激素药物中皮质激素残留分析检测方案(气相色谱仪)

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thermoscientific 热线8008105118电话4006505118www.thermofisher.com 全新一代三重四极杆液质联用TSQ Quantis 在激素类药物残留检测中的应用 摘要： 本文在 Thermo ScientificTM 全新液相色谱串联质谱三重四极杆平台 Thermo ScientificTM TSQTM Quantis 上针对国标 SN/T2222-2008中皮质激素、SN/T 2677-2010中雄激素以及临床研究中常检的孕激素和雌激素共计8种激素类药物建立了快速液质检测方法。8种激素类药物在其相应的浓度范围内线性关系良好(r>0.99)， LOD及 LOQ均能满足国标对激素类药物残留的检测要求。本方法对激素药物的残留检测及临床检测具有指导意义。 关键词： 激素，TSQ Quantis， 液相色谱串联质谱 引言 激素类药物主要包括雄激素(Androgens)、雌激素(Estrogens)、孕激素(Progestogens)、糖皮质激素(Glucocorticoids)等，因其具有影响动物性别分化，缩短生长周期，促进毛发生长及恢复皮肤弹性等作用，常被非法添加于各种动物源食品及化妆品中。研究表明，儿童性早熟、妇女子宫癌、卵巢癌等疾病发病率的上升均与滥用此类药物有关，因此 CEC、欧盟、国标、日本等均对动物源食品中激素类药物残留限量作出了严格要求。国标 SN/T 2222-2008及 SN/T 2677-2010 也分别对进出口动物源性食品中糖皮质激素类兽药残留量及雄性激素类药物残留量检测方法做了相关规定。 激素作为由内分泌腺或内分泌细胞分泌的内源性生物活性物质，在体内作为信使传递信息，通过调节各种组织细胞的代谢活动从而影响人体的生理活动。虽然激素在人体内的含量很低，但却对人类健康有很大的影响，缺乏或过多都会引发各种疾病。因此，临床上检测人体多种激素的含量对于疾病的诊断具有重大意义。本文针对皮质激素、孕激素、雄激素、雌激素类共8种激素类药物建立了快速液相色谱串联质谱检测方法，既可为激素类药物残留量测定提供技术保障，亦可为激素的临床检测提供方法借鉴。 2.实验部分 2.1.仪器与试剂 Thermo ScientificTM VanquishTM Binary Horizon 超高效液相色谱仪 TSQ Quantis 三重四极杆质谱仪 甲醇(色谱纯，美国Thermo Fisher 公司)；实验用水为Milli-Q去离子水； NHOH(色谱纯， SIGMA) 2.2.化合物信息及溶液配制 2.2.18种激素类化合物及其对应内标物信息(见表1) 2.2.2取适量激素类化合物标准品混合储备液，稀释成浓度在0.01 ng/mL-500 ng/mL范围的标准溶液，进液质联用仪器分析。 2.3.色谱条件： 色谱柱： Thermo ScientificTM AccucoreTM RP-MS(2.6 um， 100×2.1 mm)； 进样量：5pL； 流动相：A为水(含0.05% NHOH)，B为甲醇，梯度洗脱程序(见表2) 表2.梯度洗脱程序 Table 2 Gradient Elution Program 时间 A 0.05%NHOH-水 B甲醇 流速 0.00 85 15 0.3 1.00 85 15 0.3 1.50 60 40 0.3 2.00 20 80 0.3 4.00 10 90 0.3 5.00 10 90 0.3 5.50 85 15 0.3 7.00 85 15 0.3 表1.8种化合物及其对应内标物信息 Table 1 Information of 8 compounds and Internal Standards 类别 序号 简写 英文名 中文名 CAS 化学式 分子量 皮质激素 1 CORT Corticosterone 皮质酮 50-22-6 C21H3004 346.46 CORT-d8 2 COR Cortisone 可的松 53-06-5 C21H2805 360.44 COR-d7 3 F Cortisol 氢化可的松/皮质醇 50-23-7 C21H3005 362.46 F-d4 4 ALD Aldosterone 醛固酮 52-39-1 C21H2805 360.44 ALD-d7 孕激素 5 P Progesterone 孕酮 57-83-0 C21H3002 314.46 P_C3 雄激素 6 A2 Androstenedione 雄烯二酮 63-05-8 C19H2602 286.41 A2-C3 雌激素 7 E1 Estrone 雌酮 53-16-7 C18H2202 270.37 E1-D4 8 E2 Estradiol 雌二醇 50-28-2 C18H24O2 272.38 E2-D3 2.4.质谱条件： 可加热电喷雾电离源(HESI)，正、负离子切换扫描模式；扫描方式： SRM；喷雾电压 (+/-)：3500/2500V；离子传输管温度：350℃；鞘气压力30 arb；辅助气压力 10 arb；离子 源温度：350℃；碰撞气压力：2mTorr；选择反应监测离子对信息见表3. 表3.8种化合物及质谱采集参数 Table 3 MS/MS parameters of 8 compounds and Internal Standard 化合物 电离模式 母离子(m/z) RFLens 电压 (V) 子离子 (m/z) 碰撞能量(V) 皮质酮 ESI(+) 347.15 138 293.15* 16 皮质酮 ESI(+) 347.15 138 311.15 16 皮质酮-D8 ESI(+) 355.20 137 337.23 16 可的松 ESI(+) 361.16 161 121* 30 可的松 ESI(+) 361.16 161 163.12 24 可的松-D7 ESI(+) 368.20 158 168.12 24 氢化可的松 ESI(+) 363.15 141 121.04 25 氢化可的松 ESI(+) 363.15 141 309.08* 17 氢化可的松-D4 ESI(+) 367.20 144 331.16 16 醛固酮 ESI(-) 359.18 127 331.2 15 醛固酮 ESI(-) 359.18 127 189* 17 醛固酮-D7 ESI(-) 366.20 130 338.2 15 孕酮 ESI(+) 315.11 136 96.97* 22 孕酮 ESI(+) 315.11 136 108.97 25 孕酮-C3 ESI(+) 318.20 139 112 25 雄烯二酮 ESI(+) 287.20 130 109.00 24 雄烯二酮 ESI(+) 287.20 130 96.97* 21 雄烯二酮-C3 ESI(+) 290.20 139 100.00 21 雌酮 ESI(-) 269 176 145.00* 37 堆酮 ESI(-) 269 176 183.00 37 雌酮-D4 ESI(-) 273 164 147.00 37 雌二醇 ESI(-) 271 192 183.00* 40 雌二醇 ESI(-) 271 192 145 39 雌二醇-D3 ESI(-) 274 181 185 40 注：带*的为定量子离子 3.1灵敏度测试 采用上述仪器分析方法，8种激素类化合物及其内标物在7分钟内均可获得良好的色谱峰，图1为8种激素类化合物在 LOQ处的选择离子流提取图，各化合物灵敏度测试结果见表4. 3.2线性范围测试 采用上述仪器分析方法，对8种激素类化合物进行线性范围测试，线性相关系数r均≥0.99，线性关系良好。8种激素类化合物线性方程及线性相关系数结果见表4，选取部分化合物线性方程图见图2. 表4.8种化合物的线性范围、线性方程及相关系数 Table 4 Linear Ranges， Linear equations and correlation coefficients of 8 compounds 化合物 线性范围 (ng/mL) 线性方程(r) 相关系数 LOD (pg/mL) LOQ (pg/mL) 皮质酮 0.05-10 V=-940.681+73526.1*x 0.9989 10 50 可的松 0.05-10 v=2714.25+88018.3*x 0.9991 10 50 氢化可的松 0.05-10 V=-1921.51+64621.4*x 0.9964 10 50 醛固酮 0.5-50 v=796.593+10944.2*x 0.9948 100 500 孕酮 0.05-10 y=1245.64+430947*x 0.9995 10 50 雄烯二酮 0.05-10 V=-523.444+930850*x 1.0000 10 50 雌酮 0.05-50 y=-167.166+29794.7*x 1.0000 10 50 雌二醇 0.1-50 y=-245.945+6928.3*x 0.9977 50 100 图1.八种化合物及其内标物的色谱图(LOQ) Fig. 1 ElC Chromatogram of 8 Compounds and Internal Standards (LOQ) 3.3.仪器相对标准偏差 RSD 性能展示 采用上述仪器分析方法，对8种激素类化合物进行相对标准偏差测试(n=6)实验结果证明8种化合物相对标准偏差 RSD% 均≤5%其中，雄烯二酮 50 pg/mL (n=6) RSD% 为3.39%；100 pg/mL(n=6) RSD% 为 1.04%(图3) 图2.部分化合物线性方程图 Fig.2 Linear Ranges， Linear equations and correlation coefficients 图3.雄烯二酮选择离子流提取图n=6 Fig.3ElC Chromatogram of Androstenedione n=6 thermoscientific 4.实验结果与讨论 本文建立了三重四重杆液质联用仪(TSQ Quantis)分析8种激素类药物的检测方法。由实验结果可以看出，基于 TSQQuantis 建立的检测方法不仅具有优异的灵敏度和线性范围同时具备优异的重现性，本方法可用于激素类药物的日常分析检测。 口背 口 与质谱中国 赛默飞色谱 For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures. @ Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarksare the property of Thermo Fisher Scientific and its subsidiaries unless otherwise specified. 摘要：    本文在Thermo Scientic™ 全新液相色谱串联质谱三重四极杆平台Thermo Scientic™ TSQ™ Quantis 上针对国标SN/T2222-2008 中皮质激素、SN/T 2677-2010 中雄激素以及临床研究中常检的孕激素和雌激素共计8 种激素类药物建立了快速液质检测方法。8 种激素类药物在其相应的浓度范围内线性关系良好（r2>0.99），LOD 及LOQ 均能满足国标对激素类药物残留的检测要求。本方法对激素药物的残留检测及临床检测具有指导意义。引言    激素类药物主要包括雄激素（Androgens）、雌激素（Estrogens）、孕激素（Progestogens）、糖皮质激素（Glucocorticoids）等，因其具有影响动物性别分化，缩短生长周期，促进毛发生长及恢复皮肤弹性等作用，常被非法添加于各种动物源食品及化妆品中。研究表明，儿童性早熟、妇女子宫癌、卵巢癌等疾病发病率的上升均与滥用此类药物有关，因此CEC、欧盟、国标、日本等均对动物源食品中激素类药物残留限量作出了严格要求。国标SN/T 2222-2008及SN/T 2677-2010 也分别对进出口动物源性食品中糖皮质激素类兽药残留量及雄性激素类药物残留量检测方法做了相关规定。    赛默飞世尔科技AN_C_LCMSMS_1_201709Z全新一代三重四极杆液质联用TSQ Quantis 在激素类药物残留检测中的应用激素作为由内分泌腺或内分泌细胞分泌的内源性生物活性物质，在体内作为信使传递信息，通过调节各种组织细胞的代谢活动从而影响人体的生理活动。虽然激素在人体内的含量很低，但却对人类健康有很大的影响，缺乏或过多都会引发各种疾病。因此，临床上检测人体多种激素的含量对于疾病的诊断具有重大意义。本文针对皮质激素、孕激素、雄激素、雌激素类共8 种激素类药物建立了快速液相色谱串联质谱检测方法，既可为激素类药物残留量测定提供技术保障，亦可为激素的临床检测提供方法借鉴。实验结果与讨论    本文建立了三重四极杆液质联用仪（TSQ Quantis）分析8种激素类药物的检测方法。由实验结果可以看出，基于TSQQuantis 建立的检测方法不仅具有优异的灵敏度和线性范围同时具备优异的重现性，本方法可用于激素类药物的日常分析检测。