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SSL-CA14-656Excellence in Science Excellence in ScienceSFC-010 上海市徐汇区宜州路180号华鑫天地二期C801栋 咨询电话:021-34193996http://www.shimadzu.com.cn 离线 SFE 萃取 SFC-MS联用检测大蒜中的9种黄酮和酚酸类营养成分 SFC-010 摘要:本实验使用岛津 Nexera UC 离线 SFE 萃取 SFC-MS 联用建立了大蒜中阿魏酸等9种有效成分的检测方法。样品前处理简单,绿色环保且自动化程度高。萃取过程在封闭的萃取罐中进行,有效避免样品氧化和分解。使用Shim-pack UC-X Diol色谱柱,0.1mM草酸1mM甲酸铵甲醇做改性剂,9种目标物高效分离。0.02~4 pg 范围内基质匹配外标法建立校准曲线(阿魏酸和柚皮素在 0.01~4 ug),线性范围宽,相关系数R大于0.99, 各标准点准确度在91.2~110.5%之间。在0.4 ug 和1 ug加标量下考察萃取回收率和重复性,离线 SFE萃取各组分定量结果的相对标准偏差在5.5~13.2%之间,回收率在63.0~131.5%,可以满足定量分析的需求。本法用于市售多份大蒜、洋葱实际样品检测。 大蒜为百合科葱属植物,是亚洲地区的主要调味品和保健品,具有较强的抗氧化、杀菌、抗衰老和抗动脉硬化的功能。研究表明,含硫氨基酸、黄酮和多酚类化合物是大蒜中的重要功能成分,具有清除自由基,抗氧化的功效。但是这类物质不稳定,使用传统的溶剂萃取方式易发生分解。 超临界流体萃取(Supercritical Fluid Extraction,SFE) 是以超临界流体和少量改性剂为萃取剂的新型高效萃取技术。超临界 CO,(scCO,)以其安全、价廉、无毒、易制得、化学学性等因素成为 SFE 最常用的萃取剂。萃 取过程在封闭的腔体中进行,全程隔绝空气,特别适合易氧化组分的萃取。 SFC-MS 系统是岛津最新推出的超临界流体色谱质谱联用产品。超临界流体具有低黏度、高扩散性和高溶解性等特点,使得 SFC 分析具有快速、高效、高分离等优势。本实验使用离线 SFE 萃取, SFC-MS联用系统检测大蒜中的黄酮和多酚类物质,该法前处理简单,自动化程度高,所需样品量少。本系统在大蒜产地鉴别以及地理标志产品领域具有广阔的应用前景。 1.1仪器 Nexera UC 离线 SFE 萃取 SFC-MS联用系统,具体配置为:SFE-30A(超临界流体萃取单元), SIL-30AC(自动进样器), LC-30ADSF(CO,输液泵), LC-20ADXR(输液泵,含LPGU低压梯度比例阀), LC-20AD(补偿泵),DGU-20A5×2(在线脱气机), CTO-20AC(柱温箱), SFC-30Ax2( 背压调节单元), CBM-20A(系统控制器), LCMS-8040(三重四极杆质谱仪)配ESI电离源, LabSolutions Ver5.86(色谱工作站)。 1.2样品信息 化合物信息见表1。 标准溶液配制方法如下:分别取阿魏酸、香豆酸、柚皮素、芹菜素、原儿茶酸、异鼠李素、木犀草素、邻苯二甲酸和檞皮素5 mg,用甲醇超声溶解定容至10mL,配制成单一标准溶液。上述9种单一标准溶液各容400pL, 甲醇定容至5 mL 配制成 40 mg/L 混合标准溶液母液。再用甲醇稀释成0.1、0.2、1、2、10、20 ug/mL 的混合工作溶液。 外标法制备基质匹配标准曲线,萃取罐制备方法如下:随机选取山东苍州大蒜10瓣,去皮压碎,并用研钵混匀。分别称取6份蒜泥于样品舟中,每份0.5g。分别加入0.1、0.2、1、2、10、20、40 ug/mL 混标溶液 100 pL 在蒜泥表面,然后向每份样品舟中加入0.5g脱水剂,一次性药勺搅拌均匀后装入萃取罐进行 offline SFE 萃取。 洋葱、黑蒜、韭菜等实际样品测试 SFE 萃取罐制备方法如下:称取0.5g匀质后的市材与0.5g脱水剂混匀装填至5mL萃取罐中压紧。 表11化合物信息 No. 名称 英文名 CAS# 分子式 1 阿魏酸 Ferulic Acid 1135-24-6 C10H10O4 2 香豆酸 Coumalic acid 500-05-0 C6H4O4 3 柚皮素 Naringenin 480-41-1 C15H12O5 4 芹菜素 Apigenin 520-36-5 C15H10Os 5 原儿茶酸 3,4-Dihydroxybenzoic acid 99-50-3 C7H6O4 6 异鼠李素 Isorhamnetin 480-19-3 C16H12O7 7 木犀草素 Luteolin 491-70-3 C15H10O6 8 邻苯二甲酸 Phthalic acid 88-99-3 C8H6O4 9 槲皮素 Quercetin 117-39-5 C15H1007 1.3分析条件 SFE 萃取条件 萃取剂: A-scCO; B-MeOH 静态萃取:4min* 萃取流速:3mL/min 动态萃取:9 min 静态萃取剂比例: A/B=70/30(v/v) 萃取背压: A-40 MPa;B-10 MPa 动态萃取剂比例: A/B=70/30(v/v) 注:*包括1分钟充填时间 萃取温度:50℃ SFC 色谱条件 色谱柱: Shim-pack UC-X Diol(4.6 mm I.D.×150 mm L.,3 pm) 背压: A-10MPa;B-40 MPa 流动相: A-scCOz; B-0.1 mM 草酸1mM 甲酸铵MeOH 补偿液:甲醇洗脱方式:梯度洗脱:30%B(0-2 min)-40%B(3 min)-50%B(6-8 min)* 柱温:40℃ *8-12 min 为甲醇冲洗色谱柱 质谱条件 离子源: ESI- 加热模块温温:400℃ 雾化气流速:3.0L/min 干燥气流速:15.0L/min 接口电压:4kV 驻留时间:9~24 ms DL 温度:230℃ MRM参数:见表2 表2 MRM参数 No 名称 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias(V) CE(V) Q3 Pre Bias(V) 阿魏酸 193.10 134.10* 14 18 12 193.10 178.00 14 15 17 2 香豆酸 163.00 119.10* 18 16 11 163.00 91.00 12 29 16 3 柚皮素 271.10 151.00* 30 17 15 271.10 119.10 30 24 11 4 芹菜素 269.10 117.10* 20 34 11 269.10 151.00 20 24 14 5 原儿茶酸 153.10 109.10* 30 15 10 153.10 91.00 30 26 30 6 异鼠李素 315.10 300.00* 23 21 13 315.10 151.00 23 28 14 木犀草素 285.10 133.10* 21 32 12 285.10 151.00 20 25 14 8 邻苯二甲酸 165.10 77.10* 12 16 10 165.10 121.00 12 13 11 .9 皮素 301.10 179.00* 22 17 17 301.10 151.00 22 21 15 *表示定量离子 结果与讨论 2.1 SFC-MS 色谱图 对阿魏酸等9种标准品进行 SFC-MS分离条件优化。目标组分组硅胶柱上没有保留, 0.5 min 之前所有组分出峰完毕。在C18柱上各组分出峰集中在1~3min, 且异鼠李素峰形展宽。在氨基柱上邻苯二甲酸、原儿茶酸和木犀草素保留过强,不洗脱。在二醇基柱上各组分峰形尖锐,分离度好。因此最后选取 Shim-pack UC-X Diol 为分析柱。改性剂甲醇中加入0.1 mM草酸1 mM甲酸铵可消除酚酸的拖尾。另外,由于草酸在scCO, 中溶解度低,时间程序中设置了8~12分钟为纯甲醇冲洗柱子,避免草酸析出导致柱压升高。优化后最佳的 SFC-MS 色谱图见图1。 图11SFC-MS标样检测色谱图(阿魏酸、香豆酸、柚皮素、芹菜素、原儿茶酸、异鼠李素、木犀草素、邻苯二甲酸和檞皮素浓度为100 ng/mL) 2.2基质效应评价 大蒜中含有大蒜素、蒜氨酸和挥发油,可能会与目标组分共洗脱而产生基质效应。为了考察各组分的基质效应,分别用大蒜基质和甲醇配制以下系列工作溶液: 5、10、20、50、100、200、500和1000 ng/mL 得到两条工作曲线,用C%进行基质效应评价,计算公式如下: C%=(1-Ss/Sm)×100 其中, Ss 为基质匹配工作曲线的斜率;Sm 为溶液标曲的斜率。当-50%
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岛津企业管理(中国)有限公司为您提供《大蒜中黄酮和酚酸检测方案(液相色谱仪)》,该方案主要用于蔬菜中黄酮和酚酸检测,参考标准《暂无》,《大蒜中黄酮和酚酸检测方案(液相色谱仪)》用到的仪器有超高效液相色谱仪 Nexera UHPLC LC-30A、超临界流体萃取/色谱系统。
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