芝麻油中芝麻素和芝麻林素的含量检测方案(液相色谱仪)

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SSL-CA14-701Excellence in Science Excellence in ScienceLC-169 上海市徐汇区宜州路180号华鑫天地二期C801栋 咨询电话：021-34193996http：//www.shimadzu.com.cn 高效液相色谱法测定芝麻油中芝麻素和芝麻林素 LC-169 摘要：本实验使用岛津 Nexera XR 超快速液相色谱仪，参考国标《GB/T 31579-2015粮油检验芝麻油中芝麻素和芝麻林素的测定高效液相色谱法》建立测定芝麻油中芝麻素和芝麻林素的分析方法。该方法在线性范围为 0.2-500.0mg/L 内，芝麻素和芝麻林素的相关系数均为 0.9999，线性良好。仪器检测限和定量限范围分别为：芝麻素0.019mg/L 和 0.026 mg/L， 芝麻林素 0.066 mg/L 和 0.085 mg/L。精密度实验中，芝麻素和芝麻林素的保留时间相对标准偏差为 0.068-0.13%；峰面积的相对标准偏差分别为 0.10-2.4%和0.085-2.7%。芝麻素和芝麻林素加标回收率在80.1-93.3%之间。 关键词：芝麻油芝麻素芝麻林素高效液相色谱 芝麻油是从芝麻中提炼出来的，呈琥珀色，具有特殊香味。芝麻油作为食用油，可调制凉热菜肴，其含有的人体必需的不饱和脂肪酸和氨基酸，居各种植物油之首。芝麻油中含有特有的芝麻素和芝麻林素，对流感病毒、仙台病毒和结核杆菌有抑制作用，临床上可用于抗病毒、杀菌剂、抗氧化剂、杀虫增效剂和治疗气管炎，在农业上可用作除虫菊酯的增效剂。 过去测定芝麻油中芝麻素和芝麻林素所使用的分析 方法有：紫外光谱法、薄层色谱法、、气相色谱法等，而采用高效液相色谱法操作更为简便省时，结果准确度高。 本实验使用岛津 Nexera XR 超快速液相色谱仪，参考国标《GB/T 31579-2015 粮油检验芝麻油中芝麻素和芝麻林素的测定高效液相色谱法》建立测定芝麻油中芝麻素和芝麻林素的分析方法。岛津 Nexera XR 超快速液相色谱仪具有选择性高、分析速度快、重复性好等特点，适合用于粮油检验的检测分析。 1.1仪器 Nexera XR 超快速液相色谱仪 具体配置为： LC-20ADxx2(输液泵)， DGU-20A，(在线脱气机)， SIL-20ACxR(自动进样器)， CTO-20AC(柱温箱)，CBM-20A(系统控制器)， SPD-M20A( 二极管二列检测器)， LabSolutions Ver5.89( 色谱工作站)。 1.2分析条件 液相色谱条件 色谱柱： Shim-pack XR-ODS II(3.0 mmx100 mm，2.2 pm) 检测波长：287nm 柱温：40℃ 流动相：A：水B：甲醇 流速：0.9mL/min 洗脱方式：等度洗脱，A/B=25/75(v/v)。 进样量： 5uL 1.3标准溶液配制 分别取芝麻素和芝麻林素标准品适量，配制成浓度为0.2、0.4、2.0、4.0、20.0、40.0、100.0和500.0 mg/L的标准系列溶液，于4℃冰箱中避光存放。 1.4样品制备 参考国标《GB/T 31579-2015粮油检验芝麻油中芝麻素和芝麻林素的测定高效液相色谱法》88.1样品的提取、净化和富集进行。 称取 0.5g芝麻油样品，精确至1mg，用2mL SPE 上样液(正己烷/三氯甲烷= 70/30(v/v))充分溶解，以(1~2)滴/s的速度过串联双柱(氨基固相萃取柱串联硅胶固相萃取柱)，弃去流出液；吸取5 mL 的 SPE上样液，以2滴/s的速度洗涤双柱，弃去洗涤液；取下氨基固相萃取柱，吸取3mL 的 SPE 上样液，以(1~2)滴/s的速度单独洗涤硅胶固相萃取柱，弃去洗涤液；吸取2 mL 的 SPE 淋洗液(环己烷/丙酮=90/10(v/v))，以(1~2)滴/s的速度洗涤硅胶固相萃取柱，弃去洗涤液；最后吸取10 mL 的 SPE 洗脱液(环己烷/丙酮=80/20(v/v))，以(2~3)滴/s的速度洗脱硅胶固相萃取柱，收集全部洗脱液于25 mL 的棕色容量瓶中，并用异丙醇定容，作为样品提取液。样品提取液用过滤器过滤后进行液相色谱测定。 结果与讨论 2.1标准品的色谱图 图114.0 mg/L芝麻素和芝麻林素标准溶液色谱图 2.2标准曲线 按1.2中的分析条件进行测定，以浓度为横坐标，峰面积比为纵坐标，采用外标法建立标准曲线，结果如图2所示，芝麻素和芝麻林素在 0.2-500.0 mg/L线性浓度范围内，线性相关性良好，相关系数均为0.9999，具体结果见表1。 图2芝麻素和芝麻林素标准曲线 表11标准曲线参数 中文名称 英文名称 CAS No. 线性范围(mg/L) 线性方程 相关系数 准确度% 芝麻素 Sesamin 607-80-7 0.2-500.0 Y=(8382.63)X+(-193.627) 0.9999 94.1-105.7 芝麻林素 Sesamolin 526-07-8 Y=(8082.45)X+(9.74015) 0.9999 92.3-102.7 2.3精密度实验 按照1.2分析条件测定，选择浓度为0.2、4.0和40.0 mg/L 的芝麻素和芝麻林素混合标准溶液依次进样，连续进样测定6次。芝麻素和芝麻林素的保留时间相对标准偏差为 0.068-0.13%；峰面积的相对标准偏差分别为 0.10-2.4%和0.085-2.7%(具体结果见表2)。结果表明该仪器具有良好的精密度。 表2精密度的结果(n=6) 名称 RSD% (0.2mg/L) RSD% (4.0 mg/L) RSD%(40.0mg/L) 保留时间(min) 峰面积 保留时间(min) 峰面积 保留时间(min) 峰面积 芝麻素 0.10 2.4 0.087 0.19 0.068 0.10 芝麻林素 0.13 2.7 0.10 0.071 0.85 0.084 2.4灵敏度实验 按照1.2分析条件测定，标准曲线中最低点 0.2 mg/L 计算仪器灵敏度，通过 LabSolutions 软件计算仪器检测限及定量限。仪器检测限和定量限分别为：芝麻素0.019 mg/L 和 0.026 mg/L， 芝麻林素 0.066 mg/L 和 0.085 mg/L，结果见表3。 表3 芝麻素和芝麻林素灵敏度实验结果 名称 检测限 (mg/L) 定量限(mg/L) 芝麻素 0.019 0.066 芝麻林素 0.026 0.085 2.5加标回收率 取1.4制备得到的芝麻油提取溶液注入液相色谱仪，得到图3样品色谱图。国标 GB/T 31579-2015规定芝麻素方法检出限为 0.01 mg/g， 芝麻林素方法检出限为 0.02 mg/g，样品中检测到芝麻素含量为 5.2 mg/g， 芝麻林素含量为1.7mg/g。取芝麻油样品0.5 g， 加入芝麻素和芝麻林素混合标准溶液，按照1.4样品制备方法处理样品，最终定容体积为25 mL。使最终加标量为 6.0 mg/g 和16.0mg/g，样品加标色谱图见图4，加标回收率结果如表4所示。由表4可知，样品中芝麻素和芝麻林素回收率分别为80.1-93.3%和83.6-91.9%。加标样品在定量限以上有良好响应，能够满足样品定量分析要求。 图3支芝麻油提取液样品色谱图 图4样品加标(6mg/g)色谱图 表4加标回收率结果(n=3) 名称 检出浓度(mg/g) 加标测试结果(mg/g) 加标量(mg/g) 平均回收率% RSD% 芝麻素 5.2 10.0 6.0 80.1 2.3 18.6 16.0 83.6 1.5 芝麻林素 1.7 7.3 6.0 93.3 2.5 16.4 16.0 91.9 1.4 结论 本实验使用岛津 Nexera XR 超快速液相色谱仪，参考国标《GB/T31579-2015粮油检验芝麻油中芝麻素和芝麻林素的测定高效液相色谱法》建立测定芝麻油中芝麻素和芝麻林素的分析方法。该方法在线性范围为 0.2-500.0 mg/L内，芝麻素和芝麻林素的相关系数均为 0.9999，线性良好。仪器检测限和定量限范围分别为：芝麻素 0.019 mg/L 和 0.026mg/L， 芝麻林素 0.066 mg/L 和 0.085 mg/L。芝麻素和芝麻林素的保留时间相对标准偏差为 0.068-0.13%；峰面积的相对标准偏差分别为0.10-2.4%和0.085-2.7%。芝麻素和芝麻林素加标回收率在 80.1-93.3% 之间。 岛津 Nexera XR 超快速液相色谱仪灵敏度高、重复性好，适用于粮油检验及相关行业部门的检测分析。 岛津全球应用技术开发支持中心 以往测定芝麻油中芝麻素和芝麻林素所使用的分析方法有：紫外光谱法、薄层色谱法、气相色谱法等，而采用高效液相色谱法操作更为简便省时，结果准确度高。本项目使用岛津Nexera XR 超快速液相色谱仪对芝麻油中芝麻素和芝麻林素进行快速、准确的分析测定。