催产素醋酸盐中氨基酸检测方案(氨基酸分析仪)

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Hitachi High-TechLC Application Sheet生物药品肽制剂催产素的氨基酸组成分析 催产素是由9种氨基酸组成的肽。评价肽制剂(如催产素)品质的一种测试方法是确认氨基基的组成。此实验使用日立LA8080氨基酸分析仪，依照日本药典的分析方法，测定了催产素的氨基酸组成。 使用催产素醋酸盐作为模拟测定样品。 【催产素的结构式】 ]标准样品测定例(系统适用性的确认) 【日立LA8080氨基酸分析仪】 【氨基酸标准溶液测定例(各10 nmol/20 pL)】 (色谱图中标记的Cys表示胱氨酸(半胱氨酸的二聚体)。) <标准分析法色谱条件> 分析柱 #2622 4.6 mm I.D. × 80mm 反应液 ： 茚三酮 除氨柱 ： #2650L 4.6mmI.D. × 60 mm 反应液流速 ： 0.3 mL/min流动相 ： MCl缓冲溶液L-8500 PH-Kit(*) 反应温度 ： 130℃ 流速 ： 0.26 mL/min 检测波长 ： VIS 440nm、570nm 柱温 57℃ 进样量 ： 20 pL (注)根据药典对流动相进行了微调 系统适用性项目 规定值 测定结果 系统性能 氨基酸洗脱顺序 依序为天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸 如左侧所示 分离度(苏氨酸-丝氨酸) 1.5以上 2.93 分离度(甘氨酸-丙氨酸) 1.4以上 2.93 分离度(异亮氨酸-亮氨酸) 1.2以上 1.79 系统的重现性 天冬氨酸、脯氨酸、缬氨酸、精氨酸的各峰面积的相对标准偏差(n=3) 分别为2.0%以下 0.07%、0.41%0.37%、0.09% 【系统适用性】 洗脱顺序、分离度、峰面积及相对标准偏差的结果均充分满足要求的规定值。 @Hitachi High-Technologies Corporation ■催产素测定例(组成氨基酸的分析) 【催产素的测定例】 (色谱图中标记的Cys表示胱氨酸(半胱氨酸的二聚体)。) <组成氨基酸的分析> 成分名称 规定值(相对于Leu的摩尔比) 测定结果 天冬氨酸 (Asp) 0.95~1.05 0.997 谷氨酸(Glu) 0.95~1.05 0.995 甘氨酸(Gly) 0.95~1.05 1.000 胱氨酸(Cys) 0.80~1.05 0.935 异亮氨酸(Ile) 0.80~1.10 0.963 亮氨酸(Leu) 定为1 定为1 酪氨酸(Tyr) 0.80~1.05 0.934 脯氨酸(Pro) 0.95~1.05 1.007 <样品的前处理方法>样品 1mg←6mol/L盐酸1mL脱气加热115℃、16 hr真空干燥使用2mL0.02 mol/L的盐酸溶解过滤 孔径 0.2 um测定样品(20 pL) 相对于理论值1(定义亮氨酸摩尔值为1)，其他氨基酸相对于亮氨酸(Leu)的摩尔比为0.93~1.01，表明得到了理想的结果。 Page. 注意：本资料所示数据仅为测定例用数据而非可保证仪器性能的数据。仪器只是研究用仪器，而不是诊断、治疗或预防人或动物疾病的医疗仪器。Page.@少Hitachi High-Technologies Corporation 催产素是由9种氨基酸组成的肽。评价肽制剂（如催产素）品质的一种测试方法是确认氨基酸的组成。此实验使用日立LA8080氨基酸分析仪，依照日本药典的分析方法，测定了催产素的氨基酸组成。使用催产素醋酸盐作为模拟测定样品。