LC-MS/MS法测定血液中15种合成卡西酮类新精神活性物质

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本文使用岛津三重四极杆液质联用仪建立了血液中15种合成卡西酮类新精神活性物质检测方法，用甲卡西酮-D3作为内标，各目标物的定量限均达到1 ng/mL。 本实验的方法学数据表明，该方法分析速度快，线性、重复性和加标回收率均满足检测需求，可供公安司法领域检测人员参考。SSL-CA23-199 Excellence in ScienceLCMSMS-781 LC-MS/MS 法测定血液中15种合成卡西酮类 新精神活性物质 LCMSMS-781 摘要：本文建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪测定血液中15种合成卡西酮类新精神活性物质的检测 方法。本实验用甲卡西酮-D3作为内标，采用内标法建立基质校准曲线，线性范围为1~200 ng/mL， 各目标物 相关系数均大于0.999， 准确度在 90.1%~115.8%之间。重复性保留时间和峰面积RSD% 分别在 0.02%~0.28%和 0.49%~6.77%之间。样品中各化合物的加标回收率在90.7~111.4%之间， RSD% 在 0.70~7.05%之间。 关键词：三重四极杆液质联用仪血液合成卡西酮 技术特点： 必前处理操作简单，基质干扰小，各目标物定量限均达到1ng/mL。 *13分钟完成15种合成卡西酮类化合物的定性定量分析。 合成卡西酮是一种具有强烈兴奋和致幻作用的新 精神活性物质。起初用作抗抑郁和抗震颤麻痹的药物，但最终都由于成瘾和滥用的问题而退出使用。吸食卡西 酮类物质能导致类似甲基苯丙胺的兴奋作用和类似麦角 酸二乙胺 (LSD) 的致幻作用，同时还伴有心动过速、血压升高等反应。我国对合成卡西酮类新精神活性物质 主要采取列管的方式，目前已列管50多种合成卡西酮。 合成卡西酮类物质种类繁多，主要的检测方法有 气相色谱质谱法、液相色谱质谱法和光谱法等，常存在 前处理复杂，耗时长，有机溶剂污染等问题。 本文建立了血液中15种合成卡西酮类新精神活性 物质检测方法，前处理简单，分析速度快，准确度好，可供公安司法领域检测人员参考。 1.1仪器 岛津三重四极杆液质联用仪 LCMS-8050，配置信息如下： 系统控制器：：CBM-20A 脱 气 机： DGU-20A5R 输液泵 LC-30ADx2自动进样器SIL-30ACMP 柱温箱：：(CTO-20A质 谱普 仪：LCMS-8050 色谱工作站： LabSolutions Ver 5.118 1.2分析条件 液相色谱条件 色谱 柱：：Shim-pack GIST-HP C18-AQ (100 mm x 2.1 mml.D.， 1.9 um，岛津((上海)实验器材有限公司， P/N： 227-30807-02) 流动 相 A-10mM 甲酸铵 +0.1%甲酸-水溶液；B-0.1%甲酸-乙腈溶液 进样体积1pL温品：40°C 流 速0.3 mL/min针液：甲醇/水=1：1 (v：v) 洗脱方式： 梯度洗脱，B相起始浓度为5%，时间程序如表1所示。 表1梯度洗脱时间程序 时间 (min) 单元 处理命令 值 1.00 泵 B Conc 5 6.00 泵 B Conc 16 7.00 泵 B Conc 16 9.00 泵 B Conc 70 10.00 泵 B Conc 70 10.10 泵 B Conc 5 13.00 控制器 STOP 质谱条件 离子化模式：ESI(+) 加热模块温度：4400°℃ 加热气流速：空气 10.0 L/min 接口温度：300℃ 雾化气流速：氮气3.0L/min DL温 度：250°C 干燥气流速：舞氮气10.0L/min 接口电压：：4kV 扫描模式：多多反应监测(MRM) MRM参 数：见表2 表2 15种卡西酮类新精神活性物质和内标的 MRM 参数 序号 中文名称 英文缩写 前体离子 产物离子 Q1 Pre (V) CE(V) Q3 Pre (V) 1 甲卡西酮 MC 164.10 131.05* -19 -21 -21 146.15 -13 -17 -28 2 3，4-亚甲二氧基 Methylone 208.05 160.05* -13 -19 -14 甲卡西酮 132.05 -18 -28 -23 3 2-FMC 182.05 149.10* -11 -23 -24 2-氟甲卡西酮 164.10 -23 -17 -30 4 4-氟甲卡西酮 4-FMC 182.05 149.10* -15 -22 -23 164.10 -24 -17 -29 5 乙卡西酮 Ethcathinone 178.10 130.05* -23 -30 -22 160.15 -24 -17 -30 6 4-CEC 212.05 144.05* -12 -29 -25 4-氯乙卡西酮 194.05 -26 -14 -30 7 3，4-亚甲二氧基 Propylone 236.10 188.10* -11 -19 -19 丙卡西酮 218.15 -14 -16 -22 8 4-FEC 196.10 150.10* -16 -19 -14 4-氟乙卡西酮 178.10 -12 -16 -29 9 4-溴乙卡西酮 4-BEC 256.00 159.10* -22 -18 -14 144.05 -30 -29 -26 10 238.05 6-甲氧基-3，4-亚甲 6-MeO-Methy- 58.15* -15 -13 -20 二氧基甲卡西酮 tone 190.10 -30 -18 -30 LCMSMS-781 11 3-甲基甲卡西酮 3-MMC 178.10 145.10* -21 -23 -24 160.10 -23 -17 -30 12 4-溴甲卡西酮 4-BMC 242.00 145.10* -11 -17 -22 132.00 -21 -22 -26 13 3，4-亚甲二氧基 乙卡西酮 Ethylone 222.10 174.10* -11 -20 -17 204.10 -13 -15 -21 14 4-氯甲卡西酮 4-CMC 198.05 145.10* ★ -12.0 -21.0 -22.0 180.10 -27.0 -15.0 -30.0 15 4-甲基乙卡西酮 4-MEC 192.10 174.20* -16.0 -16.0 -16.0 144.10 -23.0 -32.0 -30.0 16 甲卡西酮-D3 MC-D3 167.10 149.15* -22 -16 -23 131.10 -20 -22 -25 *代表定量离子对。 1.3校准曲线溶液配制 分别取15种卡西酮类新精神活性物质对照品储备液(100 ug/mL)， 用甲醇逐级稀释，分别得到10，20，50，100，250，500，1000和2000 ng/mL的混合标准工作溶液。分别取各浓度的混合标准工作溶液 100uL，加入 900 uL空白血液得到浓度分别为1，2， 5， 10， 25， 50， 100和200 ng/mL 基质校准曲线样品。 1.4样品和基质校准曲线样品前处理 结果与讨论 2.1基质校准曲线溶液 MRM 色谱图 按1.2中的分析条件进行测定，1ng/mL的基质校准曲线溶液中各化合物的 S/N 均大于10，灵敏度良好，符 合定量要求。部分卡西酮类物质的 MRM 色谱图如下图1所示。 LCMSMS-781 图1 部分卡西酮类新精神活性物质基质校准曲线溶液 MRM 色谱图(1ng/mL) 2.2线性范围 按1.2中的分析条件进行测定，以各目标物浓度为横坐标，目标物峰面积为纵坐标，以内标法绘制校准曲线，所得校准曲线线性范围为 1~200 ng/mL，线性关系良好，相关系数均大于0.999，准确度在 90.1%~115.8%之间，线性方程等参数见表3。 表3校准曲线参数(权重1/C) 序号 名称 校准曲线 相关系数r 准确度% 1 MC Y=(0.215961)X+(0.00262213) 0.9999 98.4~102.9 2 Methylone Y=(0.290078)X+(0.000345191) 0.9998 95.0~106.6 3 2-FMC Y=(0.141217)X+(0.000762214) 0.9997 90.1~115.1 4 4-FMC Y=(0.155807)X+(0.000684374) 0.9998 92.8~108.3 5 Ethcathinone Y=(0.230226)X+(6.94148e-005) 0.9992 91.4~108.7 6 4-CEC Y=(0.150018)X+(0.000420365) 0.9999 96.6~109.3 7 Propylone Y=(0.220650)X+(-1.47878e-005) 0.9998 96.7~109.3 8 4-FEC Y=(0.117498)X+(0.00173494) 0.9999 96.0~103.9 9 4-BEC Y=(0.169239)X+(0.000853627) 0.9999 96.6~103.9 10 6-MeO-Methylone Y=(0.252670)X+(0.00164491) 0.9998 93.6~115.8 11 3-MMC Y=(0.201428)X+(0.00187338) 0.9998 94.5~107.1 12 4-BMC Y=(0.121291)X+(0.000948325) 0.9998 91.9~112.4 13 Ethylone Y=(0.321975)X+(0.00120665) 0.9999 95.9~103.0 14 4-CMC Y=(0.142606)X+(0.00106637) 0.9998 94.7~115.4 15 4-MEC Y=(0.398795)X+(0.000945429) 0.9998 96.7~105.8 2.3精密度实验 按1.2中的分析条件进行测定，选择低中高三个浓度对照品溶液，分别连续进样测定6次，考察仪器的精密度，保留时间和峰面积的相对标准偏差如表4所示，RSD%分别在0.02%~0.28%和0.49%~6.77%之间，实验结果表明，该分析方法具有良好的精密度。 LCMSMS-781 表4 保留时间和峰面积精密度结果(n=6) 低浓度 (2 ng/mL) 中浓度 (25 ng/mL) 高浓度 (200 ng/mL) 序号 名称 保留时间(RSD%) 峰面积(RSD%) 保留时间(RSD%) 峰面积(RSD%) 保留时间(RSD%) 峰面积(RSD%) 1 MC 0.23 5.14 0.12 3.01 0.13 1.14 2 Methylone 0.20 1.97 0.12 1.98 0.15 0.49 3 2-FMC 0.28 3.93 0.13 1.86 0.14 1.16 4 4-FMC 0.19 2.63 0.11 2.57 0.14 0.76 5 Ethcathinone 0.22 3.80 0.13 4.31 0.14 2.07 6 4-CEC 0.03 6.77 0.03 2.98 0.03 1.10 7 Propylone 0.03 5.74 0.02 1.89 0.03 0.93 8 4-FEC 0.13 5.15 0.09 2.29 0.08 1.02 9 4-BEC 0.02 5.43 0.03 1.99 0.02 0.89 10 6-MeO-Methylone 0.13 3.65 0.08 1.59 0.07 0.80 11 3-MMC 0.12 6.37 0.09 1.64 0.07 1.11 12 4-BMC 0.03 5.55 0.02 2.84 0.03 1.68 13 Ethylone 0.13 4.37 0.08 0.81 0.08 1.10 14 4-CMC 0.05 5.75 0.03 1.47 0.04 1.53 15 4-MEC 0.03 4.38 0.02 2.27 0.03 0.77 2.4实际样品分析 将血液样品按1.4程序前处理后，上机分析，结果如图2所示，所测样品中未检出15种合成卡西酮类新精神 活性物质，检出内标物甲卡西酮-D3。 6-MeO-Methylone 图2血液样品溶液中部分化合物和内标物的 MRM色谱图(图中红色竖线表示目标物的出峰位置) 2.5回收率 向血液样品溶液添加15种卡西酮类新精神活性物质标准品溶液，配制成15种卡西酮类新精神活性物质浓度 为2、25和200 ng/mL的样品加标溶液，按1.4程序前处理后，每个水平重复测定6次，质控样品的准确度和精 密度结果如表5所示，平均回收率在90.7~111.4%之间， RSD% 在 0.70~7.05%之间。 表5 方法回收率结果(n=6) 加标浓度 (2 ng/mL) 加标浓度 (25 ng/mL) 加标浓度 (200 ng/mL) 序号 名称 回收率(%) 相对标准偏差(RSD%) 回收率(%) 相对标准偏差(RSD%) 回收率(%) 相对标准偏差(RSD%) 1 MC 97.2 5.67 96.5 2.25 98.3 0.88 2 Methylone 111.4 1.67 97.3 1.90 103.4 0.70 3 2-FMC 94.8 4.07 93.1 1.14 93.8 1.06 4 4-FMC 99.6 4.99 94.7 2.28 100.5 1.12 5 Ethcathinone 110.7 3.87 95.8 4.02 103.3 1.90 6 4-CEC 108.6 6.92 99.1 3.03 103.9 0.93 7 Propylone 110.2 5.59 96.1 1.64 99.1 1.06 8 4-FEC 90.7 6.10 97.6 2.31 100.8 0.97 9 4-BEC 101.9 5.72 96.7 1.63 100.4 1.14 10 6-MeO-Methylone 105.2 3.94 97.2 0.98 102.4 1.00 11 3-MMC 98.6 7.05 93.4 1.35 96.4 0.98 12 4-BMC 97.9 5.98 92.4 2.03 98.3 1.59 13 Ethylone 101.5 4.76 94.3 0.89 97.1 0.92 14 4-CMC 102.0 6.05 100.5 0.71 106.1 1.42 15 4-MEC 109.6 4.65 96.6 1.74 99.7 0.70 结论 本文使用岛津三重四极杆液质联用仪建立了血液中15种合成卡西酮类新精神活性物质检测方法，用甲卡西 酮-D3作为内标，各目标物的定量限均达到1ng/mL。本实验的方法学数据表明，该方法分析速度快，线性、重 复性和加标回收率均满足检测需求，可供公安司法领域检测人员参考。 岛津应用云