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东西分析 猪肉中莱克多巴胺的 GC-MS分析 王成娟 摘要:本文建立了猪肉中莱克多巴胺的 GC-MS 分析方法。样品用高氯酸溶液匀浆,进行超声加热提取,在碱化的条件下用乙酸乙酯萃取,然后用稀盐酸反萃取,固相萃取小柱净化,用4%氨化甲醇溶液洗脱,洗脱液经氮吹仪浓缩,经N,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺 (BSTFA+TMCS 99:1)衍生后进气质联用仪分析,外标法定量。 关键词:猪肉,莱克多巴胺,GC-MS,外标法 莱克多巴胺,英文名称 ractopamine,分子式 C18H23NO3,分子量 337.85, CAS号97825-27-7,可溶于水和乙醇,属于苯乙醇胺类的B2-肾上腺素受体激动剂,能改变能量分配,提高肌肉生长速度,从而改善猪的体重和体瘦肉率。 β2-兴奋剂的检测方法很多,有酶联免疫法,气质联用法,高效液相色谱法,液质联用法等。本文建立了猪肝中莱克多巴胺的 GC-MS分析方法,样品用甲醇超声提取,提取液经固相萃取小柱净化,净化液氮吹仪浓缩至至,经N,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA+TMCS) 衍生后进气质联用仪分析,外标法定量。 结构式: 1实验部分 1.1设备和试剂 设备:气质联用仪 GC-MS3100,分析天平(感量:0.0001g),超声波仪,酸度计,涡旋振荡器,固相萃取仪,阳离子固相萃取小柱(SCX小柱, 60mg, 3mL),氮吹仪,离心机,恒温箱;50ml磨口玻璃离心管,5ml 磨口玻璃离心管,均具塞。10mL磨口具塞比色管,容量瓶,胶头滴管,移液枪。 所有试剂,如未注明纯度,均指分析纯;所有实验室用水均为去离子水。 试剂:莱克多巴胺标准品(纯度≥99%),甲苯(分析纯),衍生试剂 BSTFA+TMCS (99:1),高氯酸,碳酸钠,氯化钠,乙酸乙酯,盐酸,甲醇(色谱纯),氨水,去离子水。 1.2样品前处理 1.2.1提取 称取粉碎好的猪肉肉馅5g(精确到0.01g)于50ml离心管中,加入10ml 0.1mol/L高氯酸溶液,于涡旋振荡器上涡旋 1min ,放入超声波仪中超声20min,取出置于80℃恒温箱中加热30min , 冷却后以 5000r/min 离心5min,取上层清液。在残渣中再加入10ml0.1mol/L 高氯酸溶液,涡旋振荡 30s后离心 5min,将两次上清液合并。用碳酸钠溶液(10%)调 PH至10, 加入4g氯化钠,涡旋混匀,加入10ml乙酸乙酯,涡旋混合1min,离心5min , 吸取上层有机相于另一离心管中;在残渣中再加入10ml乙酸乙酯,涡旋混合1min ,离心5min ,吸取上层有机相合并提取液。然后于提取液中加入4ml0.1mol/L 盐酸溶液,涡旋混合1min,离心 5min , 吸取下层溶液同样步骤重复萃取一次,合并两次萃取液,调PH至2.0,作为备用液。 1.2.2净化 依次用5ml 甲醇、5ml水、5ml 0.03mol/L 的盐酸溶液润洗阳离子固相萃取小柱,取上述备用液过柱,弃去流出液,依次用5ml水和5ml甲醇淋洗柱子,弃去流出液,再用5ml4%氨化甲醇溶液洗脱,收集洗脱液。 1.2.3衍生化 在50℃下于氮吹仪上吹干上述洗脱液,加入400pL 甲苯,涡旋 30s,再加入 100pL衍生化试剂BSTFA+TMCS3 (99:1),涡旋振荡 1min ,在80℃的烘箱中加热衍生1h,完成后取出冷却至室温,待GC-MS分析。 1.3 标准曲线的制备 准确量取适量莱克多巴胺标准储备液于容量瓶中,用甲醇稀释成浓度为 0.05mg/L,0.1mg/L,0.5mg/L,1mg/L,2mg/L 系列标准工作溶液,各取0.5ml在50℃下氮吹至干 东西分析 (与样品液同步氮吹),然后按上述衍生化步骤进行衍生。以莱克多巴胺标准溶液浓度为横坐标,对应的定量离子的峰面积为纵坐标建立标准曲线。 1.4分析条件 色谱条件:Equity-5(30mx0.25 mmx0.25pm)石英毛细管柱,柱前压:80Kpa, 柱流量:1ml/min 进样口:300℃,柱箱:100℃保持1min,以 20℃/min 速率升至290℃保持5min。不分流进样,分流比:30:1,溶剂延迟:8min。 质谱条件:EI源,电子能量: 70eV,离子源温度:200℃,接口温度:290℃,扫描方式:全扫描定性,扫描范围:44.5~400u;选择离子扫描(SIM)定量,监测离子:58,179,234,250;定量离子:58,电子倍增器高压:1550. 2实验结果 2.1标准样品谱图 -TIC 图1莱克多巴胺标样衍生物全扫描 TIC图 320.000- -TIC 图3莱克多巴胺标样衍生物 SIM 扫描TIC图 (1ug/ml) 图4莱克多巴胺标准样品衍生物MC图 图5莱克多巴胺衍生物选择离子扫描质谱图 2.2品普图 图6猪肉实际样品选择离子扫描TIC图 图7猪肉实际样品加标选择离子扫描 TIC图(0.05ug/g) 图8猪肉实际样品加标选择离子扫描 TIC 图(0.10ug/g) 2.3空白实验 除不加猪肉样品外,采用与实际样品完全相同的处理和测定步骤进行平行操作。空白实验结果谱图如下。 图9空白选择离子扫描 TIC图 2.4回收率 准确称取 5g经绞碎过的猪肉样品,添加浓度为 0.05ug/g、0.1ug/g,每个浓度平行两次试验,按照上述方法进行前处理,测得平均回收率分别为76%和80%。 2.5标准曲线及检测结果 以莱克多巴胺标准溶液浓度为横坐标,相应的定量离子峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线。莱克多巴胺衍生物保留时间为13.42 min , 在测定浓度范围内具有良好的线性关系,线性相关系数为0.997, 线性方程为y=3E+06x+2266.5,相对标准偏差≤15%,加标回收率大于75%。此猪肉中未检出莱克多巴胺。 3结果与讨论 3.1实验过程注意事项 1)用氮吹仪浓缩过程中,要严格控制氮气流量,不能太大,否则样品会在氮吹的过程中损失,从而导致实验失败。 2)由于衍生试剂对潮气比较敏感,因此一定要吹干,然后才能加衍生试剂衍生。空气湿度亦对实验有影响。 3)衍生用的甲苯最好用无水硫酸钠除下水。 4)莱克多巴胺衍生物不稳定,容易分解,不可放置时间太长。 5)定性定量离子的选择:参照标准中选择m/z 163,192,234,250作为监测离子,但实验过程中发现 m/z 58,179,234,250响应值更高,背景噪声更小,其中m/z58为莱克多巴胺衍生物的基峰,故定量离子选择 m/z58 更加合理。 3.2结论 本文部分参照“农业部958公告-4-2007"标准,建立了猪肉中莱克多巴胺的 GC-MS分析方法;该方法在测定浓度范围内线性关系良好,加标回收率大于75%,精密度良好;实验结果表明,该方法适合于莱克多巴胺的定性、定量测定。 -- -
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北京东西分析仪器有限公司为您提供《猪肉试样中莱克多巴胺检测方案(气质联用仪)》,该方案主要用于畜禽肉及副产品中兽药残留检测,参考标准《暂无》,《猪肉试样中莱克多巴胺检测方案(气质联用仪)》用到的仪器有东西分析GC-MS3100型气相色谱-质谱联用仪。
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