饮料和果冻中11种合成着色剂检测方案(样品前处理)

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食品中11种合成着色剂的固相萃取方法（Copure®WAX） 着色剂具有改善食品色泽、增进人们食欲的作用，因其成本低、色泽鲜艳、着色力强、稳定性好等特点，在食品生产加工行业中被广泛应用。但食用合成着色剂常以苯、甲醛等化工产品为原料, 经磺化、卤化等化合而成，易混入有毒有害物质,有潜在的毒 性和致癌性。因此，各国对食品中合成着色剂的使用范围和使用限量都有严格的规定，GB 2760—2014《食品添加剂使用卫生标准》明确严格规定了合成色素的使用限量和范围。本实验开发了不同样品基质中合成着色剂测定的固相萃取方法，本法操作简便，回收率好，满足检测要求。 一、样品提取 1.1 液体及部分固体试样（饮料类、果冻等） 称取试样2 g于50 mL离心管中，加入25 mL乙醇氨水溶液，涡旋1 min，50 ℃超声提取15 min，8000r /min离心5 min，取上清液置于50 mL离心管中，加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，混匀后得提取液。准确吸取提取液10 mL，50 ℃下氮气浓缩至2 mL左右，加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，混匀作为待净化液。 1.2 含油量较大的试样（糕点、酱卤肉、薯片等） 称取试样2 g于50 mL离心管中，加入20 mL石油醚，涡旋1 min，涡旋振摇10 min，以8000r /min离心5 min，弃去上清液，除尽石油醚溶剂，加入25 mL乙醇氨水溶液至除油试样中，涡旋1 min，50 ℃超声提取15 min，8000r /min离心5 min，取上清液置于50 mL离心管中，加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，混匀后得提取液。准确吸取提取液10 mL，50 ℃下氮气浓缩至2 mL左右，加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，混匀作为待净化液。 乙醇氨水溶液：无水乙醇700mL，氨水4mL，用水稀释定容到1L，混匀即得。 二、样品净化（Copure® WAX, 150 mg/6mL） 活化：固相萃取柱依次用6mL甲醇和6mL水活化； 上样：将上述待净化液过柱，弃掉流出液； 淋洗：依次用6 mL水和6ml甲醇淋洗，抽干小柱； 洗脱：6 mL 2%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于45 ℃氮吹仪浓缩至0.3 mL左右，加入乙酸铵溶液（pH=9.0）复溶至2mL，涡旋混匀，过PTFE滤膜，上机。 乙酸铵溶液（pH=9.0）:称取1.54g乙酸铵，加水溶解并定容至1000mL,加氨水调pH=9.0. 三、仪器条件 仪器：液相色谱仪，ThermoFisher U3000 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm) 流动相：A：0.02mol/L乙酸铵溶液 B：甲醇 洗脱方式：梯度洗脱，见表1 流速：1.0 mL/min 柱温：30 ℃ 进样量：10 μL 检测器：紫外检测器 检测器波长范围：400~800 nm，柠檬黄、喹啉黄的测定波长为415 nm；新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、 酸性红、赤藓红的测定波长为520 nm；亮蓝、靛蓝的测定波长为630 nm。 表1 梯度洗脱程序 时间/min A/% B/% 0.01 90 10 12.0 65 35 19.0 55 45 22.5 50 50 23.0 45 55 24.0 35 65 34.0 35 65 35.0 90 10 42.0 90 10 实验结果 加标回收实验结果 表2 加标回收结果 目标物 回收率% 果冻 百事可乐 菊花植物饮料 蛋糕 酱卤鸭翅根 薯片 3.0 mg/kg 5.0 mg/kg 3.0 mg/kg 5.0 mg/kg 3.0 mg/kg 5.0 mg/kg 3.0 mg/kg 5.0 mg/kg 3.0 mg/kg 5.0 mg/kg 3.0 mg/kg 5.0 mg/kg 柠檬黄 99.6 96.6 94.9 96.4 90.1 99.9 91.1 98.9 85.1 92.4 95.5 92.1 新红 99.6 101 92.9 97.9 87.3 102 93.7 97.2 88.8 96.1 82.7 90.6 苋菜红 93.5 102 98.1 103 94.8 101 98.4 100 86.1 97.9 88.4 86.5 靛蓝 92.3 94.1 84.6 86.1 83.4 89.2 91.1 88.5 87.2 91.7 84.7 89.8 喹啉黄1 101 97.1 97.7 102 96.2 103 96.1 94.8 87.3 94.6 89.9 84.9 胭脂红 98.5 104 97.5 101 90.2 97 98.4 101 93 100 84.1 87.1 日落黄 92.3 96.1 99.1 98.1 92.8 101 95.3 103 94.0 98.0 87.0 99.9 喹啉黄2 86.9 92.4 96.6 99.4 87.7 94.1 97.6 94.2 86.0 97.2 82.9 97.7 诱惑红 92.3 96.7 92.5 99.6 88.1 95.9 92.8 96.9 89.7 96.9 95.1 100 酸性红 94.8 96.5 94 97.4 97.8 102 89.5 92.7 95.4 97.7 90.9 96.9 亮蓝 86.9 92.3 84.6 86.1 90.6 99.1 89.6 93.5 92.3 96.1 84.8 91.2 喹啉黄3 87.2 96.8 95.5 103 86.4 93.6 75.2 77.8 82.5 94.9 84.5 88.5 喹啉黄4 85.9 94.3 98.4 100 93.9 97.8 80.6 83.3 87.4 95.6 87.0 99.9 赤藓红 78.3 82.6 80.9 83.2 85.6 92.3 80.1 85.2 78.3 86.5 82.9 84.4 标液、果冻、饮料、蛋糕、酱卤鸭翅根和薯片中着色剂色谱图 图1 11种合成着色剂标准溶液（5.0 mg/kg)色谱图 图2果冻添加水平（5.0 mg/kg）中11种着色剂色谱图 图3饮料添加水平（5.0 mg/kg）中11种着色剂色谱图 图4蛋糕添加水平（5.0 mg/kg）中11种着色剂色谱图 图5酱卤鸭翅根添加水平（5.0 mg/kg）中11种着色剂色谱图 图6薯片添加水平（5.0 mg/kg）中11种着色剂色谱图 订购信息 货号 描述 包装 COPWAX6150 Copure®WAX ,150mg/6mL 30支/盒 SDC-3000-D biocomma® 多管涡旋混匀仪 1台/箱 BN24 biocomma® 智能水浴氮吹仪 1台/箱 SF130-22-PTFE PTFE针式过滤器，直径13 mm，孔径0.22 μm，有机系 100个/盒 SC2-1 2 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425 100个/盒 V2-AL 2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425 100个/盒 1-柠檬黄 2，3，4，5-喹啉黄 检测波长415 nm 着色剂具有改善食品色泽、增进人们食欲的作用，因其成本低、色泽鲜艳、着色力强、稳定性好等特点，在食品生产加工行业中被广泛应用。但食用合成着色剂常以苯、甲醛等化工产品为原料, 经磺化、卤化等化合而成，易混入有毒有害物质,有潜在的毒性和致癌性。因此，各国对食品中合成着色剂的使用范围和使用限量都有严格规定，GB 2760—2014《食品添加剂使用卫生标准》明确严格规定了合成色素的使用限量和范围。本实验开发了不同样品基质中合成着色剂测定的固相萃取方法，本法操作简便，回收率好，满足检测要求。一样品提取1.1 液体及部分固体试样（饮料类、果冻等）称取试样2 g于50 mL离心管中，加入25 mL乙醇氨水溶液，涡旋1 min，50 ℃超声提取15 min，8000r /min离心5 min。取上清液置于50 mL离心管中，加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，混匀后得提取液。准确吸取提取液10 mL，50 ℃下氮气浓缩至2 mL左右，加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，混匀作为待净化液。1.2 含油量较大的试样（糕点、酱卤肉、薯片等）称取试样2 g于50 mL离心管中，加入20 mL石油醚，涡旋1 min，涡旋振摇10 min，以8000r /min离心5 min，弃去上清液，除尽石油醚溶剂，加入25 mL乙醇氨水溶液至除油试样中，涡旋1 min，50 ℃超声提取15 min，8000r /min离心5 min。取上清液置于50 mL离心管中，加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50 mL，混匀后得提取液。准确吸取提取液10 mL，50 ℃下氮气浓缩至2 mL左右，加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解，混匀作为待净化液。乙醇氨水溶液：无水乙醇700mL，氨水4mL，用水稀释定容到1L，混匀即得。二样品净化Copure® WAX, 150 mg/6mL活化：固相萃取柱依次用6mL甲醇和6mL水活化上样：将上述待净化液过柱，弃掉流出液淋洗：依次用6 mL水和6ml甲醇淋洗，抽干小柱洗脱：6 mL 2%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于45 ℃氮吹仪浓缩至0.3 mL左右，加入乙酸铵溶液（pH=9.0）复溶至2mL，涡旋混匀，过PTFE滤膜，上机。乙酸铵溶液（pH=9.0）:称取1.54g乙酸铵，加水溶解并定容至1000mL,加氨水调pH=9.0.三仪器条件仪器：液相色谱仪，ThermoFisher U3000色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)流动相：A：0.02mol/L乙酸铵溶液  B：甲醇洗脱方式：梯度洗脱，见表1流速：1.0 mL/min      柱温：30 ℃     进样量：10 μL检测器：紫外检测器  检测器波长范围：400~800 nm，柠檬黄、喹啉黄的测定波长为415 nm；新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、 酸性红、赤藓红的测定波长为520 nm；亮蓝、靛蓝的测定波长为630 nm。表1 梯度洗脱程序四实验结果【加标回收实验结果】表2 加标回收结果【标液、果冻、饮料、蛋糕、酱卤鸭翅根和薯片中着色剂色谱图】图6薯片添加水平（5.0 mg/kg）中11种着色剂色谱图五订购信息