粮食中黄曲霉毒素检测方案(氮吹仪)

智能文字提取功能测试中

薄层层析法测定粮食、植物油中的黄曲霉毒素 摘要：本方法适用于出口粮食、植物油中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、的定量测定。基本过程是将提取、浓缩后的样液与标准黄曲霉毒素同时连续薄层层析分离后，对标准点和标样点进行荧光强度扫描测定。本法操作步骤简单、准确性高。 1 样品前处理 1.1 配置标准溶液 配置黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准溶液，浓度为10ug/ml，B1、G1称取1-1.2mg，B2、G2称取0.5-0.6mg，先加入2ml乙腈溶解，再用苯定容至100ml，避光保存于低温冰箱内。 标准溶液浓度及纯度参照GB 5009.22-85《食品中黄曲霉毒素B1的测定方法》中2.14条。 黄曲霉毒素混合标准使用液：用标定过的黄曲霉毒素标准溶液，配置成B1、G1浓度0.2ug/ml，B2、G2浓度0.1ug/ml的混合标准溶液或单一标准溶液。 1.2 样品前处理 1.2.1 试样抽取 按各类出口粮食及油类取样规定，取代表性试样，经过粉碎，连续多次四分法缩分，最后缩分至0.5-1kg。粮食需全部粉碎过20目筛，花生样品脱壳粉碎后过10目筛，混匀。 1.2.2 样品提取 花生玉米等粮食类：称取20g已处理样品，置于250ml具塞三角瓶中，加入30ml正己烷和100ml甲醇-水溶液（55:45），振荡30min，静置分层，以叠成折叠式快速定性滤纸过滤于带刻度的125ml分液漏斗内。加入20ml三氯甲烷，震摇2min。静置分层。将三氯甲烷层用10g无水硫酸钠干燥后收集于浓缩瓶内，在60-70℃水浴减压浓缩至干，用苯-乙腈混合溶液定容至1.0ml，即为分析样液。 花生油等：称取4g油样于小烧杯中，用20ml正己烷将油样全部转至125ml分液漏斗中，再用20ml甲醇-水多次洗涤烧杯，合并洗涤液，分液漏斗震摇2min，静置分层。将下层甲醇-水溶液放入第二个分液漏斗，在原漏斗中加入5ml甲醇-水溶液重复提取一次，提取液一并移入第二个分液漏斗中。加入20ml三氯甲烷，以下按照“花生、玉米等粮食类”自“震摇2min，静置分层”起依法操作。 2 恒奥公司可提供的产品 振荡器 在样品前处理中，首先需要称取20g已处理样品，置于250ml具塞三角瓶中，加入30ml正己烷和100ml甲醇-水溶液（55:45）进行振荡混匀。我公司生产的HMS-310振荡器，是同类产品中技术较先进和质量可靠的产品，运行平稳，噪音小，振荡速度可无级调节，调节范围宽，弹簧万用夹具，可配多种烧瓶，充分混合样品。 主要特点： 1.数显定时，数显转速。 2.占用空间小，输出功率大 3.使用无刷电机。噪音小，运行平稳。 4.主要适用与容量瓶、锥形瓶、烧杯等较大的玻璃器皿进行振荡实验； 垂直振荡器 HVS-6 HVS-10M 样品提取过程中需要添加有机溶剂对样液中的有效成分进行提取。常规萃取都是手动萃取，费时费力，重复性、平行性差，且一次仅能处理一个样品。HVS系列垂直振荡器选用优质电机及科学实用的机械振荡机构，自主研发独特的工艺设计可放置不同规格的分液漏斗和容量瓶等。并带有缓冲功能，可保证玻璃器皿不易碎。代替人工手动振荡，可进行长时间并且频率和振幅可调下进行振荡，使萃取剂与待测物充分混合，提高萃取效率同时可保证实验精度，即提高实验的重复性。 主要特点： 1体积小，运行平稳可靠，低噪音； 2.具有定时，无极调速功能； 3.样品多用途托架，可适应各种容器； 4.人性化控制，带缓启动功能； 5.数显定时，无需操作人员看管； 5.HVS-6应用范围为250mL-2L之间不同规格的分液漏斗，倾斜度可调0-15度。 6.HVS-10适用于10mL-100mL离心管、具塞量筒、容量瓶等。 平行蒸发仪 HPE-12A 1. 在样品前处理的最后，需要对提取液进行减压浓缩。市售产品多采用旋转蒸发仪代替传统的减压蒸馏装置，但是仍然是一次性处理一个样品，我公司产品可以一次性处理6/12/24位样品，并带有摇晃功能，使样品反应更均匀。独特的设计防止样品交叉污染。 主要特点： 1.操作方便。蒸发过程可视化、无样品转移； 2.一次可以处理大批样品，效率高。 3.通过同时加热／摇动／抽真空，浓缩速度快和增加萃取效率； 4.有梯度温度控制系统； 5.不需要用氮气，降低实验成本； 6.溶剂可以冷凝回收，不会排放到室内或环境中造成污染。可以直接放在实验室内，不必放在通风橱中； 7.可加速高沸点物质的蒸发速度； 8.每个样品都有独立的密封，避免交叉污染； 9.数显定时，无需操作人员看管； 10．定量浓缩至1.0或0.5mL 3 薄层层析法分析 2.1初步层析与确证 i. 衍生物法：黄曲霉毒素B1和G1能与二氟乙酸反应产生衍生物（其比移值B1﹥G1）。B2、G2不起反应。于一块5cm*20cm的薄层板上，以下端3cm处为基线，自左端约1cm起沿基线1cm等距离点四个点，依次为：2ul标准混合使用液，20ul样液，于以上两点各加入三氟乙酸一小滴，反应5min后，用低于40℃热风吹2min，冷却后，再依次点2ul混合标准溶液，20ul样液，吹干。将薄层板放入装有10ml乙醚的展开槽内，展至13cm处，取出吹干，在紫外光下观察是否产生与黄曲霉毒素B1、G1标准点相同的衍生物，未加三氟乙酸的第三、四两点，可依次作为样液与标样的衍生物空白对照。 2.1.2黄曲霉毒素G1、G2的确证：可用苯-乙醇-水（46+35+19）展开，若标准点与样液点出现重叠，即可确定。 2.1.3 在展开的薄层板上喷以硫酸（1+3），吹干后，则黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2都变为黄色荧光。 2.2 定量测定：经确证的阳性样品进行薄层分离和定量测定。 2.2.1点板：将10cm*20cm的薄层硅胶板用橡皮刮塞刮去左右两边硅胶层各1cm，以距底边1.5cm处为基线。自左边1cm开始，以1cm间距依次滴加黄曲霉素混合标准使用液1,3,5,7,10ul，依次相当于B1、G1 0.2,0.6,1.0,1.4,2.0,ng；B2、G2 0.1,0.3,0.5,0.7,1.0 ng和样液点。滴加样液体积依样品含黄曲霉毒素含量而定。 2.2. 2 展开：室温20℃，相对湿度月70%条件下，按照以下条件进行连续层析分离。 乙醚饱和： 7min 预展 ： 10min 丙酮-三氯甲烷（7+93）饱和：10min 展开： 15min后，取出吹干。 2.2. 3 观察：于紫外光下，在标准点和与标准比移值相同的样液点下方，用针尖轻刺标记，以确定各点的扫描起点，然后进行扫描测定。