UHPLC-SQ MS测定FMOC衍生后的草甘膦

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应 用 简 报 质谱条件要获取全球办事处的完整列表，请访问http：// www.perkinelmer.com.cn/AboutUs/ContactUs/ContactUs版权所有◎2013， PerkinElmer， Inc. 保留所有权利。PerkinElmer 是PerkinElmer， Inc. 的注册商标。其它所有商标均为其各自持有者或所有者的财产。009557_12_CN 环境 UHPLC/SQ MS测定FMOC衍生后的草甘膦 草甘膦是被农业及城市园林绿化管理广泛使用的一种除草剂。有研究表明其具有扰乱内分泌的功能，因此美国环保署(EPA)要求饮用水及地表水进行草甘膦的测定。 我们提供了一种利用UHPLC/SQ MS分析草甘膦及其降解产物(氨基甲基磷酸 (AMPA))的方法。使用9-芴甲氧羰酰基酰氯(FMOC) 进行衍生，以提升在质谱中的响应灵敏度。图1(见下一页)是FMOC与草甘膦和AMPA反应式。柱后分流阀同时也可用来改变0-2min时的洗脱盐、过量衍生试剂及其副产物(11-13min)的流动方向，使其流进废液管，以维持LC/MS系统更加干净。 实验条件 目标化合物：草甘膦(N-(膦酰基甲基)甘氨酸)，AMPA(氨基甲基磷酸)。 样品制备 硼酸盐缓冲液(5%的硼酸溶液50L)加入100uL的系列标准溶液中(含有各种不同浓度的草甘膦，AMPA和13C，15N草甘膦)。将衍生试剂FMOC (50uL含有10mg/mL芴甲氧羰酰基酰氯的乙腈溶液)加入上述溶液中。 标准溶液在黑暗中反应过夜。第二天，加入磷酸(2%的溶液500uL)终止标准物质的反应。当加入酸时，过量的FMOC会发生沉淀，通过加入甲醇(300uL)会重新溶解进入溶液。最终每个分析标准溶液中含有草甘膦和AMPA的浓度分别为5ng/mL至500ng/mL，内标物质13C，15N草甘膦浓度为100ng/mL。 液相色谱条件 泵型号： PerkinElmer@FlexarTM FX-15 色谱柱： Phenomenex@ Prodigy C18(3.2mm x 150 mm， 5 um) 流动相： A：5mM甲酸铵的水溶液 B：乙青 流速 0.4mL/min 进样体积：4uL局部注满的模式 梯度： 时间(min) %A %B 2 80 20 7 60 40 1 10 90 90 离子化模式： UltrasprayTM ESI负离子模式 每个分析物[M-H]离子的监测分为两个不同的时期： 第一阶段：(0-8min) SIM扫描草甘膦的离子390.0和392.0及分别扫描13C，15N，驻留时间为200ms/个 第二阶段：(8-11.0min) SIM扫描AMPA离子332.0，驻留时间为150ms/个 毛细管出口电压：-70V 图2UPHPLC/SQ MS测定草甘膦(红色)，13C，15N草甘膦(蓝色)和AMPA(绿色)的谱图 结果 UHPLC能够完全分离草甘膦及其降解产物、AMPM与FMOC的衍生产物(图2)。以草甘膦与AMPM与内标物质的比作工作曲线，在5-500ng/mL浓度范围内，线性关系良好(两者均为r=0.998)，分别见图3和图4所示。利用UHPLC与Flexar SQ 300MS联用，我们很容易测定浓度为5ppb草甘膦及AMPM。 图3草甘膦的校准曲线(5-500ng/mL，n=3)，以草甘膦与内标C，15N草甘膦的比作图(r²=0.998) 图1草甘膦、AMPM与FMOC发生的衍生反应 图4AMPA的校准曲线(5-500ng/mL，n=3，r²=0.998)，以AMPA与内标C，15N草甘膦的比作图 PerkinElmer， Inc. 珀金埃尔默仪器(上海)有限公司 地址：上海张江高科技技区张衡路1670号邮编：201203电话：021-60645888 传真：021-60645999 www.perkinelmer.com.cn PerkinElmer