动物源性食品中氯霉素检测方案(固相萃取)

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深圳逗点生物技术有限公司一-biocomma biotechco.，ltd. 动物源性食品中氯霉素检测的固相萃取方法 (CopureM C18) 一、实验目的 本研究利用固相萃取法法为样品的前处理方法， LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。 二、实验目标物 氯霉素(CAS：56-75-7)。 三、应用范围 本方法适用于动物源性食品中氯霉素的LC-MS/MS检测及确证。 四、参考标准 《GB/T 22338-2008动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》。 五、实验材料 Biocomma° CopureM C18固相萃取柱1000mg/6mL(Cat.No.COC1861000)。 六、实验方法 1、样品提取 将称取5g猪肉试样，精确到0.01 g。置于50mL离心管中，加入5mL水，于涡旋混合器上快速混合1 min， 使试样完全溶解。准确加入15 mL乙酸乙酯，在振荡器上振荡10 min， 以3000 r/min离心10 min， 准确吸取上层乙酸乙酯12 mL转入15mL的离心管中，置于浓缩吹氮仪在45℃吹扫蒸干，加入5mL水溶解，待净化。 2、SPE柱净化 (1)活化：依次采用5 mL甲醇、5 mL水活化C18固相萃取柱。 (2)净化：将提取液过C18固相萃取柱，待溶液完全流出后，用2×3mL水过柱，然后再用5 mL乙腈：水(2：8，v/v)淋洗柱，弃去全部淋出液。用真空泵减压抽干10 min。 (3)洗脱：用6mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液于10 mL离心管中，于45℃用氮气吹干液吹干，用乙腈：水(2：8，v/v)定容至1 mL， 供LC-MS/MS上机测定。 3、LC-MS/MS条件 色谱柱：Venusil ASB C18(2.1×150mm， 5 pm) 质谱仪： API4000 流动相： A： 10 mmol/L乙酸铵溶液 B：甲醇 流速：0.2 mL/min 柱温：40℃ 进样体积：5 uL 离子源：电喷雾(ESI)，负离子模式 检测方式：多反应监测(MRM) 表1质谱仪离子源参数 Source/Gas Collision Gas(CAD) 6 Curtain Gas(CUR) 30 lon Source Gas 1(GS1) 50 lon Source Gas 2(GS 2) 50 Ion Spray Voltage(IS) -4500 Temperature(TEM) 550 Interface Heater(ihe) On 表2氯霉素及内标的母离子和子离子参数表 物质名称 保留时间(min) 检测离子对 DP EP CE CXP 氯霉素 4.90 320.9/151.9 -60 -10 -25 -12 320.9/256.9 -60 -10 -25 -12 氯霉素-D5 4.90 326.1/157.0 -60 -10 -25 -12 七、实验结果 1、2ug/kg猪肉基质氯霉素添加回收结果 表3 2pg/kg猪肉基质氯霉素添加回收结果 名称 回收率(%) 平均 回收率(%) RSD(%) 1 2 3 氯霉素 98.31 96.28 90.61 95.07 4.20 2、添加水平为2ug/kg猪肉基质中氯霉素检测色谱图 图1氯霉素及内标氯霉素-D5总离子流图 图2氯霉素(CAP)(320.9/151.9)质谱图 7.5e47.0e4 6.5e4·6.0e45.5e4 5.0e44.5e4o4.0e4c3.5e43.0e4.2.5e42.0e4. 1.5e41.0e45000.00.0 图3氯霉素-D5(CAP-D5)(326.1/157.0)质谱图 本号： Cww.biocomma.cn 动物源性食品中氯霉素检测的固相萃取方法（Copure  TM  C18）一、实验目的本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。二、实验目标物氯霉素(CAS:56-75-7)。三、应用范围本方法适用于动物源性食品中氯霉素的LC-MS/MS检测及确证。四、参考标准《GB/T 22338-2008动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》。五、实验材料Biocomma   Copure TM   C18固相萃取柱1000mg/6mL(Cat.No.COC1861000)。                         六、实验方法1、样品提取将称取5 g猪肉试样，精确到0.01 g。置于50 mL离心管中，加入5 mL水，于涡旋混合器上快速混合1 min，使试样完全溶解。准确加入15 mL乙酸乙酯，在振荡器上振荡10 min，以3000 r/min离心10 min，准确吸取上层乙酸乙酯12 mL转入15 mL的离心管中，置于浓缩吹氮仪在45 ℃吹扫蒸干，加入5 mL水溶解，待净化。2、SPE柱净化(1)活化：依次采用5 mL甲醇、5 mL水活化C18固相萃取柱。(2)净化：将提取液过C18固相萃取柱，待溶液完全流出后，用2×3 mL水过柱，然后再用5 mL乙腈:水(2:8,v/v)淋洗柱，弃去全部淋出液。用真空泵减压抽干10 min。(3)洗脱：用6 mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液于10 mL离心管中，于45 ℃用氮气吹干液吹干，用乙腈:水(2:8,v/v)定容至1 mL，供LC-MS/MS上机测定。3、LC-MS/MS条件色谱柱：Venusil  ASB C18(2.1×150 mm，5 μm)质谱仪：API 4000流动相：A:  10 mmol/L乙酸铵溶液    B:  甲醇流速：0.2 mL/min柱温：40 ℃进样体积:5μL离子源：电喷雾(ESI)，负离子模式检测方式：多反应监测(MRM)表1  质谱仪离子源参数表2  氯霉素及内标的母离子和子离子参数表七、实验结果1、2μg/kg猪肉基质氯霉素添加回收结果表3  2μg/kg猪肉基质氯霉素添加回收结果2、添加水平为2μg/kg猪肉基质中氯霉素检测色谱图图1 氯霉素及内标氯霉素-D5总离子流图图2 氯霉素(CAP)(320.9/151.9)质谱图图3 氯霉素-D5(CAP-D5)(326.1/157.0)质谱图