新霉胺等杂质中核糖霉素的分离检测方案(液相色谱仪)

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应用简报 Agilent小分子药物、药物开发 Trusted Answers 使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120HILIC-Z 色谱柱与 ELSD 检测器分析氨基糖苷类抗生素杂质 Rongjie Fu 和 Adam Bivens 安捷伦科技公司 氨基糖苷类是一类作用强大且使用广泛的抗生素。氨基糖苷类及其杂质都具有强极性，因此很难使用反相色谱 (RPLC) 对其进行分析。亲水相互作用色谱 (HILIC) 是一种分离极性分子快速便捷的方法，与 RPLC 相比，仅需要对系统和溶剂进行极小的改动。 本应用简报展示了如何使用 AgilentInfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z， 2.7 um色谱柱将目标杂质新霉胺及其他杂质与常见的氨基糖苷类抗生素核糖霉素分离。 两种化合物的紫外信号均较弱，故使用 ELSD 检测。 图1.核糖霉素结构 图2.新霉胺结构 试剂与化学品 所有试剂均为 HPLC级或更高等级。HPLC 级乙腈购自 J.T. Baker (CenterValley， PA， U.S.A.)。水经由 EMD MilliporeMilli-Q Integral 系统 (Darmstadt，Germany) 纯化。乙酸铵、硫酸核糖霉素和新霉胺购自 Sigma-Aldrich (St. Louis，MO，USA)。 仪器和材料 仪器 ( Agilent InfinityLab 接头 ) ( 色谱柱进样口： Agil e nt InfinityLabQuick Connect 快速连接接 头 (部件 号5067-5965) ) ( 色谱柱出口： Agil e nt InfinityLab Quick Turn 接头(部件号5067-5966) ) ( Agilent Captiva 经济型过滤器，PTFE膜，直径13mm，孔径0.2 um (部 件号5190-5265) ) ( 安捷伦样品瓶，螺口，棕色，带书写 签，经认证，2mL，100/包(部件 号5182-0716) ) ( 安捷伦固定螺口盖，带 PTFE/红色硅胶隔垫(部件号5190-7024) ) ( Agilent InfinityLab溶剂瓶，棕色， 1000 mL(部件号9301-6526) ) ( Agilent InfinityLab Stay Safe 溶剂瓶安全盖， GL45，3 口 ，1个放空阀(部 件号5043-1219) ) Eppendorf 移液器和连续分液器 超声仪(VWR， Radnor， PA， USA) 涡旋器和多管涡旋器(VWR， Radnor，PA，USA) 仪器条件 HPLC 条件 色谱柱 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z，2.1×100mm(部件号685775-924) 流动相A 100mM乙酸铵 流动相B 乙腈 流速 0.40 mL/min 柱温 25°C 进样量 2pL 梯度 0-1 min 内B 为65% 1-5 min 内B由65%降至55%5-10min 内(停止)B为55% 10-13 min 内 (后运行) B为65% ELSD 条件 雾化器温度 40°℃ 蒸发器温度 40°C 气体流速 1.6 SLM 数据采集速率 40 Hz ( Agilent 1260 Infinity ll二元泵 (G71 12 B) ) ( Agilent 1260 Infinity ⅡI样品瓶进样器 (G7129C) ) ( Agilent 1260 Infinity ll 高容量柱温箱 (G7116A) ) ( Agilent 1290 I nfinity lI ELSD (G7102A) Agilent OpenLAB 软件 ) ( 样品前处理 ) ( 样品1：0.4 mg/mL 硫酸核糖霉素 和0.2 mg/mL 新霉胺的混合水溶 液，用乙腈(ACN) 稀释至50% ) ( 样品2：4mg/mL硫酸核糖霉素加标2%新霉胺 (0.08mg/mL) 的混合 水溶液 ) 流动相前处理 精确称取一定量的乙酸铵并用水稀释至浓度为100 mM。IO一次配置1L缓冲液，定期更换以防降解或微生物生长。 图 3.使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z液相色谱柱分离新霉胺与核糖霉素 结论 使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱成功实现了新霉胺等杂质与主要化合物核糖霉素的分离。两性离子HILIC-Z 键合相既能提供出色的分离度， 又能得到良好的峰形。 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线：800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 · Agilent安捷伦科技(中国)有限公司，，中国出版Trusted AnswersHCN 摘要氨基糖苷类是一类作用强大且使用广泛的抗生素。氨基糖苷类及其杂质都具有强极性，因此很难使用反相色谱 (RPLC) 对其进行分析。亲水相互作用色谱 (HILIC) 是一种分离极性分子快速便捷的方法，与 RPLC 相比，仅需要对系统和溶剂进行极小的改动。前言本应用简报展示了如何使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z, 2.7 μm 色谱柱将目标杂质新霉胺及其他杂质与常见的氨基糖苷类抗生素核糖霉素分离。两种化合物的紫外信号均较弱，故使用ELSD 检测。结论使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱成功实现了新霉胺等杂质与主要化合物核糖霉素的分离。两性离子 HILIC-Z 键合相既能提供出色的分离度，又能得到良好的峰形。