乳粉中褪黑色素检测方案

智能文字提取功能测试中

PreeKem屹尧科技全自动固相萃取-液相色谱法检测牛奶中褪黑色素的含量 引言 03 编号：SUF1502 摘要： 本文建立了牛奶中褪黑色素的 ASPE-HPLC (ASPE， Automatic Solid-PhaseExtraction) 法。牛奶中添加浓度为0.05 ug的褪黑色素标准物质，经蛋白沉淀后进行ASPE 净化。HPLC检测显示：褪黑色素在0.02-0.5 u g/mL范围内，线性关系良好，平均回收率为95.6%，平行测定三次添加回收的相对标准偏差(RSD) 为0.18%。该方法回收率、重复性和精密度好，适用范围广，满足褪黑色素检测的要求。 关键词：牛奶，褪黑色素， ASPE-HPLC 01 褪黑色素(Melatonine， MT) 因为能使皮肤变白而得名，是由脑松果体分泌的激素之一。 褪黑色素属于吲哚杂环类化合物，其化学名是N-乙酰基-5甲氧基色胺，又称为松果体素、褪黑素、褪黑色素。褪黑素合成后，储存在松果体内，交感神经兴奋支配松果体细胞释放褪黑素人血。 褪黑色素可抑制下丘脑-垂体-性腺轴，使促性腺激素释放激素、促性腺激素、黄体生成素以及卵泡雌激素的含量均减低，并可直接作用于性腺，降低雄激素、雌激素及孕激素的含量。另外， MT有强大的神经内分泌免疫调节活性和清除自由基抗氧化能力，可能会成为新的抗病毒治疗的方法和途径。MT 最终在肝脏中代谢，肝细胞的损伤可影响体内MT的水平。 世界各国对褪黑色素的看法： 英国： 国防部赞助的试验证实褪黑素不仅不能治疗失眠，反而对人体有害。 中国台湾： 药店因出售含褪黑素西药成分的药品被处罚冰岛： 冬季忧郁症体内所分泌的褪黑素的含量比正常人多出2.4倍，褪黑素被冰岛科学家卡拉 多特尔认为是冬季忧郁症的祸首倍。 图1褪黑色素结构图 1.1样品提取 (1)称取牛奶样品10 mL (2)加入1mL50%高氯酸溶液，2mL30%(W/V)硫酸锌溶液， 1mL15%亚铁氰化钾溶液 (3)振荡1min，离心5分钟(转速10000转|分钟) (4)过滤，取上清液3ml用氢氧化钠调节PH值至2.6后待净化 1.2 样品 ASPE净化 (1)待净化液采用 EXTRA-ASPE进行净化 (2)在HLB (60mg，3mL)小柱上装上3mL柱密封塞 (3)将塞好密封塞的固相萃取小柱放入 EXTRA全自动固相萃取仪的3 mL SPE 架上。 (4)将溶剂瓶S1 中装入500 mL 甲醇溶液；将溶剂瓶 S2 中装入500mL2%甲醇溶液；溶剂瓶V1中装入800 mL水溶液 (5) 在控制 EXTR-ASPE 系统的 PC 软件方法设置界面上，设置牛奶中褪黑色素的固相萃取方法(详细步骤参见表1)。 (6)将待净化样品放入样品架内。 (7)设置运行界面，开始样品净化操作。 (8)固相萃取完成后，净化液于45℃下氮吹蒸发至干，用甲醇溶液定容至1mL，用于液相色谱分析。 表1 ASPE 净化详细方法列表 动作 位置 溶剂 体积(mL) 抽溶剂速度 (mL/min) 打溶剂速度 (mLmin) 清洗 外针 水 6 120 120 活化 甲醇 3 15 1.5 水 3 15 1.5 上样 样品 5 15 1.0 空气 0.5 15 2.0 清洗 外针 水 6 120 120 淋洗 2%甲醇 3 15 1.5 空气 6 60 60 洗脱 甲醇 1 8 1.0 空气 6 60 60 EXTRA 全自动固相萃取仪 液相色谱检测条件 3结果分析 4 结论 色谱柱： CNW Athena C18-WP 4.6mm*150mm， 3.1褪黑色素标准色谱图 5um 3.2牛奶中褪黑色素标准添加色谱图 柱温：30℃ 建立了 APSE-HPLC 法测定牛奶中褪黑色素的分析方法。实验显示：褪黑色素的平均回收率为95.6%、方法精密度为 0.18%。 检测器： FLD检测波长：激发波长：286nm，发射波长：352nm流动相：甲醇：水=60：40 平行测定3次添加实验，计算方法的平均回收率及相对标准偏差(RSD)如表2 实验结果表明：该方法准确可靠，操作方便，重 现性好。适合牛奶中褪黑色素的快速、准确检测。 表2样品加标回收实验 流速：1mL/min 进样量：10uL 化合物名称 标准加入量 平均回收率 RSD(u g) (%) (%)褪黑色素 0.05 95.6 0.18 Time[min) 图1褪黑色素标准 HPLC 色谱图 图2牛奶中褪黑色素标准添加 HPLC 色谱图