中药中五氯硝基苯残留检测方案(毛细管柱)

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结果与讨论标准品色谱图ThermoFisherSCIENTIFIC 加速溶剂萃取-固相萃取-气相色谱法(ASE-SPE-GC)分析中药中17种有机氯农药残留 车金水又邓桂凤梁立娜 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 中药材是人们用以防病、治病的特殊商品，首先应对人体无毒害作用。但是往往因为在中药材种植过程中使用农药，从而导致最终的中药材商品中存在农药残留。有机氯类农药如六六六、滴滴涕等，由于其化学性质稳定，在环境中降解缓慢，且脂溶性强，易于在生物体内富积，因而具有很大的残留毒性"。长期使用农药残留量高的中药对人体的危害是巨大的。《中国药典(2010版)》中就对六六六，滴滴涕及五氯硝基苯提出了限量要求，要求六六六总量和滴滴涕总量均不得高于200 ug/g， 五氯硝基苯总量不得高于 100 ug/g。 《中国药典(2010版)》中提供了有机氯的分析检测方法。采用的前处理方法为浸泡加超声波提取的方法，但该方法消耗溶剂量大、时间长、效率低、不能全自动进行，并且对实验员身体有损伤、污染环境。为了解决这一问题，近年发展出一种新型的前处理方法加速溶剂萃取法。加速溶剂萃取技术 (Accelerated Solvent Extraction， ASE)是在较高的温度(40℃-200℃)和高压(1500 psi) 下用溶剂萃取固体或半固体样品的样品前处理方法。ASE具有萃取效率高，速度快、溶剂用量少等优点。，目前， ASE 广泛应用于环境、食品、药物、天然产物和中药中的活性成分等领域。本实验建立了加速溶剂萃取中药材中有机氯的气相色谱分析方法。该方法操作简单快速、重复性好、回收率高。 仪器 Trace 1310 GC气相色谱仪，配ECD 检测器； TriPlus RSH 自动进样器； ASE 350。 ASE 条件及前处理 中药材样品采用粉碎机粉碎，过30目筛。精确称取经样品2g，加入硅藻土适量，混合均匀，转至底层垫有纤维素膜的萃取池(10mL)中，按表1加速溶剂萃取条件萃取。萃取完成后萃取液氮吹浓缩至近干，加3mL乙腈/乙酸乙酯(3/1)复溶，待净化 。 表1.ASE 萃取条件 条件 参数 溶剂 丙酮：正己烷=1：1 温度 80℃ 加热时间 5min 静态萃取时间 5min 循环次数 2 吹扫体积 60% 吹扫时间 60s 总萃取时间 20 min 总萃取液体积 20 mL 于Carb/NH， SPE 小柱上层添加1cm 高无水 Na，SO； 先用8mL乙腈/乙酸乙酯(3/1)淋洗层析柱，再将萃取浓缩液转移至 SPE 柱内，取适量乙腈/乙酸乙酯 (3/1)清洗浓缩瓶，转入 SPE柱内，然后用20mL乙腈/乙酸乙酯 (3/1)洗脱，洗脱液氮吹浓缩近干，精确量取1mL丙酮复溶，供 GC/MS分析。 ( 色谱条件 ) 色谱柱： TG-5MS (30m×0.25 mm×0.25 pm)柱温：80℃(1 min)， 20℃ /min 到180℃ (0 min)，5℃ /min 到300℃(0 min)， 最后20℃ /min 至320℃(5 min) 进样方式：不分流进样，分流时间为 1min 进样口温度：250℃ 载气：高纯氮气(99.999%)，恒流模式， 1 mL/min ECD 检测器温度：300℃ 进样量：1pL kHz 9 0 1 43 26 1 min- 图1.17种有机氯标准溶液空白加标色谱图 线性、检出限及 RSD 采用空白基质配制17种农药组份的混合标准溶液，各浓度分别为：20.0、50.0、100.0、200.0、400.0 pg/L，采用上述方法分别进样分析，考察各组分在 20.0-400 ug/L 浓度范 围内的线性。实验结果表明22种组分在20-400 ug/L线性关系良好，线性相关系数均大于0.99(见表3)。同时以三倍信噪比计算各组分检出限，各组分检出限在1.0-2.0 pg/L之间(见表2)。 表2.保留时间、线性及检出限数据 异狄氏剂 17.973 Y=0.1353+0.0108*X 0.9986 2.0 4 五氯硝基苯 11.160 Y=0.2536+0.0089*X 0.9992 1.0 0.9992 6 8-六六六 11.720 Y=0.3188+0.0083*X 0.9991 1.0 7 五氯苯氨 12.388 Y=0.5588+0.0147*X 0.9991 1.0 8 七氯 13.088 Y=0.2830+0.0111*X 0.9961 2.0 9 五氯硫代苯甲醚 13.802 Y=0.8991+0.0206*X 0.9994 1.0 10 艾氏剂 14.113 Y=0.3088+0.0094*X 0.9985 1.0 实际样品测试及加标回收 利用建立的分析方法，对甘草、黄芪、人参和金银花样品中有机氯进行分析。实验结果表明：本方法能够成功对甘草、黄芪、人参和金银花进行检测，没有出现色谱峰干扰情况。 同时本实验对加标回收率进行考察。随机选择一甘草样品，添加混合标准溶液(加标浓度为50、100、200 ug/L)， 考察17种有机氯农残的加标回收情况。实验结果表明各组分的加标回收率均在70-110%之间，符合日常分析检测的要求。对同一样品重复进样5针， RSD处于0.7-6.7%，仪器精密度符合检测要求。 /min 回收率/% 回收率/% 回收率/% /%(n=5) 12 90.3 5.1 13 狄氏剂 2 六氯苯 10.580 85.3 86.2 80.6 3.8 3 8-六六六 10.970 93.5 85.4 85.7 3.2 4 五氯硝基苯 11.160 87.2 93.1 107.6 4.2 5 y-六六六 11.292 80.7 87.8 86.7 1.2 6 e-六六六 11.720 94.3 92.6 102.1 4.3 7 五氯苯氨 12.388 95.4 93.1 98.1 4.1 8 七氯 13.088 83.7 87.7 105.8 4.6 9 五氯硫代苯甲醚 13.802 84.7 91.0 82.6 0.7 艾氏剂 赛默飞世尔科技提供了从样品前处理、仪器分析及报告输出全套解决方案。加速溶剂萃取具有快速，高效，节省溶剂等特点，能够在 20min 内将样品萃取完全。2012年4 月推出的全新一代 TRACE 1310 GC 能够完全满足《中国药典(2010版)》对检测灵敏度，精密度的要求。以及 TRACE1310 GC 完全由 Chromeleon 7.1软件控制，该软件直观易懂，简单易用，直接利用自带导航操作即可轻松应对纷繁复杂分析需求。 ( 参考文献 ) ( [1]刘磊，郭永泽；张玉婷等.ASE-GC 法测定甘草中的有 机氯农药残留量.药物分析杂质，2008，28(11)：1961-1964. [2]ChP(中国药典).2010.VolI(一部) ： 附录57. ) ( [3]牟世芬.加速溶剂萃取的原理及应用[J].环境化学， 2001，20(3)：299-300 ) 中药材是人们用以防病、治病的特殊商品, 首先应对人体无毒害作用。但是往往因为在中药材种植过程中使用农药，从而导致最终的中药材商品中存在农药残留。有机氯类农药如六六六、滴滴涕等，由于其化学性质稳定，在环境中降解缓慢，且脂溶性强，易于在生物体内富积，因而具有很大的残留毒性[1]。长期使用农药残留量高的中药对人体的危害是巨大的。《中国药典(2010 版)》中就对六六六，滴滴涕及五氯硝基苯提出了限量要求，要求六六六总量和滴滴涕总量均不得高于200 μg/g，五氯硝基苯总量不得高于100 μg/g[2]。《中国药典(2010 版)》中提供了有机氯的分析检测方法。采用的前处理方法为浸泡加超声波提取的方法，但该方法消耗溶剂量大、时间长、效率低、不能全自动进行，并且对实验员身体有损伤、污染环境。为了解决这一问题，近年发展出一种新型的前处理方法加速溶剂萃取法。加速溶剂萃取技术(Accelerated Solvent Extraction，ASE) 是在较高的温度(40 ℃ -200 ℃ ) 和高压(1500 psi) 下用溶剂萃取固体或半固体样品的样品前处理方法。ASE 具有萃取效率高，速度快、溶剂用量少等优点[3]。目前，ASE 广泛应用于环境、食品、药物、天然产物和中药中的活性成分等领域。本实验建立了加速溶剂萃取中药材中有机氯的气相色谱分析方法。该方法操作简单快速、重复性好、回收率高。