氢化物发生原子吸收法测定血液头发中痕量硒

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氢化物发生原子吸收法测定血液头发中痕量硒 林文业 何秉忠 黄鹂娟 赵士钧 黄桂宽 吴继同 张丽兰 （广西分析测试研究中心）（广西冶金研究所） （广西医学院） 在硒的生物化学作用被逐渐认识的今天,要求提供精确的分析数据.由于经典的荧光光度法测定硒,条件比较苛刻,本文采用氢化物发生原子吸收法测定了人体全血,头发样品中硒的含量.在确定了仪器的最佳工作条件的基础上,着重研究了测定全血,头发样品中硒的前处理方法及干扰试验.本法相对标准偏差小于0.5%,标准加入回收率在95.7~102%之间,适用于开展流行病学调查和临床分析的研究. 实验部分 一 仪器及工作条件 日立Z-6000型原子分光光度计 硒空心阴极灯(北京有色金属研究总院产) 日立HFS-2型氢化物发生装置 耐热石英管(长沙产,规格:长120mm,内径11mm). 波长196.0nm,灯电流5mA,狭缝1.3nm,空气流量1.00kg·cm-2, 乙炔流量0.05kg· cm-2 ,测量方式直示,计算方是用峰高,校准曲线或标准加入方法曲线,计算时间13s,延迟时间0.5s,进样量3ml,载气流速Ar100ml·min-1 ,进样时间30s,反应时间15s. 二 试剂 硒(IV)标准贮备液:1000ug·ml-1,由高纯硒粉配置.硒中间标准溶液5ug·ml-1. 硼氢化钾:1.5%溶液中含有0.1%的氢氧化钠,用时现配. 亚沸蒸馏水 三 试样处理 准确取0.20ml血液试样或0.2000g头发试样于20ml(12mm)刻度石英试管中,加入2ml浓HNO3,放置过夜,次日在加入0.5mlHClO4,置于160ºC恒温沙浴中加热消化至溶液成呈淡黄色后(约4h),加入1mlH2O2,继续加热消化至溶液清亮(约1h)取出,测定前用HCl(30%)溶液定容. 于试样处理的同时制备试剂空白. 四 校准曲线的绘制 1 校准曲线 用微量定量取样器吸取硒中间表准溶液,0,10,30,50和70ul分别放入50ml量瓶中,用HCl(30%)溶液稀释到刻度,获得浓度分别为0,1.0,3.0,5.0和7.0ng·ml 硒的标准系列溶液. 2 标准加入法曲线 移取10ml试样+10mlHCl(30%):10ml样液+10ml 2ng·ml-1硒标准溶液; 10ml样液+10ml 10ng·ml-1硒标准溶液; 10ml样液+10ml 14ng·ml-1硒标准溶液,制成均含HCL(30%)溶液的硒标准加入法系列溶液. 结果与讨论 一 式样前处理方法的考察 试样的前处理是至关重要的.目前测定硒的前处理方法普遍采用湿法消化,常用的分解装置有高型烧杯,三角锥瓶,高压分解坩锅和配有回流冷凝器的凯氏烧杯.由于前两种装置分解式样时,使用的酸量较大,硒易挥发损失,而且这些方法得消化液均需要转移定容,易引起较大的误差.本法采用刻度石英试管,HNO3+HclO4+H2O2+HCl氧化还原体系,于160ºC恒温沙浴中消化血液头发试样.由于石英试管上端能起到空气的冷凝回流作用,因而试剂不易挥发,试样消化完全.与配有冷凝管的烧瓶消化法比较,具有操作简单,试剂和式样用量少,减少转译的误差等优点.本法与水冷凝管的凯氏烧瓶消化法比较的结果见表1. 表1 分解方法的比较 统计参数* 本法 水冷凝管烧瓶法 全血 (ng·ml-1 ) 头发 (ng·g-1 ) 全血 (ng·ml-1 ) 头发 (ng·g-1 ) X+SD 144.5+6.9 66.5+13.0 145.0+7.1 664.8+14.4 N 50 50 50 50 RSD% 4.8 2.0 4.9 2.2 * X: 硒的平均值 n: 测定次数 SD: 标准偏差 RSD:相对标准偏差 二 常见共存例子的干扰试验 我们调查了存在于血液,头发中的25种共存例子对痕量硒测定的干扰试验,结果表明,下述离子(ug·ml-1)不干扰5ng·ml-1硒的测定:Ca(700), Na 、Fe3+(500), Mg、K(200), Cu、Zn(5),Ni、Mn、Al(1), Cr6+、Co(0.2), Mo、As3+、Bi、Sr、Ti、Hg、Sn2+ (0.1),Si、Ba(0.5),Pb(0.06),Cd(0.05)以及NO3-、ClO4-、H2O2(0.5M). 锑(Ⅲ)0.05 ug·ml-1不干扰,含量≥0.1 ug·ml-1有负干扰,但血液头发中锑的含量一般都低于此值,再者经过了相对的稀释,它不会给本法测定硒带来影响.当HNO3、HClO4、H2O2的浓度小于0.5M 时也不干扰测定.原因是盐酸介质保持了较佳浓度,可是试样中的Fe、Cu和Ni