恒温水浴槽在饲料中细菌总数的测定实验中的作用

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恒温水浴槽在饲料中细菌总数的测定实验中的作用（根据中华人民共和国国家标准GB/T 13093-2006）一、原理试样经过处理，稀释至适当浓度，在一定条件下（如用特定的培养基，在温度30℃±1℃培养72h±3h等）下培养后，所得1g试样中所含细菌总数。二、使用试剂1. 营养琼脂培养基2. 磷酸盐缓冲液3. 0.85%生理盐水4. 水琼脂培养基5. 实验室常见消毒药品3、 使用仪器1. 分析天平2. 振荡器3. 粉碎机4. 高温灭菌器 5. 冰箱6. 恒温水浴锅                              7. 恒温培养箱8. 微型混合器9. 灭菌三角瓶 100ml 250ml 500ml10. 灭菌移液管 1ml 10ml11. 灭菌试管 16mmX160mm12. 灭菌玻璃珠 直径5mm13. 灭菌培养皿 直径90mm14. 灭菌金属勺、刀等                                                                                            四、分析步骤1.试样制备 用 WIGGENS PX-MFC90D 数字式超细研磨仪将块状饲料、颗粒饲料、谷物饲料、原料、粉状饲料磨碎。 2.以无菌操作称取试样25g，放于含有225ml稀释液或生理盐水的灭菌三角瓶中（瓶中预置适当玻璃珠），置WIGGENS Vortex 3000 Elite涡旋振荡器上，振荡30min。充分振摇后，制成1:10的均匀稀释液，最好放置WIGGENS D-500 pro 高剪切数显分散机中8000~10000r/min的速度处理1min。3.用1ml灭菌吸管吸取稀释液1ml，沿管壁慢慢注入含有9ml灭菌稀释液或生理盐水的试管中，振摇试管，或放微型混合器上，混匀30s，制成1:100的稀释液。4.另取一只1ml灭菌吸管，按上述操作，作10倍递增稀释，每递增稀释一次，更换一次灭菌吸管。5.根据饲料卫生标准要求或对试样污染程度的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个培养皿。6.稀释液移入培养皿后，及时将凉至46℃±1℃WIGGENS WA20通用水浴槽内注入培养皿约15ml，小心转动培养皿使试样与培养基充分混匀。7.待琼脂凝固后，倒置平皿于30℃±1℃WIGGENS WH-01迷你低温培养箱内培养72h±3h取出，计算细菌总数，乘以稀释倍数，即得每克试样所含细菌总数。8.使用WIGGENS Galaxy 230 菌落计数器观察出细菌数量，再求出同稀释度的两个平板菌落的平均值。五、细菌总数的报告                                                                            六、注意事项1. 分析步骤2中，使用灭菌吸管吸取稀释液时应注意吸管尖端不要触及管内稀释液。2. 分析步骤5中，从稀释试样到倾注培养基之间，时间不能超过30min。3. 平板细菌总数的选择中，每一稀释度使用两个平板菌落的平均数，两个平板其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用恒温水浴槽在饲料中细菌总数的测定实验中的作用 (根据中华人民共和国国家标准 GB/T 13093-2006) 一、原理 试样经过处理，稀释至适当浓度，在一定条件下(如用特定的培养基，在温度30℃±1℃培 养72h±3h等)下培养后，所得1g试样中所含细菌总数。 二、使用试剂 1.营养琼脂培养基 2.磷酸盐缓冲液 3. 0.85%生理盐水 4.水琼脂培养基 5.实验室常见消毒药品 三、使用仪器 1.分析天平 2.振荡器 3.粉碎机 4.高温灭菌器 5.冰箱 6.恒温水浴锅 7.恒温培养箱 8.微型混合器 9.灭菌三角瓶 100ml 250ml 500ml 10.灭菌移液管 1ml 10ml 11.灭菌试管 16mmX160mm 12.灭菌玻璃珠直径5mm 13.灭菌培养皿直径90mm 14.灭菌金属勺、刀等 四、分析步骤 1.试样制备用 WIGGENS PX-MFC90D 数字式超细研磨仪将块状饲料、颗粒饲料、谷物 饲料、原料、粉状饲料磨碎。 2.以无菌操作称取试样25g，放于含有225ml稀释液或生理盐水的灭菌三角瓶中(瓶中预 置适当玻璃珠)，置 WIGGENS Vortex 3000 Elite 涡旋振荡器上，振荡 30min。充分振摇 后，制成1：10 的均匀稀释液，最好放置 WIGGENS D-500 pro 高剪切数显分散机中 8000~10000r/min 的速度处理1min。 3.用1ml灭菌吸管吸取稀释液1ml，沿管壁慢慢注入含有 9ml灭菌稀释液或生理盐水的试 管中，振摇试管，或放微型混合器上，混匀30s， 制成 1：100 的稀释液。 4.另取一只1ml灭菌吸管，按上述操作，作10倍递增稀释，每递增稀释一次，更换一次灭 菌吸管。 5.根据饲料卫生标准要求或对试样污染程度的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别作10倍 递增稀释的同时，即以吸取该稀释的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个 培养皿。 6.稀释液移入培养皿后，及时将凉至46℃±1CWIGGENS WA20 通用水浴槽内注入培养 皿约15ml，小心转动培养皿使试样与培养基充分混匀。 7.待琼脂凝固后，倒置平皿于30℃±1CWIGGENS WH-01 迷你低温培养箱内培养72h±3h取出，计算细菌总数，乘以稀释倍数，即得每克试样所含细菌总数。 8.使用 WIGGENS Galaxy 230 菌落计数器观察出细菌数量，再求出同稀释度的两个平板 菌落的平均值。 五、细菌总数的报告 表1 稀释度选择及细菌总数报告方式 例次 稀释液及细菌总数 稀释液之比 细菌总数/ CCFU/g(mL)] 报告方式/CCFU/g(mL)] 10一* 10° 10- 1 多不可计 164 20 一 16 400 16 000或1.6×10* 2 多不可计 295 46 1.6 37 750 38 000 或 3.8×10* 3 多不可计 271 60 2.2 27 100 27 000或2.7×10* 4 多不可计 多不可计 313 313 000 310000或3.1×10 5 27 11 5 一 270 270或2.7×10* 6 勺 <1×10 <10 7 多不可计 305 12 一 30 500 31 000或3.1×10° 六、注意事项 1.分析步骤2中，使用灭菌吸管吸取稀释液时应注意吸管尖端不要触及管内稀释液。 2.分析步骤5中，从稀释试样到倾注培养基之间，时间不能超过 30min。 3.平板细菌总数的选择中，每一稀释度使用两个平板菌落的平均数，两个平板其中一个平 板有较大片状菌落生长时，则不宜采用。