转基因玉米中定性分析检测方案(生物质谱)

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基于标准分析法使用MCE-202“MultiNA”进行的转基因玉米的定性分析Qualitative analysis of genetically modified corn by standard method with MCE-202 "MultiNA"(※2)欧洲委员会标准物质计量研究所 (Institute of Reference Materials and Measurements； IRMM) JAS分析试验指南转基因食品检查·分析手册作为转基因农作物以及其加工品的标准分析法，已经在农林水产省以及独立行政法人农林水产消费安全技术中心的网页上公开(※1)。 与独立行政法人农林水产消费安全技术中心的转基因农作物食品表示相关的监测检查，基于本JAS分析试验指南予以实施。另外，在基于厚生劳动省通知的「转基因技术应用食品的检查方法」中，也多处引 分析步骤 Experimental Procedure 准备了3种认证标准物质的转基因玉米(MON810系统)粉末样品(Table 1)。 从DNA 是取开始，PCR 的条件遵照「JAS分析试验指南转基因食品检查·分析手册的基本操作篇」(※1)。使用 QIAGEN 公司的 DNeasy Plant Maxi 组件，从各1g分末样品提取了 DNA。测定提取 DNA 的浓度，根据测定值稀释为 10ng/uL， 作为 PCR 的模板。用于PCR 的引物对使用玉米内在性基因 SSIIb 检测用和转换 MON810系统检测用这2种。从1个样品的提取物各进行3点PCR。另外，还实施了阳性控制(玉米用标准质粒 DNA 作为模板进行添加)和阴性控制(未加模板 DNA 和未加引物的2种)的PCR。使用 MultiNA 分析了得到的 PCR 产物。 Table 1转基因玉米样品 抗蝶目害虫性玉米 IRMM*2CRM*MON810系统 0% (型号ERM-BF413a) IRMM CRM MON810系统1% (型号ERM-BF413d) IRMMCRM MON810 系统5% (型号ERM-BF413f) (※1)农林水产省 食品表示Q&A·指针等 用JAS分析试验指南，可以说该分析法是我国转基因农作物检查的标准之一。并且，不仅在行政方面，既是在从事食品加工、流通业等企业中，也广泛用作自主检查的方法，以确认是否符合食品表示制度。 本文介绍使用 DNA/RNA 分析用微芯片电泳装置 MCE-202”MultiNA”，实施JAS分析试验指南中记载的转基因玉米的定性检查的例子。 Y.Sogabe Fig.1 转基因玉米的分析步骤 http：//www.maff.go.jp/j/jas/hyoji/qa.html独立行政法人农林水产消费安全技术中心 「转基因食品检查·分析手册」<修订第2版>http：//www.famic.go.jp/technical_information/jashandbook/index.html (※3)认证标准物质(Certifi ed Reference Materials ；CRM) 1结果 Results 可知从所有样品可检测到玉米内在性基因( SSIIb ：114bp) (Fig.2)。可确认 DNA提取以及 PCR 反应已经顺利实施。 另外，只在含MON810 系统的样品中确认到谱带( M810：113bp)。并且，实施的阳性·阴性控制都可确认有无推测的DNA扩增，检查得到正确实施。 MultiNA 的测定结果可获得电泳图和凝胶图。可二维地确认峰的有无、尺寸，方便、可靠地判断目的扩增产物。 凝胶图 L： Ladder Marker (25bp DNA Ladder) 1-3： MON810 0%混入样品 4-6： MON810 7-9：MON810 10：阴性控制(无模板 DNA) 11：阴性控制(无引物) 12：阳性控制(模板为含检测对象序列 的质粒 DNA) 电泳图 浮 Fig.2 转基因玉米的分析结果 Analytical Results of PCR products from genetically modified comn