巴戟天中耐斯糖检测方案(蒸发光检测器)

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中国药典2015版ELSD检测的药品名称 2015年版《中华人民共和国药典》 HPLC-ELSD应用集 上海通微分析技术有限公司 目录 山银花中灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙含量检测 01 马鞭草中齐墩果酸和熊果酸含量检测 02 巴戟天中耐斯糖含量检测 03 瓜子金中瓜子金皂苷己含量检测 04 地肤子中地肤子皂苷Ic含量检测 05 知母中知母皂苷BII含量检测 06 益母草中盐酸水苏碱含量检测 07 浙贝母中贝母素甲、贝母素乙含量检测 08 通关藤中通关藤苷H含量检测 09 黄芪中黄芪甲苷的含量检测 10 银杏根提取物中萜类内酯含量检测 11 商陆中商陆皂苷甲含量检测 12 路路通中路路通酸含量检测 13 酸枣仁中酸枣仁皂苷A含量检测 14 薏苡仁中甘油三油酸酯含量检测 15 牛黄蛇胆川贝液中胆酸含量检测 16 西黄丸中猪去氧胆酸含量检测-一一--- 17 清开灵注射液中胆酸、猪去氧胆酸含量检测 18 硫酸庆大霉素中庆大霉素C组分含量检测 19 中国药典2015版ELSD检测的药品名称 20 山银花中灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙含量检测 背景介绍 山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬或黄褐毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花，具有清热解毒，凉散风热的作用，用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温热发病。灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙是2015版《中国药典》中规定的作为山银花质量控制的指标成分，而灰毡毛忍冬皂皂乙和川续断皂苷乙的紫外吸收较弱，ELSD作为一种通用型的质量型检测器，可以检测无紫外吸收或紫外吸收弱的化合物。因此，本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了山银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量的测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现山银花的质量控制。 测试条件 仪器： EasySep-1020液谱色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器 色谱柱： Bischoff ProntoSIL KromaPlus C18， 250mmx4.6 mm， 5 pm 流速：0.7mL/min 柱温：30℃ 流动相：A：乙乙；B：0.4%醋酸溶液 载气流速：2.5L/min 漂移管温度：80℃ 梯度洗脱程序： 时间(min) A(%) B(%) 0 10 90 10 15 85 12 29 71 18 33 67 30 45 55 30.5 10 90 35 10 90 测试结果 11)对照品色普图 图110pL进样量对照品ELSD检测色谱图 序号保留时间名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 20.840 灰毡毛忍冬皂苷乙1683191 170097 6.13 103495 2 22.501 川续断皂苷乙 312340 29774 0.00 107353 总计 1995531 199871 样品制备 对照品溶液制备：取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品、川续断皂苷乙对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1mL含灰毡毛忍冬皂苷乙0.6mg、川续断皂苷乙0.2mg的混合溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率300W， 频率40 kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2)样品色谱图 图210pL进样量山银花样品ELSD检测色谱图 序号保留时间名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 20.818 灰毡毛忍冬皂苷乙 671389 68378 2.43 104900 2 21.499 19639 1743 3.33 84958 3 22.484 川续断皂苷乙 26020 2377 0.00 98445 总计 717048 72498 3)重复性考察 图3对照品10uL进样分离重复性色谱图 精密吸取对照品溶液10 pL，进液相色谱测定，重复进样5次，计算得保留时间RSDs0.5%，峰面积RSD≤3.0%，方法的定量重复性良好。 马鞭草中齐墩果酸和熊果酸含量检测 背景介绍 马鞭草中药材为马鞭草科植物马鞭草的干燥地上部分。其中的主要药用活性成分为齐墩果酸和熊果酸等，其中齐墩果酸具有消炎、增强免疫力、抑制血小板降集、降糖等诸多功效；熊果酸更是具有多种生物活性，在抗肿瘤、抗氧化、抗炎保肝、降血脂等方面具有显著功效。齐墩果酸和熊果酸都属于五环三萜类化合物，这类化合物在化学结构上没有强的紫外吸收基团，只有较弱的末端吸收，紫外检测效果较差，通用型的质量型检测器的信号无需样品具有光学吸收特性，信号响响只与物质质量有关，因此可以很好的实现像齐墩果酸和熊果酸这类无紫外吸收物质的检测。本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD实现了齐墩果酸和熊果酸的有效分离，可以实现马鞭草中药材的质量监测。 测试条件 仪器：EasySep@-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱) UM5000蒸发光散射检测器 色谱柱： Bischoff ProntoSIL KromaPlus C18，250mmx4.6 mm，5 um 流速：1.0 mL/min 柱温：35℃ 流动相：甲醇：0.2%冰醋酸=82：18 载气流速：2.2L/min 漂移管温度：85℃ 司公限有样品制备术 技 对照品溶液的制备：取齐墩果酸对照品、熊果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含齐墩果酸50 pg、熊果酸0.1mg的混合溶液，即得。 测试结果 微通1)对照品色谱图 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 24.467 齐墩果酸 7820 284 1.72 18425 2 25.717 熊果酸 24004 881 0.00 20788 总计 31824 1165 图110pL进样量马鞭草对照品ELSD检测色谱图 巴戟天中耐斯糖含量检测 背景介绍 巴戟天又名巴戟、鸡眼藤、三角藤，为茜草科多年生攀援木质藤本植物，其根入药，是我国著名的四大南药之一，其主要成分为蒽醌类、环烯醚萜类、有机酸、低聚糖类。巴戟天性温味苷，具有补肾助阳、祛风除湿的功效，其中低聚糖类成分有显著抗抑郁活性。由于低聚糖类成分的化学结构中无紫外发色团，仅在末端有吸收，紫外吸收弱，因此采用HPLC-UV不能直接很好的实现其含量检测，而采用HPLC-ELSD法则可有效避免上述缺陷，可以很好的实现巴戟天中耐斯糖的含量检测。 测试条件 样品制备 仪器：EasySep-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器 对照品溶液制备：取耐斯糖对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。 色谱柱： Global Chromatography GS-120-5-C18-BP，250mmx4.6 mm， 5 um 流速：1.0mL/min 柱温：35℃ 流动相：甲醇：水=3：97 供试品溶液的制备：取巴戟天粉末(过三号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相50mL，称定重量，沸水浴中加热30分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，放置，取上清液滤过，取续滤液，即得。 载气流速：2.5L/min 漂移管温度：75℃ 测试结果 1)对照品色谱图 2)样品色谱图 图110pL进样量耐斯糖对照品ELSD检测色谱图 图210pL进样量巴戟天样品ELSD检测色谱图 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 5.330 耐斯糖 108939 12692 0.00 8998 总计 108939 12692 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 5.329 耐斯糖 198880 21754 0.00 7929 总计 198880 21754 3)重复性考察 精密吸取浓度为0.2mg/mL对照品溶液10pL，进液相色谱测定，重复进样5次，计算得保留时间RSDs0.5%，峰面积RSD≤3.0%，方法的定量重复性良好。 图3对照品进样分离重复性色谱图 背景介绍 瓜子金药材来源于远志科远志属植物瓜子金或卵叶远志的全草，又名瓜子草、来麻回，具有祛痰止咳、活血化瘀、解毒消肿等作用，用于治疗肺结核、食道癌等疾病也取得了良好的疗效。瓜子金中皂苷类成分为其有效药用活性成分，其中的瓜子金皂皂己是其含量较高的主要成分之一，且也是瓜子金中所特有的，因此选择瓜子金皂苷己作为中药材瓜子金的质量控制的指标性成分具有重要意义。本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了瓜子金中瓜子金皂含己含量的测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现瓜子金的质量监测。 测试条件 样品制备 仪器：EasySep-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器 对照品溶液制备：取瓜子金皂苷己对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。 色谱柱： Bischoff ProntoSIL KromaPlus C18，250mm×4.6 mm， 5 um 流速：1.0mL/min 柱温：30℃流动动：乙乙：水=28：72载气流速：2.5L/min 漂移管温度：75℃ 供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇10mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W， 频率25kHz)1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测试结果 1)对照品色谱图 2)样品色谱图 图110pL进样量瓜子金皂苷己对照品ELSD检测色谱图 图210pL进样量瓜子金样品ELSD检测色谱图 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 理论塔板数 1 6.362 瓜子金皂苷己 170623 13742 6127 总计 170623 13742 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 6.263 瓜子金皂皂己348305 26334 1.77 5231 2 6.914 317836 21985 0.00 5337 总计 666141 48319 3)重复性考察 ( 精密吸取浓度为0.2 mg/mL标准品溶液10pL，进液相色谱测定，重复进样5次，计算得保留时间RSD≤0.5%，峰面积RSD≤3.0%，方法的定量重复性良好。 ) 图3瓜子金皂苷己对照品10 pL进样分离重复性色谱图 地肤子中地肤子皂苷Ic含量检测 背景介绍 地肤子为藜科植物地肤的干燥成熟果实，具有清热利湿、祛风止痒等功效，其中的地肤子皂苷Ic为其抗瘙痒、抗炎和抗过敏作用的主要有效成分。地肤子皂苷Ic为三萜皂苷类成分，仅在200nm左右有末端吸收，应用UV检测器进行测定的操作条件严格，基线噪音大，灵敏度也较低，而采用ELSD检测则可有效避免上述问题。本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了地肤子中地肤子皂苷Ic含量的测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现地肤子中药的质量监测。 测试条件 样品制备 仪器：EasySep-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器 对照品溶液制备：取地肤子皂苷Ic对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。 色谱柱： Bischoff ProntoSIL KromaPlus C18， 250mmx4.6 mm， 5 pm 流速：1.0 mL/min 柱温：30℃ 流动相：甲醇：水：冰醋酸=85：15：0.2 载气流速：2.5L/min 供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 漂移管温度：80℃ 测试结果 1)对照品色谱图 2)样品色谱图 图120uL进样量地肤子皂苷Ic对照品ELSD检测色谱图 图220uL进样量地肤子样品ELSD检测色谱图 序号保留时间名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 6.284 地肤子皂苷Ic2191287 1585622.06 4825 2 7.058 45098 3130 0.00 5599 总计 2236385 161692 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 2.257 31966932875462.36 962 2 3.047 30936 2208 5.44 1104 3 4.979 63216 4974 3.66 3581 4 6.303 地肤子皂苷Ic 793065 54668 0.00 4405 总计 4083910349396 3)重复性考察 ( 精密吸取浓度为0.5 mg/mL标准品溶液10pL，进液相色谱测定，重复进样5次，计算得保留时间RSD≤0.5%， 峰面积RSD≤3.0%，方法的定量重复性良好。 ) 图3地肤子皂苷Ic对照品10pL进样分离重复性色谱图 知母中知母皂苷BII含量检测 背景介绍 知母为百合科植物知母的干燥根茎，具有清热泻火、生津润燥的功效，主要用于外感热病、高热烦渴、肺热燥咳、骨蒸潮热、内热消渴、肠燥便秘。其药用活性成分主要为甾体皂苷类物质，如芒果苷、知母皂苷BII。其中知母皂苷BII的化学结构中没有共轭体系等能产生紫外吸收的官能团，仅有较弱的紫外末端吸收，用紫外检测器检测的干扰较严重，而采用通用型的质量型检测器ELSD则可有效避免上述问题。本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了知母中知母皂苷BII含量的检测方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现知母的质量监控。 测试条件 样 品 制 备 仪器：EasySep-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器 对照品溶液制备：取知母皂苷BII对照品适量，精密称定，加30%丙酮制成每1mL含0.50mg的溶液，即得。 色谱柱：C8，250mmx4.6mm， 5 um 流动相：乙乙：水=25：75 流速：1mL/min 载气流速：2.5L/min 漂移管温度：75℃ 供试品溶液的制备：取知母粉末(过三号筛)约0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%丙酮25mL， 称定重量超声处理(功率400W， 频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用30%丙酮补足减失的重量，摇匀。滤过，取续滤液，即得。 测试结果 1)对照品色普图 2)样品色谱图 图110uL进样量知母皂苷BII对照品ELSD检测色谱图 图2 10 pL进量量知母样品ELSD检测色谱图 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 理论塔板数 1 8.742 知母皂皂BII 2171529 166486 10481 总计 2171529 166486 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 理论塔板数 8.392 16251 2191 29871 2 8.678 知母皂苷BII 1191036 94295 11015 总计 1207287 96486 益母草中盐酸水苏碱含量检测 背景介绍 益母草中药材为唇形植物益母草的新鲜或干燥地上部分。具有活血调经、利尿消肿的功效，其中的主要有效成分为生物碱类物质盐酸水苏碱，盐酸水苏碱的化学结构中没有强的紫外吸收官能团，只在215nm处有较弱的紫外末端吸收，紫外检测器检测的基线波动大、基体干扰严重，难以实现其含量的有效测定，而采用ELSD检测器可有效避免上述问题。本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了益母草中盐酸水苏碱含量的测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现益母草的质量监量。 测试条件 样品制备 仪器：EasySep-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器 对照品溶液制备：取盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。 色谱柱：丙基酰胺洗合硅胶，250mmx4.6mm， 5 pm 流动相：乙乙：0.2%冰醋酸溶液=80：20 流速：1mL/min 供试品溶液制备：取益母草粉末(过三号筛)约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25mL， 称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 载气流速：2.5L/min 漂移管温度：75℃ 测试结果 1)对照品色谱图 2)样品色谱图 图1盐酸水苏碱对照品ELSD检测色谱图 图2益母草样品ELSD检测色谱图 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 理论塔板数 1 17.767 盐酸水苏碱 1291670 59039 15388 总计 1291670 59039 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 理论塔板数 1 17.700 盐酸水苏碱 697074 16510 3769 总计 697074 16510 背景介绍 浙贝母为百合科贝母属植物浙贝母的干燥鳞茎，具有清热散结，化痰止咳的作用。其中的生物碱类物质贝母素甲和贝母素乙为其主要药用活性成分，由于贝母生物碱为甾体生物碱，紫外吸收弱，采用紫外检测器检测时存在基线波动大、基体干扰严重等诸多问题，相比之下，采用通用型ELSD检测器则可有效避免上述问题。本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的含量测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现浙贝母的质量监控。 测试条件 仪器：EasySep-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器 色谱柱：C18，250mmx4.6mm， 5 um 流动相：乙乙：水：二乙胺=70：30：0.03 流速：1mL/min 载气流速：2.5L/min 漂移管温度：80℃ 测试结果 1)对照品色谱图 图1贝母素甲、贝母素乙对照品ELSD检测色谱图 序号保留时间名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 13.408 贝母甲 533171 35184 8.03 18269 2 16.886 贝母乙 311788 17917 0.00 21971 总计 844959 53101 2)样品色谱图 图2浙贝母样品ELSD检测色谱图 序号保留时间名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 13.503 贝母甲 807704 54231 8.26 19179 2 17.191 贝母乙 254657 13637 0.00 19775 总计 1062361 67868 背景介绍 通关藤又名乌骨藤，是萝蘼科牛奶菜属植物通关藤的干燥藤茎，具有清热解毒、止咳平喘之功效，民间被用于治疗多种癌症、肺炎、支气管炎、支气管哮喘、风湿、骨折等。市售通关藤的伪品较多，正品的品质变化也较为明显，所以对于其药用活性有效成分通关藤苷H的检测就尤为重要。本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了通关藤中通关藤苷H的含量测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现通关藤的质量监测。 测试条件 样品制备 仪器：EasySep@-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器 色谱柱： Bischoff ProntoSIL KromaPlus C18， 250mmx4.6 mm， 5 um 流速：1.0mL/min 柱温：30℃流动相：乙腈：水=50：50载气流速：2.5 L/min 漂移管温度：75℃ 测试结果 1)通关藤苷H对照品色谱图 图120pL进样量通关藤苷H对照品ELSD检测色谱图 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 14.393 通关藤苷H 454960 21430 0.00 10724 总计 454960 21430 3)重复性考察 图3对照品进样分离重复性色谱图 对照品溶液制备：取通关藤苷H对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.3mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取通关藤粉末(过三号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL， 称定重量，超声处理(功率240W，频率40 kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mL，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2) 通关藤样品色谱图 图220uL进样量通关藤样品ELSD检测色谱图 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 14.316 通关藤苷H 1755567 73232 0.00 8321 总计 1755567 73232 精密吸取浓度为0.3mg/mL标准品溶液10pL，进液相色谱测定，重复进样5次，计算得保留时间RSD≤0.5%， 峰面积RSD≤3.0%，方法的定量重复性良好。 背景介绍 黄芪中药材为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，具有益气养血的功效，其中的黄芪甲苷为主要的药用活性成分。黄芪甲苷化学结构中没有强的紫外吸收基团，仅在201nm左右有较弱的紫外末端吸收，采用紫外检测器检测的基线噪音大、分离度重现性差。而采用通用的质量型检测器ELSD则可有效避免紫外检测的缺陷。本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了黄芪中黄芪甲苷含量检测方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现黄芪中黄芪甲苷的质量监控。 对照品溶液制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取黄芪粉约4g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40mL，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 mL， 合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40mL， 弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5 cm， 柱高为12cm)，以水50mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30mL洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 2)样品色谱图 图2黄芪样品ELSD检测色普图 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 10.108 黄芪甲苷 2326343 1133522.11 5660 2 11.319 200143 8844 0.00 5838 总计 2526486 122196 银杏根提取物中萜类内酯含量检测 背景介绍 银杏内酯是银杏根提取物中的有效药用活性成分，银杏内酯是强血小板活化因子拮抗剂，对免疫系统、中枢神经系统、缺血损伤有保护作用，并有抗休克、抗过敏及抗炎作用。由于银杏内酯紫外吸收弱，同时存在黄酮类物质有较强的干扰，所以不便使用紫外检测器。蒸发光散射检测器作为一种通用的质量型检测器，样品无需具有光学吸收特性，并且灵敏度和选择性都较好，因此常作为银杏内酯类成分分定的首选。中国药典中采用HPLC-ELSD法对银杏叶提取物中内酯类成分进行质量控制。本实验借鉴《中国药典》2015版中关于银杏叶提取物中内酯类成分检测的方法，对银杏根提取物中萜类内酯含量进行了分析，取得了较好的分析结果。 测试条件 样品制备 仪器：EasySep@-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5800蒸发光散射检测器 色谱柱： Bischoff ProntoSIL KromaPlus C18，250mmx4.6 mm，5 pm 对照品溶液制备：分别取白果内酯对照品、银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品和银杏内酯C对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含2 mg、1mg、1mg、1mg的混合溶液，作为对照品溶液。 供试品溶液：(参考《中国药典》2015版)。 流速：1.0 mL/min 柱温：35℃ 流动相：正丙醇：四氢呋喃：水=1：15：84 载气流速：2.5L/min 漂移管温度：90℃ 测试结果 有术技1)对照品色谱图 斤 2)样品色谱图 图1对照品ELSD检测色谱图 图2银杏根提取物样品ELSD检测色谱图 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 17.977 银杏内酯C 114136 4683 7.79 12695 2 23.581 白果内酯 394895 13290 3.74 14696 26.675 银杏内酯A 307514 9485 13.06 15796 4 40.286 银杏内酯B 92353 2011 0.00 17957 总计 908898 29469 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 17.451 银杏内酯C 78157 3021 10.96 10617 2 25.894 银杏内酯A 826575 25768 12.52 15205 3 38.927 银杏内酯B 114544 2479 0.00 16562 总计 101927631268 商陆中商陆皂苷甲含量检测 背景介绍 商陆药材来源于商陆科植物商陆或垂序商陆的干燥根，其主要有效部位商陆皂苷具有显著的抗炎、诱生y-干扰素、增强白血球的吞噬功能、促进DNA转化、抗生育和杀钉螺等作用。商陆的主要药用活性成分为商陆皂苷甲，具有显著的抗炎、免疫机制、提高DNA的合成率等与商陆皂苷活性相似的作用。因商陆皂苷甲的化学结构中无共轭体系等能产生紫外吸收的官能团，紫外吸收较弱仅有末端吸收，难以用紫外检测器检测，而采用ELSD检测器则可有效避免上述问题。本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了商陆中商陆皂苷甲含量的测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现商陆的质量监测。 测试条件 样品制备 对照品溶液制备：取商陆皂苷甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约1g，精密密定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25mL，称定重量，超声处理(功率500W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 漂移管温度：80℃ 测试结果 1)对照品色谱图 2)样品色谱图 图1 20uL进样量商陆皂苷甲对照品ELSD检测色谱图 图220 pL进样量商陆样品ELSD检测色谱图 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 理论塔板数 1 4.742 商陆皂苷甲 840852 57123 2422 总计 840852 57123 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 理论塔板数 1 4.780 商陆皂苷甲 539936 46804 4006 总计 539936 46804 3)重复性考察 精密吸取浓度为0.5 mg/mL标准品溶液20pL， 进液相色谱测定，重复进样5次，计算得保留时间RSD≤0.5%， 峰面积RSD≤3.0%，方法的定量重复性良好。 图3商陆皂苷甲对照品20pL进样分离重复性色谱图 背景介绍 路路通为金缕梅科植物枫香树的干燥成熟果序，具有祛风活络，利水通经的功效，常用于关节痹通。麻木拘挛，水肿胀满，乳少经闭等症。路路通的药用活性有效成分为路路通酸，路路通中路路通酸的检测对于控制中药材质量具有重要意义。本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了路路通中路路通酸含量的测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现路路通的质量监测。 测试条件 样品制备 仪器：EasySep@-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器 色谱柱： Bischoff ProntoSIL KromaPlus C18，250mmx4.6 mm， 5 pm 流速：1.0 mL/min 柱温：30℃ 流动相：甲醇：水：冰醋酸=87：13：0.1 载气流速：2.5L/min 漂移管温度：80℃ 测试结果 1)对照品色谱图 图15uL进样路路通酸对照品ELSD检测色谱图 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 15.906 路路通酸 124426 5395 0.00 11099 总计 124426 5395 3)重复性考察 图3路路通5uL进样分离重复性色谱图 背景介绍 酸枣仁为鼠李科植物酸枣的干燥成熟种子，具有养心安神的功效，是较为常用的镇静催眠中药。酸枣仁皂苷A为其镇静催眠的有效成分之一。酸枣仁皂苷A的含量测定可以有效监测酸枣仁质量。酸枣仁皂苷A为三萜皂苷类成分，紫外吸收弱，不宜采用UV检测，而采用质量型通用型检测器ELSD则可有效避免上述问题，实现酸枣仁中酸枣仁皂苷A的含量测定。因此，本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了酸枣仁皂苷A含量的测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现酸枣仁的质量控制。 测试条件 样品制备 仪器： EasySep-1020液谱色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器 色谱柱：C18，250mmx4.6mm， 5 um 流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B；梯度洗脱流速：1mL/min 载气流速：2.5 L/min 漂移管温度：75℃ 梯度洗脱程序： 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~15 20→40 80→60 15~28 40 60 28~30 40→70 60→30 30~32 70-100 30→0 测试结果 1)对照品色谱图 图1酸枣仁皂苷A对照品ELSD检测色谱图 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 19.327 酸枣仁皂苷A 2150835221098 0.00 92102 总计 2150835 221098 对照品溶液制备：取酸枣仁皂苷A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60~90℃)适量，加热回流4小时，弃去石油醚液，药渣挥去溶剂，转专至锥形瓶中，加入70%乙醇20mL，加热回流2小时，滤过，滤渣用70%乙醇5mL洗涤，合并洗液与滤液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2)样品色谱图 图2酸枣仁样品ELSD检测色谱图 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 2.546 23967360 10470082.98 289 2 3.721 1041210 15432311.87 7097 3 6.658 17056 1438 2.36 7353 4 7.355 295307 28501 3.80 11758 5 8.698 29405 1816 1.27 6734 6 9.325 26182 1246 2.15 4595 7 10.363 146666 9619 2.97 10780 8 11.807 11716 550 1.54 7170 9 12.699 35000 1569 1.84 7562 10 13.904 63937 2366 1.41 6178 11 14.841 88898 3892 10.28 9851 12 19.365 酸枣仁皂苷A： 208039 20263 9.41 83014 13 22.264 167406 12968 0.00 69409 总计 26098182 1285559 薏苡仁中甘油三油酸酯含量检测 背景介绍 薏苡仁，别名米仁、六谷、川谷、菩提子，为禾本科植物薏苡的种仁。薏苡仁具有健脾渗湿，除痹止泻，清热排脓之功效。薏苡仁中的薏苡仁油具有抗肿瘤的作用，其抗肿瘤的活性成分为甘油三脂类组分，《中国药典》2015版中规定通过检测其中甘油三油酸酯的含量来进行薏苡仁的质量控制。甘油三油酸酯极性小，分子量大，紫外吸收只有较弱的末端吸收(203nm、响应小、噪音大)，采用通用型的ELSD检测器可有效避免上述问题。本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了薏苡仁中甘油三油酸酯含量的测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现薏苡仁的质量监测。 柱温：30℃ 供试品溶液：取取苡仁粉末(过三号筛)约0.6g，精密密定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相50mL， 称定重量，浸泡2小时，超声处理(功率300W，频率50 kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 流动相：乙腈：二氯甲烷=65：35 载气流速：2.5L/min 漂移管温度：70℃ 测试结果 1)样品色谱图 2)样品色谱图 图1甘油三油酸酯对照品ELSD检测色谱图 图2薏苡仁样品ELSD检测色谱图 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 理论塔板数 1 13.782 甘油三油酸脂 116731 6649 14379 总计 116731 6649 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 理论塔板数 1 7.280 18256 1506 8415 2 8.879 172266 14229 12551 3 9.342 24716 2224 16490 4 10.896 180350 12244 12768 5 11.528 89306 5718 12713 6 13.627 甘油三油酸脂 156077 7880 11045 7 14.528 62687 3080 11889 总计 703658 46881 背景介绍 牛黄蛇胆川贝液是由人工牛黄、川贝母、蛇胆汁、薄荷脑等药物组成，具有清热、化痰、止咳的作用，用于热痰、燥痰咳嗽、症见咳嗽、痰黄或干咳、咯痰不爽等的治疗。2015版《中国药典》中以蛇胆汁中的胆酸的含量作为牛黄蛇胆川贝液含量测定的成分。但胆酸的紫外吸收较弱，低波长测定时，噪音大，采用ELSD可有效避免上述问题，因此，本实验按照《中国药典》2015年版的要求，采用HPLC-ELSD建立了牛黄蛇胆川贝液中胆酸含量的测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现牛黄蛇胆川贝液的质量控制。 测试条件 样品制备 仪器：EasySep-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器 对照品溶液制备：取胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含80pg的溶液，即得。 色谱柱： Bischoff ProntoSIL KromaPlus C18， 250 mm x4.6 mm， 5 um 流速：1.0 mL/min 柱温：30℃ 流动相：甲醇：0.2%醋酸溶液=75：25 载气流速：2.5L/min 供试品溶液的制备：精密量取牛黄蛇胆川贝液10mL， 加稀盐酸1mL，用三氯甲烷振摇提取5次， 每次15mL， 合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 漂移管温度：80℃ 测试结果 1)对照品色谱图 2)样品色谱图 图120uL进样量胆酸对照品ELSD检测色谱图 图210uL进样量牛黄蛇胆川贝液样品ELSD检测色谱图 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 理论塔板数 1 10.881 胆酸 79529 3697 5970 总计 79529 3697 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 理论塔板数 1 10.869 胆酸 29601 1519 7259 总计 29601 1519 3)重复性考察 图3胆酸对照品20pL进样分离重复性色谱图 精密吸取对照品溶液20pL， 进液相色谱测定，重复进样5次，计算得保留时间RSDs0.5%，峰面积RSD≤3.0%，方法的定量重复性良好。 背景介绍 西黄丸又名犀黄丸，由牛黄、麝香、醋乳香、醋没药四味中药组成，具有消坚化结、解毒散痈、消肿止痛的功效，多用于乳腺癌、肝癌、白血病等恶性肿瘤的治疗。猪去氧胆酸的含量检测对于西黄丸药品的质量控制具有重要意义，但鉴于猪去氧胆酸的紫外吸收较弱，为末端吸收(205nm)，同时2015版中国药典中规定采用HPLC-ELSD检测西黄丸中的猪去氧胆酸，因此本实验采用HPLC-ELSD进行了猪去氧胆酸的检测。 本实验采用市售猪去氧胆酸标准品，样品制备及处理方法如下： 贮备液：取猪去氧胆酸样品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成浓度2.0mg/mL的猪去氧胆酸贮备液，备用。工作溶液：分别量取适量的猪去氧胆酸贮备液，用甲醇稀释，制备成5个浓度点的标准系列，猪去氧胆酸的质量浓度分别为0.05 mg/mL、0.1mg/mL、0.2 mg/mL、1mg/mL、2mg/mL，当进样量为10pL时，所对应的进样质量为500 ng， 1000 ng ， 2000 ng，10000ng，20000 ng. 2)线性关系考察 图2猪去氧胆酸标准曲线 在0.05 mg/mL~2mg/mL浓度范围内，以进样质量的常用对数为横坐标，以峰面积的常用对数为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程：y=1.5796x-0.3875，R=0.9998，线性关系良好。 ( 精密吸取浓度为0.2 mg/mL标准品溶液10pL，进HPLC-ELSD测定，重复进样6次，计算得峰面积RSD=0.1%，方法的定量重复性良好。 ) 背景介绍 清开灵注射液由胆酸、猪去氧胆酸、水牛角(粉)、黄芩苷、珍珠母(粉)、栀子、板蓝根、金银花8味药材或其提取物配置而成的纯中药注射剂，具有清热解毒、化痰通络、醒神开窍的功效。有效成分为胆酸类、氨基酸类、黄芩苷、栀子苷等。其中胆酸和猪去氧胆酸是胆酸类中发挥药效最重要的有效成分，其含量检测对于清开灵注射液药品的质量控制具有重要意义，但鉴于胆酸和猪去氧胆酸的紫外吸收较弱，均为末端吸收，难以采用UV检测，采用通用型的质量型检测器ELSD则可有效避免UV检测的缺陷，因此，本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了清开灵注射液中胆酸、猪去氧胆酸含量的测定方法，方法准确、灵敏，可有效实现清开灵注射液的质量控制。 测试条件 样品制备 仪器：EasySep-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器 色谱谙： GlobalChromatography GS-120-5-C18-AP，250mmx4.6 mm，5 pm 流速：1.0ml/min 柱温：35℃ 流动相：甲醇：乙腈：0.1%甲酸溶液=68：17：15 载气流速：2.5L/min 漂移管温度：100℃ 测试结果 1)对照品色谱图 图15pL进样量对照品ELSD检测色谱图 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 6.402 猪去氧胆酸 29538 3761 2.53 15504 2 7.003 胆酸 106749 10639 0.00 11368 总计 136287 14400 3)样品色谱图 图3 10pL进样量清开灵注射液样品ELSD检测色谱图 对照品溶液制备：取胆酸对照品、猪去氧胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.2 mg胆酸和猪去氧去酸0.1 mg的混合溶液，即得。 供试品溶液的制备：精密量取清开灵注射液样品1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2)对照品色谱图 时间(min) 图215uL进样量对照品ELSD检测色谱图 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 6.367 猪去氧胆酸 118392 12130 2.30 9932 2 6.969 胆酸 493778 49729 0.00 11495 总计 612170 61859 序号保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度 理论塔板数 1 6.396 猪去氧胆酸 214443 24777 2.38 12743 2 6.983 胆酸 322650 32588 0.00 11609 总计 537093 57365 硫酸庆大霉素中庆大霉素C组分含量检测 背景介绍 硫酸庆大霉素对各种革兰阴性、革兰阳性细菌及各种肠杆菌如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属鸡铜绿假单胞菌等均具有良好的抗菌作用。硫酸庆大霉素属于氨基糖苷类抗生素，由多组分组成，不同组分的含量及相对比例直接影响药品的质量。 《中国药典》中规定采用庆大霉素C组分含量测定来监测硫酸庆大霉素的质量。由于氨基糖苷类物质化学结构中缺少强的紫外特征吸收基团，只有弱的末端吸收，所以难以用紫外检测器检测。采用通用型的质量型检测器ELSD不需物质具有光学吸收特性，可以很好的实实庆大霉素C组分的检测。因此本实验按照《中国药典》2015版的要求，采用HPLC-ELSD建立了硫酸庆大霉素中庆大霉素C组分含量的测定方法，方法准确、灵敏、简便快速，可有效实现硫酸庆大霉素的质量监控。 测试条件 样品制备 仪器：EasySep-1020液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱)UM5000蒸发光散射检测器色谱柱： Bischoff ProntoSIL KromaPlus C18，250mmx 4.6 mm， 5 um 对照品溶液制备：精密称取庆大霉素标准品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1mL中约含庆大霉素总C组分5.0mg的溶液。 供试品溶液的制备：精密称取庆大霉素样品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1mL中约含庆大霉素2.5mg的溶液。 流速：0.8 mL/min 柱温：35℃ 流动相：0.2mol/L三氟醋酸溶液：甲醇=96：4 载气流速：2.5L/min 漂移管温度：90℃ 测试结果 1)对照品色谱图 术技 2)样品色谱图 图1庆大霉素对照品ELSD检测色谱图 图2庆大霉素样品ELSD检测色谱图 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度理论塔板数 1 8.867 C1a 2016310 85355 5.70 3287 2 13.772 C2 2310395 56271 4.04 2625 3 18.446 C2a 1019197 22206 4.40 3769 4 25.294 C1 1689386 23716 0.00 2942 总计 7035288 187548 序号 保留时间 名称 峰面积 峰高 峰分离度理论塔板数 1 8.879 C1a 493613 26248 7.33 5202 2 13.727 C2 737581 23865 5.00 4603 3 18.220 C2a 303460 8260 5.32 5739 4 24.992 C1 658992 11188 0.00 4201 总计 2193646 69561 乐尔康糖浆 黄芪甲苷 -部P800 西黄丸 猪去氧胆酸 -部P831 当归补血口服液 黄芪甲苷 -部P841 血府逐瘀口服液 桃仁(苦杏仁苷) -部P849 安神补脑液 维生素B1 -部P884 芪冬颐心口服液 -部P920 黄芪甲苷 芪冬颐心颗粒 一-部P921 芪苈强心胶囊 黄芪甲苷 -部P922 三七、黄芪(三七皂苷、 芪参胶囊 -部P923 黄芪甲苷) 芪蛭降糖胶囊 黄芪甲苷 -部P925 补中益气丸 —-部P993 黄芪甲苷 补中益气丸(水丸) -部P994 补中益气合剂 -部P994 黄芪甲苷 补中益气颗粒 -部P995 补肺活血胶囊 黄芪甲苷 部P1000 阿胶三宝膏 黄芪甲苷 —部P1010 阿胶补血口服液 黄芪(黄芪甲苷) 部P1011 阿胶补血膏 黄芪(黄芪甲苷) 部P1012 驴胶补血颗粒 黄芪(黄芪甲苷) 部P1022 肾康宁片 黄芪甲苷 部P1053 肾康宁胶囊 黄芪(黄芪甲苷) 部P1054 成方制剂 肾康宁颗粒 黄芪(黄芪甲苷) 部P1055 单味制剂 金贝痰咳清颗粒 贝母素甲 部P1071 降糖甲片 黄芪甲苷 部P1124 参芪口服液 黄芪甲苷 部P1129 参松养心胶囊 人参(人参皂皂Re) 部P1134 胃乃安胶囊 黄芪甲苷 部P1168 复方石韦片 黄芪(黄芪甲苷) 部P1220 复方血栓通胶囊 黄芪(黄芪甲苷) 部P1223 复方哈青片 黄芪甲苷 部P1245 复芪止汗颗粒 黄芪甲苷 部P1249 复脉定胶囊 黄芪甲苷 部P1250 养心氏片 黄芪甲苷 -部P1275 养正消积胶囊 齐敦果酸 部P1277 养阴生血合剂 黄芪甲苷 -部P1282 前列通片 黄芪甲苷 部P1287 桔梗冬花片 桔梗(桔梗皂苷D) 部P1337 益肺清化膏 黄芪甲苷 部P1408 消栓口服液 部P1420 黄芪甲苷 消栓颗粒 部P1423 消渴平片 黄芪(黄芪甲苷) 部P1431 通窍鼻炎胶囊 部P1458 黄芪(黄芪甲苷) 通窍鼻炎颗粒 部P1459 黄氏响声丸 贝母素甲 部P1469 公司简介 上海通微分析技术有限公司创立于2002年，是一家集色谱仪器研发、制造和销售为一体的高新技术企业，主要经营加压毛细管电电谱系统、高效液相色谱仪、制备色谱仪及相关色谱配件耗材。公司产品种类齐全，具有国际领先的技术水平，自主开发的加压毛细管电电谱系统荣获国际Pittcon荣誉提名奖，两次获得BCEIA金奖，并被认定为上海市科学进步奖一等奖；十五国家科技攻关计划重大项目研发成果--国内首台蒸发光散射检测器，荣获BCEIA金奖，填补了该仪器的国产化空白。 公司拥有国内分析仪器行业唯一一家博士后工作站，凭借美国通微技术股份有限公司雄厚的技术实力，秉承创新优质、顾客至上和回馈社会的宗旨，力求为色谱分离分析工作者提供各类全新、优质的分析设备和技术服务。 上海通微分析技术有限公司Unimicro (Shanghai) Technologies Co.， Ltd. 上海通微分析技术有限公司(中国总部) 地址：上海市张江高科技园区松涛路489号C01座邮编：201203电话：021-38953588、38953390、38953570 传真：021-38953636 E-Mail ：info@unimicrotech.com E-Mail：info@unimicrotech.com.cn 广州办事处 地址：广州白云区石井金碧新城39栋1303电话：15011756765 北京办事处南京办事处地址：北京市海淀区上地十街地址：南京经济技术开发区兴科路12号辉煌国际5号楼804科创基地221室电话：010-82176650电话：025-85533522苏州办事处西安办事处地址：江苏省苏州科技城锦峰路8号地址：陕西省西安市南稍门十字大话15号楼401室南门3-13-A4电话：0512-68054587电话：029-85373011