黄瓜、番茄中农药敌菌灵和异菌脲残留量检测方案(氮吹仪)

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SPE-HPLC法测定黄瓜、番茄中敌菌灵和异菌脲的残留量 敌菌灵是一种杀菌谱较广的杂环类内吸性杀菌剂，常用于防治蔬菜灰霉病、菌核病、斑枯病、黑斑病、霜霉病、茭白胡麻叶斑病、瓜类碳菌病、黄瓜黑星病和番茄斑枯病等，具有低毒、内吸性、杀菌谱广等特点，广泛应用于粮食蔬菜等农作物。异菌脲是一种二甲酰亚胺类高效广谱、触杀型杀菌剂，对葡萄孢属、核盘菌属、小核菌属、链孢霉属均具有较好抑菌活性，主要用于蔬菜灰霉病、番茄早疫病、苹果斑点落叶病和轮纹病的防治。 我国在2014年发布的最新版《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》限量指标中指出，黄瓜、番茄中敌菌灵的最大残留限量值（MRL）均为10mg/kg，异菌脲的最大残留量（MRL）分别为2mg/kg和5kg/kg。 目前国内对于敌菌灵和异菌脲农药残留量的检测主要有气相色谱法、液相色谱法和气质联用法等，前处理方法主要有液液萃取、固相萃取和基质分散固相萃取等。在比较和分析了上述几种检测方法后，本文采用了固相萃取-高效液相色谱法同时对黄瓜、番茄中敌菌灵和异菌脲农药残留量进行了研究，对不同条件进行了筛选，以提高方法的准确度和精密度，最终建立了一种简便可靠、可操作性强、准确度高的检测方法，可用于同时测定黄瓜、番茄中敌菌灵和异菌脲的农药残留量。 1 材料和方法 1.1 仪器和设备 高效液相色谱仪；全自动定量浓缩仪（氮吹仪）；高速均质机（内切式匀浆机）；电子天平、离心机、超纯水机、超声波清洗器、多功能食品粉碎机。 1.2 试剂和材料 敌菌灵、异菌脲农药标准品（纯度≥98.0%）；甲醇、乙腈、丙酮、正己烷（色谱纯）；氯化钠（分析纯）；Cleanert Florisil柱（1000mg/6ml）；有机微孔滤膜（0.22μm）；超纯水。 1.3 样品预处理 1.3.1 样品预处理过程 准确称取粉碎均匀的试样25g（精确至0.01g）于250ml广口瓶中，加入50.0ml乙腈，均质机高速均质2min，全部倒入100ml聚丙烯（PP）塑料离心管中，4000rpm离心5min，取上清液倒入预先称取5g-7g氯化钠的100ml聚丙烯（PP）塑料离心管中，盖上塞子，剧烈震荡1min，静置30min，使乙腈相和水相充分分层。从离心管中吸取10.0ml乙腈溶液至15ml玻璃样品管中，置于全自动定量浓缩仪80℃水浴氮吹蒸发至近干，加入2.0ml正己烷漩涡混匀待净化。依次用5.0ml正己烷+丙酮（90+10）淋洗液和5.0ml正己烷预淋洗Florisil小柱，当正己烷液面层到达柱吸附层表面时，立即移入待净化样液，弃去上样流出液，用5.0ml正己烷+丙酮（90+10）淋洗液清洗样品管后淋洗小柱，并重复一次，用15ml玻璃样品管接收洗脱液。将盛有洗脱液样品管置于全自动定量浓缩仪上，水浴50℃氮吹蒸发至干，加入2.0ml甲醇漩涡混匀，过0.22μm有机微孔滤膜，上液相色谱测定。 1.3.2 恒奥科技可提供的预处理仪器 样品预处理的基本过程为：粉碎→均质→离心→提取有效成分→氮吹浓缩→漩涡混匀→固相萃取净化→氮吹浓缩→漩涡混匀→过滤→上样 其中恒奥科技可提供的前处理设备如下：① 内切式匀浆机：将粉碎后的样品进行高速均质，以起到匀浆细化的目的。②垂直振荡器：样品匀浆后，需加入乙腈对目标产物进行提取，恒奥公司HVS-10M小型垂直振荡器可直接对实验中的100ml离心管进行剧烈震荡，从而有效提取出目标物。③全自动定量浓缩仪（自动氮吹仪）：提取目标物后，需对样品进行浓缩至近干。恒奥公司的HAC-24B系列氮吹仪配有定量浓缩功能可将样品定量浓缩至1ml或0.5ml；同时仪器带有延时吹扫功能，在将样品浓缩至定量体积后通过设置延时吹扫时间进一步将样品浓缩至近干，满足本实验的要求。④ 漩涡振荡器：浓缩后的样品加入2.0ml正己烷漩涡混匀。⑤ 固相萃取仪：提取后的样品含有其他杂质，上机检验前需去除杂质。恒奥公司的HSE-08A固相萃取装置可精确设定流速、正压洗脱，确保目标分析物质的高效萃取。 HFJ-25内切式匀浆机 HVS-10M小型垂直振荡器 HAC-24A全自动定量浓缩仪（氮吹仪） HMV-50A漩涡混合器 HSE-08A半自动固相萃取仪 1.4 色谱条件 色谱柱：AgilentZORBAX Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm，5μm)； 流动相：A为乙腈，B为水梯度洗脱，梯度条件见表1； 柱温：30℃； 流速：1.0ml/min； 检测器：二极管阵列（DAD）； 紫外检测波长：218nm； 进样量：20μl。 表1 流动相梯度表 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0.0 45 55 15.0 85 15 16.0 100 0 18.0 100 0 20.0 45 55 28.0 45 55 3 结论 建立了采用固相萃取—高效液相色谱法同时测定黄瓜、番茄中敌菌灵和异菌脲农药残留量的方法，并优化了实验条件。本实验敌菌灵和异菌脲两种农药的添加回收率在82.5%-102.8%之间，RSD在2.95%-8.68%之间，精密度和准确度都较高，操作简单快捷、方法准确可靠，使用本方法完全可以满足黄瓜、番茄中敌菌灵和异菌脲农药残留量的日常监测需求。