面膜中氟轻松检测方案(液质联用仪)

智能文字提取功能测试中

SSL-CA14-284Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-237 上海市淮海西路570号红坊E楼http：//www.shimadzu.com.cn咨询电话：021-22013542 超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法测定面膜化妆品中氟轻松的含量 LCMSMS-237 摘要：本文建立了一种使用岛津三重四极杆质谱仪 LCMS-8040 测定面膜化妆品中氟轻松含量的方法。参照国家食品药品监管总局关于面膜类化妆品中氟轻松的标准测试方法，采用基质加标曲线外标法定量，所得校准曲线线性良好，线性相关系数为0.9999，对低、中、高不同浓度的标样平行测试6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在 0.05~0.15%和1.40~3.93%之间，且方法检出限和定量限分别为 0.004 ug/g 和 0.012 ug/g， 完全满足国家食品药品监管总局公布的关于面膜类化妆品测试标准中检出限(0.03 pg/g)和定量限(0.050pg/g)的要求。该方法具有分析速度快、灵敏度高、重复性好的优势，可用于面膜类化妆品中氟轻松含量的检测。 关键词：三重四极杆质谱 面膜 氟轻松 面膜类化妆品与人们的生活密切相关，已成为日常生活必不可少的消费品之一，关于其安全性也是广大消费者关注的问题。研究表明，糖皮质激素可以在短时间内产生强大的抗炎和抑制免疫效应，可以使皮肤的毛细血管强烈收缩，临床表现的效果就是祛痘、祛红、美白、嫩肤等。因此添加了该类激素的面膜类化妆品具有一定的嫩肤美白效果，但是该激素的作用却治标不治本，并且会抑制皮肤新陈代谢，久而久之会导致皮皮萎缩、变薄、毛细血管扩张、色素斑、炎性丘疹等典型的激素依赖性皮炎症状。我国已经明确规定面膜类化妆品中严禁添加各种糖皮质 激素，并且发布了关于面膜类化妆品中糖皮质激素标准检测方法(GB/T24800.2-2009)，但该标准检测成分中不包括氟轻松，氟轻松作为糖皮质激素在欧洲药典中却有收载。因此，为加强面膜类化妆品安全管理及规避标准盲点，2016年5月18日，国家食品药品监管总局发布了面膜类化妆品中氟轻松检测的标准方法。 本文利用岛津 LCMS-8040 三重四极杆质谱仪，并参考国家食品药品监管总局发布的面膜类化妆品中氟轻松测试方法，建立了-种快速、宽线性范围、高灵敏度的检测办法，供相关检测人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 与三重四极杆质谱仪LCMS-8040 联用系统。具体配置为 LC-30ADx2输液泵， DGU-20A5在线脱气机， SIL-30AC自动进样器， CTO-30A柱温箱， CBM-20A 系统控制器， LCMS-8040 三重四极杆质谱仪， LabSolutions Ver.5.60 SP2色谱工作站。 1.2分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack XR-ODS II 2.0 mm I.D.x 50 mm L.， 1.6 um 流速：!：0.3mL/min 柱温：35℃ 进样量：5pL 流动相A： 0.1%甲酸水溶液 流动相B： 0.1%甲酸乙腈溶液 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度30%，时间程序见表1。 表1梯度洗脱程序 Time(min) Module Command Value 1.00 Pumps Pump B Conc. 30 1.10 Pumps Pump B Conc. 40 2.50 Pumps Pump B Conc. 40 3.00 Pumps Pump B Conc. 95 5.40 Pumps Pump B Conc. 95 5.50 Pumps Pump B Conc. 30 8.00 Controller Stop 质谱条件 离子化模式： ESI，正离子扫描加热模块温度：450℃离子喷雾电压：+4.5kV扫描模式：多反应监测(MRM)雾化气：氮气 3.0L/min驻留时间： 100msec干燥气：氮气 15.0L/min延迟时间： 3.0 msec碰撞气：氩气MRM参数：见表2 DL温度：280℃ 表2 氟轻松 MRM 参数 物质名称 英文名称 CAS 产物离 Q1 Pre 化学结构式 前体离子 CE(V) NO. 子 Bias(V) HO 0 337.10* -17.0 -16.0 HO 67-73-2 453.10 Q3 Pre Bias(V) -24.0 氟轻松 Fluocinolone Acetonide 121.10 -17.0 -32.0 -23.0 “*”定量离子 1.3样品制备 1.3.1提取 称取样品(带有载体的面膜，去除载体后取样)0.2g， 精确至0.0001 g， 置15 mL具塞离心管中，加入3.0 mL 饱和氯化钠溶液，于涡旋混合器上混合使样品分散，准确加入2.0 mL乙腈，充分涡旋提取 2.0 min， 以 5000 r/min 离心10 min， 吸出上层清液置于另一50mL具塞离心管中，下层溶液用 2.0 mL 乙腈重复提取一次，合并两次乙腈提取液，向提取液中加入40mL纯化水，混匀，加入10%亚铁氰化钾溶液0.2 mL，混匀，加入20%乙酸锌溶液0.2mL，混匀，以5000 r/min 离心10 min， 取全部上清液待进行净化处理。 3.1.2净化 将 SPE 固相萃取小柱接上固相萃取装置，并以此依次用甲醇5.0 mL、水10mL进行活化。将待净化的样品上清液(1.3.1)倒入漏斗，经滤纸滤过后，滤液流经小柱，待样品溶液自然流尽后，用10%乙腈水溶液10 mL 清洗小柱，待清洗液自然流尽后，用吸小球吹出小柱中的残留液。在柱出口处接一10 mL 具塞离心管，用甲醇4.0 mL淋洗小柱，待甲醇自然流尽后，用吸小球吹出小柱中的残留液。取下离心管，将接收的甲醇用氮气吹干，加50%甲醇水溶液1.0 mL 重新溶解后测定。 1.4基质标准曲线溶液制备 1.4.1 标准品溶液配制 用甲醇配制 1000 mg/L 氟轻松储备液，用乙腈逐级稀释分别得到5.0 ug/L、10 ug/L、20 ug/L、50 ug/L 和 200 ug/L 的标准溶液。 1.4.2 基质标准曲线溶液制备 称取空白样品5份(带有有体的面膜，去除载体后取司)，每份0.2g， 置15 mL 具塞离心管中，分别精密加入各浓度的标准工作溶液(1.4.1)0.2 mL，按样品处理(1.3)步骤操作，将接收的甲醇用氮气吹干，用50%的甲醇水溶液1.0mL 重新溶解后测定。 结果与讨论 2.1质谱扫描图 氟轻松一级质谱扫描图 氟轻松产物离子扫描图(CE 值-23V) 图1氟轻松质谱扫描图 2.2空白基质标准溶液 MRM 色谱图 图220.0 ug/L 氟轻松标样的 MRM 色谱图 2.3线性范围 将浓度为 5.0 ug/L、10 ug/L、20 ug/L、50 ug/L 和 200 ug/L 的基质标准曲线，按1.2中的分析条件进行测定，以浓度比为横坐标，峰面积为纵坐标，外标法制作校准曲线，如图3所示，线性方程、线性范围和相关系数见表3。 图3氟轻松基质标准曲线 表3线性方程、相关系数 物质名称 校准曲线 线性范围 (ug/L) 准确度(%) 相关系数R 氟轻松 Y=(402.137)X+(1218.08) 5.0~200.0 96.2~102.5 0.9999 2.4精密度实验 将浓度分别为 10 ug/L、50 ug/L 和 200 ug/L 的基质标准溶液，各平行测定6次，考察仪器的重复性，保留时间和峰面积重复性结果如表4所示，仪器重复性良好。 表4氟轻松保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 名称 RSD %(10 ug/L) RSD%(50 pg/L) RSD%(200 ug/L) R.T. Area R.T. Area R.T. Area 氟轻松 0.15 3.93 0.05 1.95 0.10 1.40 2.5灵敏度实验 取浓度为 5.0 ug/L 基质标准溶液进样分析，由信噪比计算氟轻松检出限 (LOD，S/N=3)和定量限(LOQ，S/N=10)，结果如表5所示。 表5检出限和定量限 名称 检出限(ug/g) 定量限(ug/g) 氟轻松 0.004 0.012 2.6基质加标实验 称取空白基质样品0.2g，并精确至0.0001g，添加氟轻松标准品溶液，制备成浓度分别为 10 ug/L(0.05 ug/g)和 50 ug/L(0.25 ug/g)的加标溶液，同时制备空白基质样品，均按照1.3对样品进行前处理，同时根据国家食药总局公布的氟轻松测试标准方法，样品的定容体积可为0.2 mL 或根据实际需要作相应的调整，鉴于岛津液质联用仪 LCMS-8040 高灵敏度的特点以及前处理操作便利的考虑，确定最终定容体积为1.0 mL，通过分析计算加标回收率，结果如表6所示，基质空白和10 ug/L(0.05 ug/g)加标浓度的样品色谱图分别见下图4和5。 图4空白基质样品色谱图 (x1，000) 图510 pg/L 基质加标色谱图(即0.05 ug/g) 表6基质样品加标回收率结果 名称 空白样品 加标回收率(%) 浓度(ug/g) 加标浓度(0.05 ug/g) 加标浓度(0.25 ug/g) 氟轻松 0.013 106.5 107.8 结论 本文建立了岛津三重四极杆质谱仪 LCMS-8040 测定面膜中氟轻松含量的方法。参照国家食品药品监管总局关于面膜中氟轻松的标准测试方法，采用基质后加标外标定量法，校准曲线线性良好，线性相关系数在 0.9999 之间，对低、中、高不同浓度的标样平行测试6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在 0.05~0.15%和1.40~3.93%之间，制备浓度为0.05ug/g 和 0.5 ug/g加标样品，其加标回收率分别为106.5%和107.8%。方法检出限和定量限分别为0.004 ug/g 和0.012 ug/g， 完全满足国家食品药品监管总局发布的关于面膜类化妆品中氟轻松测试标准要求。该方法具有分析速度快、灵敏度高、重复性好的优势，可用于面膜类化妆品中氟轻松含量的检测。 田岛津全球应用技术开发支持中心 岛津建立了一种使用三重四极杆质谱仪LCMS-8040测定面膜化妆品中氟轻松含量的方法。参照国家食品药品监管总局关于面膜类化妆品中氟轻松的标准测试方法，采用基质加标曲线外标法定量，所得校准曲线线性良好，线性相关系数为0.9999，对低、中、高不同浓度的标样平行测试6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.05~0.15%和1.40~3.93%之间，且方法检出限和定量限分别为0.004 μg/g和0.012 μg/g，完全满足国家食品药品监管总局公布的关于面膜类化妆品测试标准中检出限(0.03 μg/g）和定量限(0.050 μg/g）的要求。该方法具有分析速度快、灵敏度高、重复性好的优势，可用于面膜类化妆品中氟轻松含量的检测。