谷物中磺噻隆检测方案(液相色谱柱)

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·356·中华预防医学杂志2008年5月第42卷第5 期CChin J Prev Med，May 2008， Vol.42， No. 5检验技术· 液相色谱-质谱联用测定谷物中80种多农药残留量 复杂食品基质中农药多残留的分析近年来是个热点，实现高通量分析、高灵敏度检测和高效分离是亟待解决的重要课题。笔者建立了谷物中80种农药残留的快速高分离度液相色谱 (rapid resolutionliquid chromatography， RRLC)与三重串联四级杆质谱(QQQ)联用的检测方法。 一、材料与方法 1.仪器与主要试剂：(1)仪器：快速高分离度液相色谱仪(1200 RRLC，美国安捷伦科技有限公司)；三重串联四极杆质谱仪(6410 QQQ，美国安捷伦科技有限公司)；振荡仪(ZDY-2型，上海洪纪仪器设备有限公司)；旋转蒸发仪(RV 06-ml 1-B型，德国IKA公司)；氮气吹干仪(BF2000 型，上海率纳科贸有限公司)。(2)试剂：所有试剂均为色谱纯，购自美国 Sigma 公司；Cig固相萃取(SPE)柱；0.45 u.m微孔滤膜过滤；所有农药标准品购自美国 Sigma 公司。 2.标准溶液的制备：标准储备溶液：分别称取80种农药标准物质5.0mg，分别选甲醇、乙腈等溶剂溶解，所有被分析物的线性浓度范围0.5~500 ng/ml。混合标准溶液避光4℃保存。 3.样品的提取与净化：称取10g谷物样品至300 ml三角瓶中，加入100 ml乙并振摇 30 min，过滤乙腈提取液至100 ml梨形瓶中，于40℃水浴浓缩至5 ml 左右。100 ml 4% 氯化钠水溶液分3次溶解浓缩液，并将其全部转移至分液漏斗中，加入50ml二氯甲烷振荡提取 10 min(重复2次)。、下层有机相过装有无水硫酸钠的漏斗于100 ml梨形瓶中，40℃水浴旋转浓缩蒸干干用5 ml甲醇溶解，上Cg SPE 柱(SPE 柱预先用5ml甲醇洗脱，然后用5 ml洗脱进行预处理)，用5ml甲醇洗脱，全部甲醇洗脱液在氮气下吹干，残留物用甲醇：水(15：85)定容至1 ml，0. 45 pm微孔滤膜过滤后供 LC-QQQ分析。 4.色谱条件：(1)谱柱： Agilent SB-C8，2.1× ( 作者单位：200131上海，安捷伦科技(上海)有限公司应用支持部 ) 100 mm， 1.8 pm；(2)柱温：50℃；(3)进样量：20 pl；(4)流动相及流速：见表1；(5)后运行时间：8 min。 表1 流动相及流速选择 步骤 总时间 流动相(%) A：水(含0.1% 流速/ 甲酸+10mmol/L B：乙 (ml/min) 乙酸铵) (min) 1 0 99 1 0.3 2 4 50 50 0.3 3 15 40 60 0.3 4 20 20 80 0.3 5 25 1 99 0.3 6 30 1 99 0.3 7 30.1 99 1 0.3 5.质谱条件：(1)电离源模式：电喷雾离子化；(2)电离源极性：正模式；(3)雾化气：氮气；(4)雾化气压力：40 psi；(5)离子喷雾电压：4000V；(6)干燥气温度：350℃；(7)干燥气流率：10 L/min；(8)分辨率：Q1(0.70m/z)，Q3(0.70 m/z)。 6.样品分析：(1)定性测定：在相同实验条件下进行样品测定时，如果样品中检出色谱峰的保留时间与基质标准中某种农药及相关化学品色谱峰的保留时间一致，并且在扣除背景后所选择的二对离子及丰度比也一致，则可判定为样品中存在这种农药残留。(2)定量测定：本方法中LC-QQQ采用外标校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，定量用标准溶液采用基质混合标准工作溶液绘制，并且所测样品中农药残留的响应值均在线性范围内。平行试验：按以上步骤对同一试样进行平行试验。(3)空白试验：除不称取试样外，均按上述步骤进行。(4)结果计算：LC-QQQ测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果由 MassHunter 定量软件计算生成。 二、结果 80种农药的线性浓度范围0.5~500 ng/ml，线性关系良好，R值均大于0.99(表2)。 三、讨论 本研究所建立的方法具有较好的检测灵敏度、 表2 液相色谱-质谱联用测定谷物中80种农药结果 序号 中文名称 英文名称 保留时间 (min) 定量离子 定性离子 源内碎裂 电压(V) 碰撞气 能量(V) 相对标准 偏差(%) 检出限 (jug/kg) 1 烯啶虫胺 nitenpyram 5.99 271/237 271/237；271/224 100 15；15 2.29 0.07 2 丁酮威亚砜 butocarboxim sulfoxide 5.34 207/75 207/75；207/132 80 5；10 1.47 0.03 3 砜吸磷 Demeton-S-methl sulfoxide 5.87 247/169 247/169；247109 100 10；30 1.20 0.03 4 久效磷 monocrotophos 5.97 224/127 224/127；224/193 100 205 2.76 0.03 5 磺吸磷 Demeton-S-methyl sulfone 6.20 263/169 263/169；263/125 80 15；20 4.08 0.04 ethiofencarb 6 乙硫苯威亚砜 6.35 242/107 242/107；242/185 80 15；5 2.11 0.07 7 抗蚜威 sulfoxide，pirimicarb 7.96 239/72 239/72；239/182 120 20；15 1.51 0.07 8 速灭磷 mevinphos 6.69 225/193 225/193；225/127 80 1；15 1.96 0.08 9 磺噻隆 ethidimuron 6.63 265/208 265/208；265/162 80 10；25 2.97 0.08 10 吡虫啉 imidacloprid 6.73 256/209 256/209；256/175 80 10；10 3.21 0.13 11 密草通 secbumeton 8.34 226/170 226/170；226/142 120 20；25 1.27 0.03 12 西草净 simetryn 8.20 214/124 214/124；214/96 120 20；25 1.22 0.03 13 噻虫啉 thiacloprid 7.35 253/126 253/126；253/186 120 20；10 1.67 0.08 14 盖草津 methoprotryne 9.07 272/170 272/170；272/198 140 30；25 1.52 0.02 15 对氧磷 paraoxon methyl 7.67 248/202 248/202；248/90 120 20；30 1.83 0.12 16 螺环菌胺 spiroxamine 10.89 298/100 298/100；298/144 120 35；20 1.98 0.12 17 氰草津 cyanazine 7.80 241/214 241/214；241/174 120 15；15 2.66 0.06 18 甲基硫菌灵 thiophanate methyl 7.87 343/151 343/151；343/311 120 20；10 2.83 0.15 19 马拉氧磷 malaoxon 8.10 315/99 315/99；315/127 80 20；10 1.26 0.04 20 倍硫磷亚砜 fenthion sulfoxide 8.21 295/280 295/280；295/109 140 20；35 1.16 0.03 21 环莠隆 cycluron 8.68 199.4/72 199.4/72；199.4/89 120 25；15 1.17 0.09 22 扑草净 prometryne 10.60 242/158 242/158；242/200 120 20；20 1.41 0.03 23 甲基毒死蜱 chlorpyrifos methyl 15.75 322/125 322/125；322/290 80 15；15 一 一 24 吡咪唑 rabenzazole 8.64 213/172 213/172；213/118 120 25；25 续表2 液相色谱-质谱联用测定谷物中80种多农药结果 序号 中文名称 英文名称 保留时间 (min ) 定量离子 定性离子 源内碎裂电压(V) 碰撞气 能量(V) 相对标准 偏差(%) 检出限 jig/kg) 53 敌瘟磷 edifenphos 13.03 311/109 311/109；331/283 100 35；10 3.12 0.03 丁嗪草酮 isomethiozin 13.20 269/200 269/200；269/172 120 15；25 4. 28 0.17 55 溴苯烯磷 bromfenvinfos 13.66 403/170 403/170：403/127 100 35：20 4.37 0.06 苯霜灵 benalaxyl 13.70 326/148 326/148；326/294 120 10；5 5.06 0.03 苯氟磺胺 dichofluanid 13.41 333/123 333/123：333/224 80 20：10 1.70 58 杀铃脲 triflumuron 13.77 359/139 359/139：359/156 120 30；15 3.14 0.13 吡草醚 pyraflufen ethyl 14.57 413/339 413/339：413/289 120 20；30 1.73 0.04 炔草酸 clodinafop propargyl 14.58 350/266 350/266：350/238 120 15；20 4.16 0.06 61 二嗪磷 diazinon 15.02 305/169 305/169：305/153 160 20；20 1.76 0.11 62 吡菌磷 pyrazophos 14.93 374/222 374/222；374/194 120 20：30 0.86 0.02 63 特草灵 terbucarb 16.04 278/166 278/166：278/222 100 10；1 3.15 0.17 64 甲基泣枯磷 tolclofos methyl 15.67 301/125 301/125；301/269 120 20；15 4.00 1.00 65 氟吡甲禾灵 haloxyfop methyl 16.76 376/316 376/316；376/288 15；20 1.60 0.02 66 丙草胺 pretilachlor 16.85 312/252 312/252；312/176 15；30 0.88 0.15 67 吡氟酰草胺 diflufenican 16.79 395/266 395/266；395/246 25：30 2.00 0.05 茚虫威 indoxacarb 17.69 528/150 528/150；528/218 20；20 3.37 0.10 解草酯 cloquintocet mexyl 18.21 336/238 336/238；336/192 15；20 1.73 0.04 氯亚胺硫磷 dialifos 17.12 394/208 394/208；394/187 5；20 6.32 0.14 71 喹禾灵 7quizalofop ethyl 17.64 373/299 373/299；373/271 15；25 1.11 0.03 B 胺菊酯 tetramethir 19.25 332/135 332/135：332/164 100 15；15 4.93 0.08 吡氟禾草灵 fluazifop butyl 20.47 384/282 384/282：384/328 120 20：15 0.70 0.04 敌噁磷 dioxathion 21.04 479/97 479/97；479/125 100 15；10 8.16 3.00 烯丙菊酯 allethrin 19.77 303/135 303/135；303/123 10：20 5.30 0.13 氟虫脲 flufenoxuron 20.85 489/158 489/158；489/141 10；15 4.13 0.25 噻螨酮 hexythiazox 20.44 353/168 353/168：353/228 120 20：10 2.64 0.04 野麦畏 triallate 21.20 304/143 304/143：304/86 120 25：15 4.78 0.30 79 酞酸二环己基酯 ：Pphthalic acid. 17.65 良好的线性关系和重复性，非常适用于复杂食品基质中痕量农残的分离检测。在此工作的基础上，参照国家标准，笔者对407种常用农药在苹果、蜂蜜、谷物和肉类中的残留量检测进行了系统研究，取得了满意的结果。RRLC-QQQ 与常规 HPLC 相比，不仅显著改善了复杂样品的分离度，而且提高了检测灵敏度和分析通量，在复杂食品基质中痕量组分中有着广阔的应用前景。 ( 参 考 文 献 ) ( [1] P i c6 Y， Fo n t G， Rui z MJ，et al. Cont r ol of p e sticide res i dues byliquid chromatography-mass spectrometry to ensure food s a fety.Mass Spectrom Rev， 2006，25：917-960. ) ( (收稿日期：2008-01-18) ) ( (本文编辑：吕相征) ) 数据