葡萄酒中还原糖检测方案

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葡萄酒中还原糖的测定 方法原理： 根据国标GB/T5009.7-2008中葡萄酒中还原糖的测定方法进行修改。定量且过量的碱性溶液中的硫酸铜（斐林试剂）由糖的醛基被氧化，铜（II）在碱性环境生成铜的氢氧化物，加热后作为氧化物析出，生成砖红色的氧化亚铜沉淀： 还原糖 + Cu2+ + OH - →Cu2O↓ + Cu2+(exc.) 过量的Cu（Ⅱ）的少量过量的碘化钾（KI），在酸性环境中，随之形成碘： Cu2+(exc.) + KI + H+ → I2 + Cu+ 然后用硫代硫酸钠滴定反应生成的碘，其中消耗的硫代硫酸钠正比于加入到样品中过量的铜（II），并因此创建微量糖含量的标准曲线： I2 + 2 Na2S2O3 → 2 NaI+ Na2S4O6 仪器配置和附件： - TITREX中央模块。 - 1号自动滴定管，滴定剂试剂用量。 - 2号自动滴定管，添加斐林试剂A（硫酸铜） - 两个蠕动泵，分别添加碘化钾和硫酸溶液 - 一个添加斐林试剂B的蠕动泵 - 汉密尔顿氧化还原复合电极 - 打印机EPSON LX300+（可选） 根据自动化程度的所需的配置，可提供： - T9216，16位恒温自动进样器。 如果不使用恒温自动进样器，需要手动操作，氧化样品时需要以下配件： - 加热板 - 不锈钢支架，高硼硅玻璃瓶 - 不锈钢冷却装置 所需试剂 - 滴定剂：硫代硫酸钠0.5 M - 斐林试剂A - 斐林试剂B - 硫酸25％w / v - 碘化钾（KI）30％w / v - 无水葡萄糖（有关标准编制） - 无水果糖（有关标准编制） - 沸石 注意事项： - 以下所示的方法中，对滴定剂的浓度进行了优化，但是在实际的实验中，也可以使用浓度更小的硫代硫酸钠溶液（0.25M）。 - 由于该方法涉及使用到校准曲线，没有必要对Na2S2O3溶液和斐林试剂A的浓度进行标定。 样品制备： 取100mL葡萄酒或葡萄汁，过滤或离心分离几分钟。而后使用的玻璃移液管取出5毫升的样品（或标准）。还原糖含量超过25克/升的样品应适当稀释，使用微量移液管，取少量的样品（如胰岛素剂量为1毫升，以1:5的比例进行稀释）。 配制标准： 同样准确取5ml的标准溶液，标准溶液为还原糖浓度分别为0，5，10，15，20和25克/升，建立还原糖的标准曲线。首先称取葡萄糖12.5克和12.5克果糖（1:1），得到标准储备溶液，然后逐一进行稀释，得到5种不同浓度的标准曲线。   注意事项： - 标准溶液配制好后，必须存储在冰箱中。以这种方式保存的标准是至少可以保存6个月。超过这个期限后，若再使用，需对标准浓度进行标定。 - 配制标准液的葡萄糖和果糖，必须是无水葡萄糖和果糖。 方法设定： 1、在“新方法”中编辑标准程序，选择“还原糖”的分析方法类型。 2、填写关于滴定管以及移液泵的相关参数，保存方法。 3、在“加载方法”或在“首选项”中进行调用方法。 样品和标准品的氧化和标定： 首先使用滴定管添加斐林试剂A，使用移液泵添加B，按照相应的程序，在0-25克/升的范围内的校准和测量时，两种物质的添加量分别是15和10mL。使用自动进样器，您可以完全自动完成这个过程。 在每个滴定杯中，使用移液管加入5mL的标准品或待测样品，而后进行加热氧化。它可以通过两种方式来完成：将滴定杯放置在8个位置的不锈钢支架上，放在加热板上加热，沸腾后，保持2分钟，为避免爆沸，可在滴定杯中加入几粒沸石。然后将样品冷却，使用相应的滴定程序进行滴定。  样品和标准品，用硫代硫酸钠滴定之前需通过移液泵加入25％的硫酸和30％的KI。滴定开始前由于碘单质的存在，样品溶液成褐色，滴定结束后样品溶液为无色。 建立校正曲线： 准备6个玻璃滴定杯，其中1个为空白测试，其余5个为5个标准浓度系列溶液。添加几粒浮石，煮沸，氧化，冷却后加入相应的25％的硫酸和30％的KI。使用还原糖专用程序进行滴定，所有的标准滴定结束后，显示屏将显示标准曲线，存储所有的标准曲线。在结果异常的情况下，可以编辑某个点的标准或重复标准的滴定。   重要事项： - 必须进行标准溶液的滴定，除了可以校验菲林试剂和标准溶液外，还方便具体样品还原糖浓度的计算。 注意事项： - 如果样品中还原糖含量较低，例如小于10g/L，这时应在在0-10 g/L的范围内创建标准曲线。除空白外，标准系列浓度为2，4，6，8，和10 g/L。在这种情况下，在标准溶液和样品中，加入5mL斐林试剂A和7.5mL的斐林试剂B，用0.25N硫代硫酸钠进行滴定。 - 标准品必须是无水葡萄糖和果糖 结果： 本实验中所提供的结果以g / L的还原糖表示。 PAGE - 1 -