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Agela Technologies博纳艾杰尔产品应用案例 土鳖虫微粉中游离氨基酸分析报告 AP10081 应用及技术服务部 摘要:本实验采用目前广泛使用的以OPA(邻苯二甲醛)和FMOC(9-芴基甲基氯甲酸盐)为衍生剂的柱前衍生HPLC氨基酸分析方法,同时采用反相高效液相色谱法,以正缬氨酸为内标物,使用 DurashellAA 氨基酸分析方法包,分析土鳖虫微粉中游离氨基酸。本方法快速、灵敏、准确、无需要手工衍生,可全自动化在线分析、衍生试剂无毒、无臭等优点。 关键词:高效液相色谱法;OPA(邻苯二甲醛); FMOC(9-芴基甲基氯甲酸盐);土鳖虫微粉; DurashellAA;氨基酸 前言 氨基酸是生物体中重要的生命物质,是组成酶和蛋白质的基本单元。作为小分子,氨基酸对生物大分子的活性及其生理功能起着极为重要的作用;作为配体,它可与多种金属离子配位,为研究抗肿瘤、抗癌药物提供信息。各种氨基酸在生物体中具有不同的生物功能,因此,准确灵敏地测定食物、药品和生物样品中氨基酸的含量具有十分重要的意义。 本实验采用DurashellAA氨基酸分析方法包中的检测标准, 使用Durashell AA氨基酸分析专用柱对土鳖虫微粉中游离氨基酸进行测试。 实验部分 仪器、试剂与材料 试剂材料 流动相A:称取十二水合磷酸氢二钠7.2 g,-十水合四硼酸钠7.6 g, 加水2000mL,用盐酸(约3.0mL) 调节PH至8.2,用0.45um滤膜过滤; 流动相B:取甲醇450mL, 乙腈450mL, 水100mL,混匀,超声脱气; 稀盐酸:取36%盐酸4.16 mL, 加水稀释至500 mL; 衍生试剂(OPA): 取 Durashell AA 氨基酸分析方法包中OPA-A试剂1支,加入 OPA-B 试剂 60uL,混匀,即得; 稀释剂:取100mL 流动相A,加磷酸0.5 mL,混匀; 混合氨基酸对照品:(L-门冬氨酸、L-谷氨酸、L-丝氨酸、,甘氨酸、L-组氨酸、L-精氨酸、L-苏氨酸、L-丙氨酸、L-脯氨酸、氯化铵、L-酪氨酸、L-缬氨酸、L-甲硫氨酸、L-是色氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-赖氨酸浓度为 2.5 umol/mL, L-胱氨酸浓度为1.25 umol/mL); 土鳖虫微粉:褐色粉末,由某药科大学提供。 样品制备 衍生用混合氨基酸标准溶液:准确量取氨基酸分析方法组件包中的氨基酸标准溶液100pL, 置于2mL样品瓶中,准确加入内标溶液50pL, 0.1 mol/L 盐酸溶液 400uL,混匀,作为衍生用混合氨基酸标准溶液; 衍生用土鳖虫微粉样品溶液:准确称取样品 0.5 g, 加乙腈/水=50/50(v/v) 25 mL,混匀,超声处理 30 min, 经0.45 um 针筒过滤器过滤,取续滤液作为样品试液,准确量取样品溶液 500 uL, 置于2.0mL样品瓶中,准确加入内标溶液50 uL, 混匀,作为衍生用样品溶液。 色谱条件 色谱柱: Durashell AA; 3 pm; 4.6×150 mm; 柱 温::45℃: 波 长:338 nm(22 min 切换波长为 262 nm); 进样量:2uL; 衍生程序: DurashellAA 氨基酸分析方法包中氨基酸衍生程序; 梯 度: 表1.液相色谱梯度洗脱条件 时间/min A/% B/% 流速mL/min 0 95 5 1.6 6 90 10 1.6 8 90 10 1.6 10 84 16 1.2 23 58 42 1.2 ( 地址: 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编:300462 ) ( 电话:022-25321032 传真:022-25321033 ) ( Email: s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址: w w w .ag e la.co m . c n 客服:400-606-8099 ) 25 33 67 1.6 28 0 100 1.6 31 0 100 1.6 32 95 5 1.6 35 95 5 1.6 结果与讨论 本实验采用 Durashell AA 氨基酸分析方法包对土鳖虫微粉中氨基酸进行了测试,由图2可知,使用 Durashell AA 氨基酸分析方法包共检测出土鳖虫微粉中17种游离氨基酸,各氨基酸峰间的分离效果较好。 图1.19种混合氨基酸对照溶液高效液相色谱图 按出峰顺序依次为:门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、酪氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、正缬氨酸(内标)、色氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、铵离子、脯氨酸。 图2.土鳖虫微粉样品溶液高效液相色谱图 按出峰顺序依次为:门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸、正缬氨酸(内标)、色氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、铵离子、脯氨酸。 结论 根据实验结果,使用Durashell AA 氨基酸分析方法包共检测出土鳖虫微粉样品中 ( 地址: 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编:300462 电话:022-25321032 传真:022-25321033 ) ( Email: s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址: w w w .ag e la.co m . c n 客服:400-606-8099 ) 17种游离氨基酸,各氨基酸峰间的分离效果较好,能够满足检测要求。 附:相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Durashell AA 氨基酸分析方法包 1 AA952505-K Durashell AA 氨基酸分析专用柱 4.6×250mm, 5 um 1 AA952505-0 1.5 mL样品瓶 短螺纹透明带书写处32×11.6mm 100/PK 1109-0519 1.5mL 样品瓶盖 9mm中心孔蓝盖,红色橡胶/米色 PTFE 隔垫45°Shore A; 1.0 mm 100/PK 0915-1819 散孔滤膜 单膜, 13 mm, 0.45 um 100个/包 AS021345-T 一次性注射器 2mL无针头 100支/包 LZSQ-2ML 甲醇 4L/瓶,色谱纯 4x4L/箱 AH230-4 ( Email: s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址: w w w.ag e la.co m . c n 客服:400-606-8099 ) 地址:天津经济开发区西区南大街 邮编:话: 传真:mail: service@agela.com.cn 网址: www.agela.com.cn 客服: 地址:天津经济开发区西区南大街 邮编:话: 传真:
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艾杰尔飞诺美为您提供《土鳖虫微粉中游离氨基酸检测方案(制备液相色谱)》,该方案主要用于中药材和饮片中含量测定检测,参考标准《暂无》,《土鳖虫微粉中游离氨基酸检测方案(制备液相色谱)》用到的仪器有OCTOPUS 纯化制备色谱系统。
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