尿液中甲基苯丙胺的测定

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绍甲基苯丙胺，又名甲基安非他命、去氧麻黄素，是一种强效的中枢神经系统兴奋剂，被列为第一类精神药品，也是冰毒的主要有效成分，其已成为21世纪全球范围内滥用最为广泛的毒品之一。本文采用全自动固相萃取结合液相色谱-串联质谱定性定量测定尿液中的甲基苯丙胺，提取液用MCX阳离子交换柱经睿科Fotector Plus全自动固相萃取仪净化，5%氨化甲醇洗脱，洗脱液经睿科Auto EVA 80全自动氮吹浓缩仪进行浓缩，超纯水复溶，LC-MS/MS上机检测，外标法定量。在0.2 ng/mL的加标水平下，甲基苯丙胺的回收率在78.9%~88.6%之间，RSD值小于10.0%，符合分析与鉴定要求，说明该方法可作为尿液中甲基苯丙胺检测的有效解决方案。关键字：全自动固相萃取仪；全自动氮吹浓缩仪；液相色谱-串联质谱；甲基苯丙胺；尿液自动化样品前处理解决方案-RK-2022-FP001 解决方案 尿液中甲基苯丙胺的测定 关键词 全自动固相萃取仪；全自动氮吹浓缩仪；液相色谱-串联质谱；；甲基苯丙胺；尿液 介绍 甲基苯丙胺，又名甲基安非他命、去氧麻黄素，是一种强效的中枢神经系统兴奋剂 ，被列为第一类精神药品，也是冰毒的主要有效成分，其已成为21世纪全球范围内 滥用最为广泛的毒品之一。 本文采用全自动固相萃取结合液相色谱-串联质谱定性定量测定尿液中的甲基苯丙胺 ，提取液用MCX阳离子交换柱经睿科Fotector Plus全自动固相萃取仪净化，5%氨化 甲醇洗脱，洗脱液经睿科Auto EVA 80全自动氮吹浓缩仪进行浓缩，超纯水复溶， LC-MS/MS上机检测，外标法定量。在0.2 ng/mL的加标水平下，甲基苯丙胺的回收率 在78.9%~88.6%之间， RSD值小于10.0%，符合分析与鉴定要求，说明该方法可作为尿 液中甲基苯丙胺检测的有效解决方案。 1.仪器、试剂以及耗材 1.1仪器和设备 睿科全自动固相萃取仪：Raykol Fotector Plus； 睿科全自动氮吹浓缩仪：Raykol Auto EVA 80； 高效液相色谱/质谱联用仪 Agilent 1290+6470； MCX阳离子交换柱（RayCure，60mg/3ml，货号：RC-204-72855） 1.2试剂和标准品 乙腈、甲酸、甲醇均为色谱纯试剂，乙酸铵、浓盐酸、氨水均为分析纯试剂，超纯水由Milli-Q 系统制得。 甲基苯丙胺标准品来源于某公安用户。 2.样品富集与净化 2.1固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 Raykol Fotector Plus 固相萃取柱 MCX阳离子交换柱(RayCure, 60mg/3mL,货号：RC-204-72855) 活化 甲醇、超纯水 淋洗 超纯水、甲醇 洗脱 5%氨化甲醇 2.2样品制备与富集 取2mL尿液检材，用稀盐酸溶液调节pH<2，以8000 r/min离心5min，取上清液进行 固相萃取。依次用3mL甲醇和3mL水分别以2ml/min的速度活化MCX阳离子交换固相萃 取柱。将提取液以2ml/min的速度经固相萃取小柱富集，用2ml水清洗样品瓶并过柱，再用 3mL甲醇淋洗固相萃取柱。将柱子挤干，然后用4ml 5%氨化甲醇以1ml/min的速度洗脱并 收集洗脱液，固相萃取程序如图-1所示。 将洗脱液用睿科AutoEVA-80在40℃的条件下氮吹至近干，用1.0mL水复溶，涡旋混 匀后过滤膜上LC-MS/MS检测。 序号 命令 溶剂 排出 流速(mL/min) 体积 时间(min) 1 清洗样品通道 甲醇 1.3 2 活化 甲醇 有机废液 2 3 1.9 3 活化 水 有机废液 2 3 1.9 4 上样 有机废液 2 2.5 1.7 5 清洗样品瓶 水 有机废液 60 2 1.7 6 淋洗 甲醇 有机废液 2 3 1.9 7 气推 有机废液 80 30 2.2 8 清洗注射泵 5%氨化甲醇 60 3 0.4 9 洗脱 5%氨化甲醇 收集 1 4 4.4 10 气推 收集 1 2 2.4 11 气推 收集 20 10 1.3 12 结束 13 图-1 Fotector Plus固相萃取方法 3.检测条件 3.1液质联用仪器条件 色谱柱 ACQUITYUPLCBEHC18(100mm×2.1mm×1.7μm) 流速 0.30mL/min 流动相 A:5mmol/L乙酸铵溶液(含0.1%甲酸)，B:乙腈 柱温 35°C 进样量 2μL 检测器 Agilent 6470 离子模式 ESI+ 吹扫气 8L/min 氮气温度 330 °C 簇电压 3500 雾化压力 45psi 梯度洗脱 0.0-1.0 min，5-5%流动相B；1.0-2.0min，5-15%流动相B；2.0-8.0 min，15-30%流动相B；8.0-8.5 min，30-95%流动相B；8.5-11.0min，95-95%流动相B；11.0-12.0 min，95-5%流动相B；12.0-14.0 min，5-5%流 动相B. 3.2液质MRM参数 序号 化合物 保留时间 母离子 子离子 碎裂电压 碰撞能量 1 甲基苯丙胺 4.2 150.1 119.1 80 8 91.1 80 20 表-1 LC/MS/MS保留时间以及质谱参数 4.方法可行性验证 本文建立的方法其准确性与精密度采用加标回收率与相对标准偏差(RSD)进行衡量。在空白 尿液检材中添加浓度为0.2ng/mL的甲基苯丙胺标准品，按照上述3.2步骤进行前处理操作。实验结果表明：甲基苯丙胺的回收率在78.9%~88.6%之间，RSD小于10.0%，符合分析与鉴 定要求。具体数据如表-2所示。 化合物 回收率（%） 平均回收率 RSD 加标-1 加标-2 加标-3 （%） （%） 甲基苯丙胺 88.6 81.4 78.9 83.0 6.0 表-2 0.2 ng/mL加标回收率及RSD(%)(n=3) 5.结果与讨论 由于甲基苯丙胺属于弱碱性化合物，所以使用阳离子交换固相萃取柱进行净化富集效果最好。在过柱前首先要将提取液调成酸性以利于化合物更好地在柱子上保留，最后使用碱性的氨化 甲醇溶液进行洗脱。 6.总结 采用睿科Raykol Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪对样品进行检测能同时进行6个 样品净化，连续自动处理60个样品，做样通量高；同时可无人值守，大幅度减少了工作人员 的工作量，提高了工作效率。此外还可避免工作人员因操作失误导致的检测偏差，也可将实 验人员更迭对检测结果的影响最小化。 睿科Raykol-EVA-60全自动氮吹浓缩仪处理通量高，60个样品可同时进行氮吹，实验平 行性好；而且采用氮吹针自动追随液面的设计，无需手动调节氮吹针且耗气量小，省时省力。