应用ACQUITY UPLC I-CLAS/Xevo G2-S QTof系统及UNIFI软件对厄他培南（Ertapenem）药物中杂质进行鉴定

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[应用纪要]THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. [应用纪要] ■ ■ Waters 应用ACQUITY UPLCI-CLASS / Xevo G2-S QTof系统及UNIFI软件对厄他培南 (Ertapenem))至药物中杂质进行鉴定 实验条件 样品制备：称取厄他培南原料药25mg于25mL水中，现配现用 A. LC/ UPLC 条件 LC系统： ACQUITY UPLC 色谱柱： BEH Shield RP C18(100×2.1 mm， 1.7 um)(Part No.186002854) 柱温： 25℃ 样品室温度： 4℃ 进样量： 1.5pL 流速： 0.40 mL/min 流动相A： 0.1 mM NHAc H，0 流动相B： ACN Gradient梯度表： Time Flow %A Curve 0 0.400 98.5 Initial 1.36 0.400 98.5 2.00 0.400 95.0 7.48 0.400 85.0 15.0 9.00 0.400 75.0 25.0 10.00 0.400 75.0 25.0 12.00 0.400 98.5 1.5 1 B. MS条件 MS系统： Xevo G2-S QTof 离子化模式： ESI+ 毛细管电压： 3.0 KV 源温度： 120℃ 雾化气温度： 500℃ 雾化气流速： 900L/h 锥孔气流速： 90 L/h C.PDA检测器 紫外检测波长：230nm D. 软件 背景介绍 厄他培南为美国默克制药公司开发的新型碳青霉烯类抗生素，它具有强效的抗菌活性，广泛适用于敏感菌所致的中、重度感染。近年来，国内已准备开发其仿制药。但如今基于药品安全的考虑，仿制药中的有关物质的检测越发引起注意，，中国药典上也明确规定，药物中杂质的限度仅为0.1%(毒性药物限度则更低)，高于此水平的所有未知杂质均应被鉴别。所以，如何高效快速地测定药物中的杂质，这一课题逐渐成为药物研究过程中亟待解决的难点。 文献中报道的厄他培南HPLC检测方法所用的流动相为0.1%磷酸-氢氧化钠(pH8)体系，无法进MS系统。且检测方法时间长，需50 min。 本文采用沃特世 (Waters)超高效液相色谱飞行时间质谱联用 (ACQUITYUPLCI-CLASS/Xevo G2-SQTof) 技术对厄他培南(C2H25N0，S) 片剂样品杂质进行分析，快速准确推测其杂质的分子式和结构式，并进行相对定量。 [应用纪要] 实验流程 图2.实验流程图 结果与讨论 (1)采用UPLC方法，各个杂质与母药尽可能得到分离，为质谱分析提供好的分离条件；分析周期只需12 min，质谱总离子流图上明显可见14-18个色谱峰。 图3.厄他培南样品的紫外及一级质谱总离子流图 [应用纪要] (2)采用MS这种简单实用的专利技术采集样品，它可以实现样品进样一次同时得到一级质谱图和丰富的离子碎片信息，其中包括了母离子扫描、子离子扫描和中性丢失扫描的结果，并且避免了杂质信号的丢失。 图4.采用MS*一针进样同时得到厄他培南样品的一级及二级质谱总离子流图 图5.厄他培南主峰的一级及二级质谱图 (3)应用强大的UNIFI软件来确定杂质的分子式及结构： UNIFI软件的人性化界面 图6.UNIFI软件的人性化界面 UNIFI软件可显示空白及样品中提取离子流图的差异比较图，更便于处理数据。 图7.UNIFI软件的谱图对比功能 [应用纪要] (4) Xevo G2-S QTof系统应用LockSprary"技术获得各色谱峰的准确分子量， UNIFI软件再通过准确分子量、同位素分布及子离子信息三个要素，自动得出最可能的分子式。 图8.UNIFI软件的自动判断分子式 (5)软件通过MassFragment"功能可自动对二级碎片进行归属，以便进一步确认结构，如图9。 图9.UNIFI软件自动对二级碎片进行归属 (MassFragment功能) [应用纪要] (6)通过Location功能可以对发生反应的位点进行判断，如软件判断出2.66 min的杂质为Etapenem+ Hz0， 利用location功能判断水合的可能位点。如图9，软件进行自动打分，绿色处发生反应可能性更高。 图10.UNIFI软件自动对反应位点进行打分(Location功能) (7)UNIFI软件会自动给出杂质列表，提供其分子量、分子式及相应的杂质信息，同时也有其强度响应信息，可用于相对定量。软件共找出厄他培南的19个相关杂质，如图11，最终确认出杂质的结构，见图12。 图11.UNIFI软件自动给出杂质的可能结构列表 图12.厄他培南杂质的可能结构 讨论 随着药物质量标准的要求提高，需要对药物中的有关物质进行定性分析，得到有关物质可靠的结构信息对药物质量控制和质量保证都起着重要的作用。本文采用沃特世ACQUITY UPLC/XevoG2-S QTOF系统，对药物厄他培南样品有关物质进行结构鉴定，通过强大的软件功能，将复杂的结构鉴定过程变得智能而快速。大大节省人力物力及时间成本，对于药物的有关物质研究工作起到积极的推动作用。 沃特斯中国有限公司沃特世科技(上海)有限公司 Waters 北京：010-52093866 ( 上海：021-61562666 广州：020-28296555 ) THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. ( 成戈：028-65545999 ) 香港：852-29641800 O2013年沃特世公司。于中国印制2013年8月 免费售后服务热线：800(400) 820 2676Www.waters.com 应用ACQUITY UPLC/Xevo G-S QTof系统及UNIFI软件对厄他培南药物中杂质进行鉴定