蔬菜中农药残留检测方案(气质联用仪)

智能文字提取功能测试中

SSL-CA14-827 Excellence in ScienceGCMSMS-151 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区区州路180号B2栋咨询电话：021-34193996Hotline：021-34193996Building B2，No.180 Yizhou Road， Shanghai PTV-GC-MS/MS 结合岛津AOC-6000 在线 uSPE技术测定蔬菜中农药残留 GCMSMS-151 摘要：参考GB 23200.113-2018《植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》，本文使用岛津 AOC-6000 自动进样器建立了一种QuEChERS 技术和在线uSPE 联用的前处理方法，用于测定蔬菜中的农药残留。该方法只需要少量QuEChERS 提取液洗脱上机，净化步骤自动完成，相比于传统的 d-SPE， pSPE能够获得更好的净化效果。结果显示：生菜基质中的农药均有较好的响应，在1~500 ug/L浓度范围内，对大部分农残线性关系良好，相关系数大于0.9955，检出限小于1pg/L。本方法自动化程度高，灵敏度好，可以有效的提高实验室工作效率。 新近颁布的国标GB 23200.113-20188《食品安全国家标准植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定气相色谱-质谱联用法》是首次采用 GC-MS/MS 法检测食品中农残的国家标准，可以很好的实现对复杂基质样品中的多组分农残检测。 在农残检测过程中，样品前处理直接关系到仪器方法检出限、灵敏度以及进样口和柱头的污染程度。本实验中对对品的前处理采用了新国标中的 QuEChERS 方 实验部分 1.1仪器 GCMS-TQ8050三重四极杆气质联用仪 1.2 GC-MS/MS 分析条件 X0.25um)PTV 进样口温度程序：65℃(1min)_(200℃/min)_280℃ (43min)柱温程序：40℃(4min)_25℃ /min_125℃_5℃ /min_240℃_12℃/min_300℃(10 min) 恒线速度方式：45.1cm/sec 进样量：1uL 1.3 AOC-6000 参数 上样量：150pL 内标量：3uL 保护剂： 15uL Mixing speed： 20 pL/s 法，但是净化过程采用了在线自动 uSPE净化技术，与传统的分散性固相萃取相比， uSPE 对于去除基质中的干扰物效果更好，消耗样品量较少，节省溶剂，自动化程度高。 岛 津 Smart MRM Pesticides Database 农残数据库可以迅速生成500MRM多种农残的检测方法，结合GCMS-TQ8050 三重四极杆串联气相色谱质谱仪的卓越性能，大大提高实验室的工作效率。 0-0.9min Split：20：1 0.9-6.0min Splitless 6.0min Split：20：1 接口温度：280℃ 离子源温度：230℃ 检测器电压：调谐电压+0.6kv 溶剂延迟时间：6 min Mix volume：100 uL uSPE sanple load speed：2 pL/s GCMS cycle time： 55 min 1.4样品前处理 取生菜样品，均质打碎，进行制样。称取10g样品(精确到0.01g)，于50mL离心管中，加入10 mL乙腈、QuEChERS 萃取盐包 (4g MgSO4、1g氯化钠、0.5g柠檬酸氢二钠、1g柠檬酸钠，50根离心管)及陶瓷均质子1颗，盖上离心管盖，剧烈震荡1 min， 4200 r/min 下离心5 min，取上清液1mL置于1.5 ml 进样小瓶待用。流程图呈下图1。 图1样品前处理流程图 1.5其他相关耗材 1.5.1 uSPE cartridge 小柱 如图2、3所示为 uSPE cartridge小柱的实物图和内部结构图，小柱的 SPE填料共计 45 mg (20 mg MgSO4，12 mg PSA and C18 each，1 mg CarbonX)。 图2 uSPE cartridge小柱的实物图 图3uSPE cartridge小柱内部结构图 1.5.2预开口洗脱瓶 进样洗脱小瓶瓶盖预开口设计，里面装载300 uL 的内衬管，如图4、5所示。 图4预开口小瓶内装内衬管 1.5.3 Fast wash 洗针液 由于整个自动前处理过程中，需要更换自动进样针，且进样针量程较大，传统的 Standard wash 无法满足整个前处理过程洗针需求，故选用 Fast wash模块，洗针液配置(体积比)：：超纯水：乙腈：甲醇=1：1：1。 1.5.4保护剂和内标溶液 保护剂起到保护峰型，提高灵敏度的作用，保护剂配置：2.5 mg/mL 古洛糖酸内酯和d-山梨糖醇，1.5 mg/mL莽草酸， 25 mg/mL乙基甘油，溶剂为含有1.1%甲酸的乙腈水溶液(体积比=3：2)；内标溶液：环氧七氯B，浓度为5ug/mL。 1.5.5自动前处理工作流程 1.自动清洗上样针；2.上样针移动到样品盘，准确移取150 uL QuEChERS提取液(取样速度20 uL/sec)；3.上样针移动到净化盘，扎起 uSPE小柱；4.上样针移动至洗托盘，将样品通过小柱注射入预开口洗脱瓶(注射速度2 uL/sec)；5.丢弃用完的 uSPE小柱；6.清洗上样针，并更换其他进样针，加入保护剂和内标至洗脱瓶，洗针；7.取250微升进样针针，进行抽吸混匀；8.进样一定体积到 GCMS 进样口，开始采集数据。 图5样品盘架位置示意图 结果与讨论 2.1 MRM 参数 表1 MRM采集参数 GCMSMS-151 200 西玛津 201.1>173.1 6 201.1>186.1 6 201 四氯硝基苯 260.9>202.9 14 202.9>142.9 22 202 特丁津 229.1>173.1 6 214.1>71.0 16 203 特丁净 241.2>185.1 6 241.2>170.1 14 204 杀虫畏 328.9>109.0 20 330.9>109.0 22 205 四氟醚唑 336.0>204.0 28 336.0>218.0 14 206 虫线磷 143.00>79.10 12 175.00>79.10 12 207 甲基立枯磷 264.9>249.9 14 264.9>93.0 24 208 毒壤膦 297.00>269.00 15 299.00>271.00 15 内标 1 环氧七氯B 352.8>262.9 14 354.8>264.9 20 表注：此表化合物编号按照 GB 23200.113-2018国排序号排序(按照英文名字母排序)，其中相同类别化合物统一编号((如所有六六六同分异构体统一编号为6)，所以总共为208个编号，其中A组103类，B组105类。如果将类似六六六这种结构异构的化合物分别编号，则总共有222个编号，A组109个，B组113个。 2.2校准曲线 称取10g基质空白样品(精确到0.01g)，加入10mL乙乙和QuEChERS盐包，添加混合标样，使QuEChERS 初次提取液加标浓度分别为1、10、100、250和500 ug/L， 上机供 GC-MS/MS 分析。以浓度比作为横坐标，峰面积比作为纵坐标，绘制标准曲线，以三倍信噪比计算检出限(表2)。图6所示为 MRM谱图，图7所示为校准曲线图，由于篇幅有限仅列出部分化合物。图8为使用 uSPE 净化的效果图。 图6部分化合物MRM谱图 GCMSMS-151 峰面积比 峰面积比 峰面积比 图7部分化合物校准曲线 图8 uSPE净化效果图 表2生菜基质中各农药标准曲线相关系数、检出限 126 苯醚甲环唑-2 0.9976 0.156 结论 QuEChERS 方法是近年来国际上应用较多的一种用于农产品检测的快速样品前处理技术，主要包括样品粉碎，提取，净化，浓缩等步骤。QuEChERS 方法具有回收率高，可分析的农药范围广等优点。通常 QuEChERS 净化采用经典的 SPE 技术， 需要活化 SPE 小柱、吸附洗脱等步骤，消耗试剂，过程繁琐，效率较低。在本实验中，使用岛津AOC-6000 多功能自动进样器结合 PTV进样口可以实现在线 uSPE 样品自动前处理，特点如下： 1、消耗样品量较少，一般上样量仅需200~300 uL； 2、正压过柱，过柱后无需浓缩，直接上机进行分析； 3、高通量分析，每个样品净化步骤，即 uSPE 仅需 5-8 min 的前处理时间，可以设置 GCMS cycle time， 叠加自动在线前处理进行分析。 4、在本实验中，采用 PTV进样口，无需转溶，可以增大进样量直接上机分析。 生菜基质中的农药均有较好的响应，在1~500 pg/L浓度范围内，对大部分农残线性关系良好，相关系数大于0.9955，检出限小于1 ug/L。 uSPE 在线前处理技术可以简单高效的完成 QuEChERS 方法中净化步骤，减少了溶剂对环境的污染，提高分析的准确度。 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center QuEChERS方法是近年来国际上应用较多的一种用于农产品检测的快速样品前处理技术，主要包括样品粉碎，提取，净化，浓缩等步骤。QuEChERS方法具有回收率高，可分析的农药范围广等优点。通常QuEChERS净化采用经典的SPE技术，需要活化SPE小柱、吸附洗脱等步骤，消耗试剂，过程繁琐，效率较低。岛津AOC-6000多功能自动进样器可以实现在线μSPE样品自动前处理，μSPE方法较传统的SPE具有以下特点：1、消耗样品量较少，一般上样量仅需200~300μl；2、正压过柱，过柱后无需浓缩，直接上机进行分析；3、高通量分析，每个样品净化步骤，即μSPE仅需5-8min的前处理时间，可以设置GCMS cycle time，叠加自动在线前处理进行分析。μSPE可以简单高效的完成QuEChERS方法中净化步骤，减少了溶剂对环境的污染，提高分析的准确度。