各加入1毫升 pH5.6柠檬酸缓冲液。 (4)向对照管中加入4毫毫0.4N氢氧化钠，J)以钝化酶的活性。 (5)将测定管和对照管置40℃(±0.5℃)恒温水浴中保温15分钟，再向各管分别加入40℃下预热的淀粉溶液2毫升，摇匀，立即放入40℃水浴中准确保温5分钟后取出，向各测定管迅速加入4毫升 0.4N氢氧化钠，以终止酶的活动，然后准备下步糖的测定。 3、α-淀粉酶及β-淀粉酶总活性的测定： 取上述酶液2-6毫升，放入容量瓶中，用蒸馏水稀释至100毫升(稀释程度视酶活性大小而定)混合均匀后，取4支试管，，各加入稀释之酶液1毫升及1毫升 pH5.6之柠檬酸缓冲液。以下步骤重复α-淀粉酶的第(4)及((5)的操作，同样准备糖的测定。 4、麦芽糖的测定： (1)取25毫升刻度试管7个，编号，分别加入麦芽糖标准液彳((1毫克/毫升)0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.0毫升，置沸水浴中准确煮沸5分钟，取出冷却，用蒸馏水稀释至25毫升，用分光光度计在520nm 波长下进行比色，记录消光值，以消光值为纵坐标，以麦芽糖含量为横坐标绘制标准曲线。 (2)样品的测定：取以上各管中酶作用后的溶液及对照管中的溶液各2毫升，分别放入25毫升具塞刻度试管中，再加入2毫升3，5-二硝基水杨酸试剂，混匀，置沸水中准确煮沸5分钟，取出冷却，用蒸馏水稀释至25毫升，混匀。用分光光度计在520nm 波长下进行比色，记录消光值，从麦芽糖标准曲线中查出麦芽糖含量，然后进行结果计算。 计算结果表示 C-粉酶水解活性[麦芽糖(毫克)/鲜种(克)-5分钟]=(A-A)x样品稀体总体积样品重(克)×C (c+J)-淀粉酶总活性[麦芽糖(毫克)/鲜种(克)-5分钟]=(B-B')×样品稀释总体积样品重(克)xCA 一-淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖(在标准曲线上查得值)+ A--α-淀粉酶的对照管中麦芽糖量+ B 一(a+日)--淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖量+ B -(a+B)--淀粉酶的对照管中麦芽糖量+ C 比色时所用样品液毫升数+ 仪器参数 PROFESSIONAL SPECTRUM INSTRUMENT MANUFACTURER UV-1700 UV-1700A UV-1700S 3333 上海美析仪器有限公司 关于我们 上海美析仪器公司简介 上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。 美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，L，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。 上海美析仪器有限公司 (美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了 CE 认证、FCC 认证、RoHS 认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等) 上海美析仪器有限公司 α-淀粉酶及β-淀粉酶，各有其一定的特性，如β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化而α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下则发生钝化，通常提取液同时有两种淀粉酶存在，测定时，可根据它们的特性分别加以处理，钝化其中之一，即可测出另一酶的活性。将提取液加热到70℃维持15分钟以钝化β-淀粉酶，便可测定α-淀粉酶的活性。或者将提取液用pH3.6之醋酸在0℃加以处理，钝化α-淀粉酶的活性，以测出β-淀粉酶的活性。淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3，5-二硝基水杨酸试剂测定。由于麦芽糖能将后者还原生成3-氨基-5-硝基水杨酸的显色基团，在一定范围内其颜色的深浅与糖的深度成正比，故可求出麦芽糖的含量，以麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。