葡萄酒中赭曲霉毒素检测方案(固相萃取仪)

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Raykol Applications Collection-RKFT-F017 全自动固相萃取-高效液相质谱联用测定 葡萄酒中的赭曲霉毒素 赭曲霉毒素是继黄曲霉毒素后又一个引起世界广泛关注的霉菌毒素。它是由曲霉属的7种曲霉和青霉属的6种青霉菌产生的一组重要的、污染食 图-1.赭曲霉毒素A的结构式 曲霉毒素A和赭曲霉毒素B(OTA， OTB)的前处理和检测分析方法，对于 OTA 的加标回收率在80-110%之间。 关键字：全自动固相萃取；高效液相色谱-串联质谱；赭曲霉毒素 2.仪器、试剂以及耗材 Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪 MAX高分子树脂型阴离子交换柱(6mL，200mg) 氮气吹干装置： Raykol AutoEVA-60 全自动平行浓缩仪 3.样品提取与净化 3.1样品制备 3.1.1葡萄酒样品处理 准确量取 10 mL 的葡萄酒样品，加入12 mL的氢氧化钾溶液(0.1M)调节pH值至8.0-9.0，备用。 3.1.2空白样品 空白样品以干净的标准酒样为样品，进行上述实验操作。 3.1.3加标回收实验 添加不同浓度的标准品于不同的样品基质中，进行相对应的提取方法。 Raykol Auto Prep 200 全自动液体样品处理工作站(睿科) 高效液相色谱： (HPLC) Agilent 1260 质谱检测器：(MS-MS) Agilent 6410 3.2固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科1Fotector Plus or Fotector02HT 固相萃取柱 MAX 高分子树脂型阴离子交换柱(6mL， 200 mg) 淋洗 淋洗液-1： KOH(0.1M)：乙腈：水(3：60：37) 淋洗液-2：HO 淋洗液-3：乙腈 洗脱 醋酸：纯水：甲醇(5：5： 90) 先以5mL乙乙和7mL 水活化小柱，以 3mL/min 的速度上样22 mL待测液。然后以下述的三种淋洗液进行除杂，快速气推小柱除去残留的淋 洗液，最后以5mL的酸化乙腈进行洗脱。洗脱液氮吹至近干，加入乙乙水的定容液(1：1，含有0.1% 的甲酸)详细步骤见图-2。 序号 命令 溶剂 排出 流速[mL/min) 体积(mL) 时间[minJ 1 清洗样品通道 乙腈 60 4 1.4 2 活化 乙腈 废液1 2 5 2.9 3 活化 H20 废液1 3 7 2.8 4 上样 废液1 3 22 8.7 5 清洗样品瓶 KOH0.1M)：乙腈：水(3：60：37) 废液1 60 4 2.2 6 淋洗 H20 废液1 3 4 1.7 7 气推 废液1 10 3 0.7 8 淋洗 乙腈 废液1 1 6 6.5 9 气推 废液1 100 10 0.9 10 清洗注射泵 5%甲酸： H20：乙腈(5：5：90) 40 2 0.4 11 洗脱 5%甲酸： H20：乙腈(5：5：90) 收集 1 5 5.4 12 气推 收集 10 10 1.8 13 结束 图-2. Fotector Plus 赭曲霉毒素的 MAX净化方法 4.检测条件 4.1液质联用检测条件 色谱柱 流速 流动相 柱温 进样体积 检测器 离子模式 吹扫气 氮气温度 簇电压 雾化压力 梯度洗脱 4.2MRM参数： 表-1.赭曲霉毒素A的串联质谱检测参数 化合物 定量离子对(碰碰能量eV、锥孔电压eV) 定性离子(碰撞能量eV、锥孔电压eV) OTA 402.1>358.1(-20，-82) 402.1>166.9(-40，-68) OTB 368.1>133.1(-40，-82) 368.1>324(-40，-82) 4.3色谱图 图-3.OTA (左) 和 OTB(右)的质谱图(10ppb) 5.方法验证 空白葡萄酒样中添加水平为 1 ug /kg 的赭曲霉毒素A和B的回收率结果测试 表-2.添加水平为 5 ng /kg 的赭曲霉毒素A和B的回收率结果 名称 回收率(%) 平均回收率 RSD(%) 1 2 3 (%) OTA 91.33 98.34 97.08 95.59 3.41 OTB 104.09 101.93 97.34 101.12 3.41 6.结果与讨论 6.1葡萄酒样中存在较复杂的糖分和醇类干扰物，需要进行稀释后进行固相萃取净化，否则将会导致待测物组分的损失。 6.2如果样品中基质过于复杂，导致液质产生 7.仪器优势 睿科 Auto Prep 200 全自动液体样品处理工作站可实现标准品的全自动化配制，通过高精度双注射泵和自带补偿的软件完美配合，能自动逐级、自动计算、智能操作一步到位，重现性好，准确性高。 睿科 Fotector Plus 全自动固相萃取仪在进行葡 萄酒中赭曲霉毒素的净化时，在专门的软件操作下，通过 Wifi 进行控制，具有活化、上样、清洗样品瓶、淋洗、洗脱等多种命令，使用固定式上样针和柱插 较强的基质效应(增强或抑制)，容易使得基质加标测试的回收率偏高或偏低，此时需要采用基质工作曲线进行校正。 杆组合、高精度注射泵精准控制流速、12通阀的切换来同时运行6个样品通道，，可连续处理60个样品，具有操作便捷、精确性高和高通量等特点。 睿科 Auto EVA-60 全自动平行浓缩仪可一次性平行浓缩60位样品，，通过软件控制氮吹针自动跟随浓缩液面下降得速度、水浴温度和氮吹压力，具有处理样品通量高、操作简单便捷、浓缩效率高、消耗氮气量少等特点。 全自动液体样品处理工作站标准溶液配制 全自动固相萃取仪样品净化 全自动浓缩仪样品浓缩 邮箱：info@raykol.com热线：址：： www.raykol.com 邮箱： info@raykol.com热线：址：： www.raykol.com 本应用文章参考GB5009.96-2016《食品安全国家标准食品中赭曲霉毒素A 的测定》中第二法，采用阴离子交换柱净化法，高效液相色谱-质谱检测联用技术检测，建立了大麦粉及玉米粉基质中对赭曲霉毒素A和赭曲霉毒素B（OTA，OTB）的前处理和检测分析方法，对于OTA的加标回收率在80-110%之间。