蒙古黄芪和膜荚黄芪中指纹图谱鉴别检测方案(薄层色谱仪)

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高效薄层色谱应用报告 C.10 蒙古黄芪和膜荚黄芪的高效薄层色谱指纹图谱鉴别 mm。 Astragalus.membranaceus 摘要： 蒙古黄芪和膜荚黄芪采用 HPTLC高效硅胶预制薄层板点样，分别采用普通双槽层析缸和全自动展开仪(ADC2)展开，ADC2 展开的色谱图分离度较好。从薄层色谱指纹图谱分析，蒙古黄芪和膜瑛黄芪所含皂苷类主要成分的比例基本一致，而黄酮类成分在量上存在一定的差异。 关键词： 高效薄层色谱法，黄芪，蒙古黄芪，膜荚黄芪，自动展开仪 仪器： ATS 4 全自动薄层色谱点样仪、双槽展开缸、ADC2全自动展开仪、DigiStore2薄层色谱摄像仪 (CAMAG)。 供试液制备： 取本品粉末2g，加甲醇60mL， 加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸至近干，残渣用10 ml 90%甲醇溶解，加至中性氧化铝柱(100~120目， 10 g，内径20mm)上，用40%甲醇100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水10 mL使溶解，过C18小柱，用30%甲醇、甲醇各15 ml洗脱， 收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣用甲醇做成1mL的溶液，过微孔滤膜(0.45um)，取续滤液作为供试液。 标准溶液制备： 取黄芪甲苷、黄芪皂苷II、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮对照品，加甲醇制成每 1mL含1mg的溶液。 色谱条件 薄层板： 硅胶高效预制薄层板(HPTLC-MN)， 220x10cm，用异丙醇预洗，室温下挥干，在110C活化30 min 点样： ATS4条带状点样，条带：8mm，间距： 13mm，边距：8mm，底边距：8mm， 点样速度：80nL/S。分别点样4uL。 展开剂： 二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水-冰醋酸(25：40：15：5：0.5) 展开： 1)点样后立即用 ADC 2展开8.5cm(展开缸预平衡15 min， 自动控制32%的湿度10 min) 2)点样后立即用展开缸展开8.5 cm (预平衡15 min). 检视： 喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰(2 min)，置紫外光灯(366nm)下检视(Fig1~2)。 结果： T：20℃ RH：35% S1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Fig 1 黄芪薄层色谱鉴别 (ADC2展开) 点样顺序： S 黄芪甲苷、黄芪皂苷II、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮(自下至上)；1~8 膜荚黄芪；9~10蒙古黄芪； T：20℃ RH：35% 1 2 3 4 5 6 8 9 Fig 2黄芪薄层色谱鉴别(双槽层析缸展开) 点样顺序： S 黄芪甲苷、黄芪皂苷II、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮(自下至上)；1~8膜荚黄芪；9~10蒙古黄芪； 讨论： 1)采用 ADC 2 展开与普通缸展开，得到基本一致的色谱图，但用 ADC2的色谱图分离度较好，且基本不受外界环境的湿度的影响，重现性好； 2)蒙古黄芪和膜荚黄芪共同收载于《中国药典》2005年版(一部)，两者在功能主治和用法用量上完全一致，从指纹图谱上分析，两者所含皂苷类成分的比例上基本一致，不能明确对两者进行品种鉴定，所含黄酮类成分在量上存在一定的差异。(Fig 1~2). 3)黄芪甲苷为人工产物，来自样品中的各类黄芪皂苷如黄芪皂苷I、Ⅱ等在碱性环境下提取时的脱糖分解产物。 注意事项： ( 1)在《中国药典》2005年版(一部)黄芪鉴别项展开剂中含有三氯甲烷，现改为二氯甲烷，并对展开系统进行了优化； ) ( 2)展开时环境温度20℃左右较好，不宜太高。 ) CAMAG 应用报告 C.文版-更多应用报告请向卡玛公司索取