果酱中单核细胞增生李斯特菌检测方案(均质器)

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检测农产品中的单增李斯特菌的前处理方法 引言 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌)是人畜共患病原菌。李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类 (​http:​/​​/​baike.baidu.com​/​view​/​1423592.htm" \t "_blank​)、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。WHO 关于单增李斯特菌食物中毒报告中指出: 4% ~8%的水产品,5% ~10%的奶及奶制品,30%以上的肉制品,15%以上的家禽均被该菌污染。由于单增李斯特菌具有严重危害性,农产品中单增李斯特菌的快速检测方法就显得极为重要。 样品制备 菌株的培养与收集 将保存于-70℃的单增李斯特菌CMCC 54004 接种于TSA 平板进行活化,在36℃培养24 h。从上述培养基上挑取单个典型的菌落接种于TSB 中,于36℃, 200r/min 摇床培养24 h,离心收集菌体,无菌水洗涤两次,以4000 r/min 离心5 min,收集菌体细胞。真空冷冻干燥,冻干粉于-20℃保存备用。 空白农产品样品的制备 将黄瓜洗净、去皮,在无菌条件下切成碎末,真空冷冻干燥备用。牛肉洗净,在无菌条件下去除表层部分,切成碎末,真空冷冻干燥备用。2 种农产品按国标法进行检测,证实不含单增李斯特菌。 人工污染单增李斯特菌农产品的制备 吸取适量单增李斯特菌标准株CMCC 54004 菌悬液至无菌农产品碎末中,混匀稀释,取1 g 放入到9mL 灭菌生理盐水的试管中,进行10 倍系列稀释,每个稀释度平行3 个样,营养琼脂平板计数,选择菌落总数在30 ~ 300 之间的稀释度进行计数。最终得到1 g 农产品中单增李斯特菌浓度为1.78×109cfu。将污染单增李斯特菌的农产品真空冷冻干燥,于-20℃保存备用。 恒奥公司可提供的仪器 拍击式均质器 选购拍击式均质器的必要性 上述实验中对黄瓜进行均质，其要求是再无菌条件下，我公司生产的拍击式均质器可以再完全无菌下进行操作，可以保证操作过程中不引入其它菌类，并且所处理样品均具有代表性。 仪器介绍 HBM-400系列均质器是用来将不同的物质进行均质，以获得该物质具有代表意义的样本。该装置简单耐用，只需将样品和稀释液加入 到无菌的过滤器样品袋中 ，然后将样品袋放入均质仪中，关上门即开始和完成样品的处理。该装置可以有效地分离被包含在固体样品内部和表面的微生物均一样品，确保无菌袋中混合全部的样品具有充分的代表性。 主推产品HBM-400B 运行过程 主要特点  1.运行噪声小和容易操作； 2.可调整的均质时间；固定的或可变的均质速度，可显示拍击板调节间隙的数字显示功能，使处理不同量的样品更明确； 3.为处理微量样品，有可选附件的微量拍击板可更换机构； 4.无菌一次性滤袋，保证卫生和安全； 5.全开启式门，易于清洗； 6.玻璃透明窗口易于观察； 7.样品与均质仪无接触，如无样品泄露则不需进行系统清洗； 8.废液槽以防止样品袋泄漏； 9.为操作者的安全着想，设计有自动停止霍尔开关装置，以防止操作失误夹伤手指。 采购指南 我公司主推产品为HBM-400B，此款仪器性价比较高， 与HBM-400B相比HBM-400D增加了数显调节拍击板功能，而其它两种主要是外观不同，HBM-400C、HBM-400F外形大方美观，适用于高档实验室。 配套装置指南 序号 名称 型号及规格 01 均质袋 50个 02 接水盘 1个 应用领域  拍击式均质器广泛应用于食品检测机构、大中专院校、科研机构、环境监测机构等领域。具体还用于农残、微生物检测、试验前处理中蔬菜、水果、水产品等均质。 比例稀释仪 选购比例稀释仪的必要性 均质样品需要前需要先将样品加入生理盐水等进行等比例稀释 仪器介绍 比例稀释仪可以自动快速完成对任意重量样品的稀释，具有人类工程学的设计，给 使用者带来非常舒适的工作享受。操作只需简单地把开袋器放在天平上，放上样品滤袋天平回零，选择适当的稀释倍数，加入样品，按动开关，稀释液即可快速准确的加入到样品滤袋中，完成稀释工作。配合HMB-400系列拍击式均质器使用，可完成快速精确加样，无需实验人员计算液体分配 只需要输入数值即可完成拍击样品的加样，节省了实验员大量时间精力，减少污染确保样品的纯净度，完全实现了实验自动化 快捷化 精确化的要求。 主要特点 1.仅按二键即可稀释 2.小巧精致，易于操作 3.稀释倍数从1/2至1/99(对倍稀释和99倍稀释) 4.具有分配功能 5.快速计算 6.自动记录袋重 7.固定臂，无机械部件 8.微处理器控制 HCC系列菌落计数器 选购菌落计数器的必要性 实验最后需要选择菌落总数在30 ~ 300 之间的稀释度进行计数。而人工计数具有耗时长、不准确、操作繁琐等缺点。 仪器介绍 菌落计数器是现代微生物检测中先进而高效的菌落计数仪器。我公司生产的型号为HCC-01为半自动菌落计数仪，采用压力传感技术，只需要将培养皿放在压力感应垫，用尖式触笔按顺序点压即可。HCC-90A为全自动菌落计数仪，仪器机身无其他开关，大大提高了仪器的使用寿命，整个过程在软件中进行，实现了菌落计数的自动化操作。 主要特点 HCC-01半自动菌落计数仪  半自动点击式计数，内置平均数计算系统，具有归零功能；      2.LED照明，保护您的眼睛，可选择明暗视野背景，光学放大3X、6X；  适用于任何探针式触笔，压力敏感和计数声响均可调节；  HCC-02可连接电脑，显示记录参数； HCC-90A 全自动菌落计数仪  测定结果重现性和准确性好；  适用于所有培养基 ,自动校正所有来自培养皿的不良影响和成片的菌落自动分割；  适用于传统的平板接种法、螺旋接种法等培养皿；  采用CMOS摄像镜头，保证采集图像高清和准确； 强大的软件支持  可对图像实现放大功能，可快速读取平板、螺旋、涂布、倾倒等菌落数，每小时可计数300个培养皿；  具有批量数据导出功能，计数结果通过excel保存，一键完成自动计数，操作方便。  自动去除干扰背景。  自动显示每个菌落的面积。  可自动和手动对粘连菌落进行分割。  通过设定菌落面积范围，可对不同大小菌落进行计数。  可自由选择标记数字/符号，及标记的颜色。  操作软件采用中文界面，简单方便快捷，亮度、对比度和灵敏度软件内置自动优化；  采集菌落图片以bmp格式手动保存在硬盘，方便调取和查询菌落培养皿图片和计数数据； 采购指南 HCC-01、HCC--02系列为半自动菌落计数器，计数过程需要人工采用尖笔触及观察到的菌落以此计数，适用于清晰、分布均匀和形状规则的菌落。HCC-90A整个计数过程在软件中操作，具有自动校正所有来自培养皿的不良影响和成片的菌落自动分割等功能，在菌落形状不规则分布不均匀等不良情况下准确性高于HCC-01。故适用于计算菌落分布环境稍复杂的情况。 配套装置指南 HCC-01、HCC-02菌落计数仪 名称 数量 90mm培养皿支架 1 150mm培养皿支架 1 60mm培养皿支架 1 120mm培养皿支架 1 90mm培养皿 1 白板笔 2 电源适配器 1 HCC-90A菌落计数仪 电源适配器一个和操作软件一套。 应用领域 全自动菌落计数器广泛应用于食品和饮料的品质和卫生检验、水质分析、乳及乳制品的检测、医院临床检验、化妆品检验和药品的品质和质量检测等。适用于对微生物的菌落计数和菌落生长情况的观察等。