黄绿绿僵菌扩大液的制作中黄绿绿僵菌扩大液的制作检测方案

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黄绿绿僵菌扩大液的制作 黄绿绿僵菌功效; 1、分解出长石、云母等矿物中的钾、硅，也能分解出磷灰石中的磷，，具有溶磷、释钾和固氮功能，同时能在生长繁殖过程中产生有机酸、氨基酸、多糖、激素等有利于植物吸收和利用的物质。 2、本品在土壤中繁殖后，分泌植物生激素及多种酶，以增强作物对一些病害的抵抗力；也抑制其他病原菌的生长。 3、菌体内的钾在菌体死亡后，游离出来，又可被植物吸收利用。作为微生物肥料中的一种重要功能菌，可提高土壤速效钾、磷含量，提高作物产量和品质等多种效。 黄绿绿僵菌扩大液以一扩十，能节约一定的成本，这是它的优点，因为这个技术对大部分的用户来说，是一个比较新鲜的事务，也是一个很严谨的事，所以中科惠农建议，在做扩大液之前，先要最大化了解EM菌的作用及使用方法，在一切成熟后，才进行扩大液的制作，确保EM菌发挥它该有的功效。 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明 进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于 限定本发明。 [0009] 实施例一、病原菌的分离、鉴定 [0010] 1、材料与方法 [0011] 1. 1 材料 [0012] 在云南省元阳梯田稻田采集到被一种虫生真菌侵染后的罹病白背飞虱Sogatella Furcifera(Horv0th)成虫。 [0013] 马铃薯葡萄糖（PDA)培养基：去皮马铃薯200g，切成小块，加水LL，20min后纱布 过滤，滤液中加葡萄糖20g、琼脂15?20g，加热溶化，定溶至1000mL无菌操作条件：所有的 器皿和用具均经高温灭菌锅（121°C，30min)，接种等操作均在超净工作台内进行。 [0014] 培养条件：置于26°C光照（12L :12D)恒温箱中培养，待菌落形成后，转移到试管 PDA斜面，培养3?4天，转入4°C冰箱储存。 [0015] 1.2病原菌的分离和纯化 [0016] 分离：从罹病白背飞虱成虫尸体上分离病原菌。将白背飞虱成虫尸体按顺序依次 经过70%酒精浸泡30秒、再经过0. 1 %升汞溶液浸泡3分钟（彻底消毒）、最后用无菌水冲 洗三次，将处理好的白背飞虱成虫尸体接种于PDA培养基上。在温度为26°C条件下培养， 长出菌丝后按常规方法进行单孢分离、培养得到纯的、致病力强的黄绿绿僵菌菌株，转移到 PDA斜面上生长3?4天，在4°C冰箱储存。 [0017] 复壮：将分离到的菌株在PDA培养基上培养7?10天后，加入含1 %吐温-80的无 菌水收集孢子，后转移到烧杯内，用玻璃棒搅拌均匀，得到适当浓度（1〇8孢子/Ml)的孢子 悬浮液，用小型喷雾器均匀喷于白背飞虱成虫体表（以虫体表面湿润为度），保持相对湿度 90%以上。收集死虫并保湿，得到的成虫虫尸再按以上方法分离得到致病力更强的菌株。 [0018] 纯化：挑取培养基上菌落上的菌丝，再次接种在新的培养基上。如此多培养几代， 菌株就得到了纯化。 [0019] 1.3病原菌的鉴定 [0020] 根据病原菌的培养性状、菌丝和分生孢子的形态进行鉴定。在40X 10倍生物显微 镜，镜检菌丝和分生孢子的形态。 [0021] 2、结果 [0022] 从被虫生真菌自然侵染的白背飞虱成虫虫体上分离获得野生菌株，在马铃薯葡 萄糖琼脂培养基（PDA)上培养，并回接于白背飞虱成虫复壮获得一菌株，对该菌株进行单 菌丝分离获得纯化的菌株，即黄绿僵菌（Metarhizium Flavoviride)MFYY090714，CGMCC No. 9020〇 [0023] 在PDA培养基上菌落圆形展开，黄绿色，气生菌丝绒毛状致密如絮，背面略显黄 色。分生孢子梗疏松轮状分枝，其上着生1?2个瓶梗，瓶梗杆状，与孢子梗成宽的夹角，顶 部剧尖（7. 2_) 12. 0?4. 8(-15. 6) X 1. 8?3. 0 Μ M，分生孢子单胞，广卵圆形，具不同的端 部，大小为7. 2?9. 3X3. 0?4. 0 Μ M，分生孢子在瓶梗上形成向基性的链。 [0024] 根据观察到的菌落、菌丝和孢子形态，与《昆虫真菌学》上的有关黄绿绿僵菌的形 态特征描述和图谱进行对比分析，鉴定为黄绿绿僵菌。 [0025] 实施例二、黄绿绿僵菌纯化菌株生物学特性 [0026] 1、材料与方法 [0027] 1. 1供试菌株选择纯化后长得均匀且生长旺盛的一皿作为供试菌株。取菌丝再 次接种到PDA培养基上，于26 °C的恒温光照（12L:12D)培养箱中培养。 [0028] 1. 2菌落生长速率和产孢量的测定将事先培养好的黄绿绿僵菌取一皿用8mm 的打孔器打孔取菌，接种于新的培养基上，做三个重复，置于26°C的恒温光照（12D:12L)培 养箱中培养，每天定时测定其直径并记录，直到菌落长满培养基为止。用直径为8_的打孔 器在培养基相同的位置取菌饼，加1 %吐温-80和20ml无菌水，将孢子洗下，制成孢子悬浮 液，用血球计数板测定产孢量。 [0029] 1. 3孢子萌发率的测定将菌株培养5?10天，分别用无菌水收集分生孢子，制 成悬浮液，用带凹槽的载玻片测定孢子萌发率。将孢子悬浮液直接滴在无菌载玻片上，置于 底铺滤纸的培养皿内，滴加几滴无菌水保持湿度在100% RH，培养24小时后镜检，每个处理 三次重复。 [0030] 2、结果 [0031] 由表1可以看出，黄绿绿僵菌菌株MFYY090714属于快速生长的类型。第一天生长 缓慢，是因为菌株刚接种时需要一段时间适应，菌落从第2天生长速度较快。由表2可以看 出，在PDA培养基上培养至第5天产孢量就可达IX 108孢子/Ml。产孢量较高。由表3可 以看出，24小时孢子的萌发率可达85%以上。这些均说明该菌株生长繁殖较快，生物学特 性良好。 [0032] 表1菌落直径的生长速度