灵芝粉中多糖含量检测方案(抽提萃取)

智能文字提取功能测试中

Manon海能仪器民族仪器 品质典范 灵芝粉中多糖含量测定的产品配置单(索氏提取仪) 1引言 灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一。其有多方面的药理活性：能提高机体免疫力、加速血液微循环、提高血液供氧能力、降低机体静止状态下的无效耗氧量等。其提取是采用水提醇沉淀法，该热水提取是在索氏提取仪中完成；而含量测定使用的是苯酚-硫酸法结合紫外分光光度计，灵芝多糖在酸性环境下水解为单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，在特定波长下，以比色法测定。 2 实验部分 2.1实验仪器及试剂 索氏提取仪 SOX406(济南海能仪器股份有限公司)；紫外可见光-分光光度计i8(济南海能仪器股份有限公司)；分析天平；离心机；干燥器；容量瓶50ml/10ml若干。 实验用水应符合 GB/T6682 中三级用水的规格，使用试剂除特殊说明外，均为分析纯。 硫酸；苯酚；；乙醇；葡萄糖；；滤纸；脱脂棉。 2.2实验步骤 1.仪器准备：请参照说明书，清洗溶剂杯。 2.取样：将样品进行粉碎，精确确取样品约 2.0g左右(记为m)，并用双层滤纸包包好，放入滤纸筒内。 3.第一阶段提取：加入抽提溶剂水 60mL，打开冷凝水，启动脂肪测定仪406。设置第一阶段萃取时间2h；萃取温度140℃；实验结束完，将萃取液收集到烧杯内，并用少量蒸馏水由上端萃取口分多次淋洗样品，并入到烧杯内，溶剂杯 内换入新的蒸馏水再次进行萃取。再重复此操作两次。 4.浓缩：将烧杯置于带有石棉网的电炉上烘干至少量水时，在进行水浴烘干。 5.醇沉淀：将残渣用5ml水溶解，边搅拌边缓慢地加乙醇75ml，摇匀，在低温环境下静置12小时，离心，弃去上层清液，沉淀物用热水溶解并转移至 50ml容量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀。 6.苯酚溶液配制：称取 10.0g 苯酚置于200ml容量瓶中，加水定容，置于棕色瓶中，避光保存。 7.葡萄糖溶液配制：|：称取葡萄糖 0.1g溶于100ml容量瓶中，并定容。取其中10ml溶液于100ml容量瓶中，并定容，摇匀得 0.1mg/ml溶液。 8.标准曲线建立：取5个10ml容量瓶，向其中加入0.0，0.2，0.4，0.6.0.8ml葡萄糖溶液，依次加水1ml，苯酚1ml，浓硫酸5ml，振摇5min，置于40℃水浴15min，放冷定容至10ml，用紫外-可见分光光度法在 490nm 波长处测定其吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 9.样品测试：取样品0.5ml， 按9中步骤进行依次加入各种试剂，进行测定。从标准曲线上，读出其浓度 C(ug/ml)。 10.计算结果：：根据药典规定，灵芝以无水葡萄糖计，可根据如下公式进行计算， 增重法计算提取物含量： 3 结果分析 标准曲线 C=-1.556+119.1xA 样品编号 样品质量m/g 浓度c(ug/ml) 吸光度 Abs 多糖含量/% 样品1 2.0005 181.25 1.561 0.906 样品2 2.0020 181.85 1.565 0.908 4 注意事项 1.该实验每阶段收集时，建议多次淋洗。 2.在萃取过程中，将样品浸入到萃取液中，可加速萃取速度。 -- -- 实验仪器及试剂   索氏提取仪 SOX406（济南海能仪器股份有限公司）；紫外可见光-分光光度计i8（济南海能仪器股份有限公司）；分析天平；离心机；干燥器；容量瓶50ml/10ml若干。实验用水应符合GB/T6682中三级用水的规格，使用试剂除特殊说明外，均为分析纯。硫酸；苯酚；乙醇；葡萄糖；滤纸；脱脂棉。