婴幼儿奶粉中核苷酸检测方案(液相色谱柱)

智能文字提取功能测试中

采用 TSKgel 色谱柱参考 GB 5413.40-2016分析婴幼儿食品和乳品中核苷酸核苷酸 Nucleotide 【基本信息】 核苷酸是由含氮的碱基、核糖或脱氧核糖、磷酸连接而成的，是构成核酸的成分。核苷酸在人 体内广泛分布，具有多种生物学功能。核苷酸的主要生理功能是广泛参与人体的能量代谢、蛋白质 合成，具有提高各种酶的活性、活化细胞功能、促进抗体形成、增强免疫功能的作用。 目前在婴幼儿配方奶粉中作为添加剂的核苷酸主要有5种：胞嘧啶核苷酸 (CMP)、腺嘌呤核苷酸(AMP)、尿嘧啶核苷酸(UMP)、次黄嘌呤核苷酸(IMP)、鸟嘌呤核苷酸(GMP)。在现行的国家相应标准中， GB 14880-2012《食品安全国家标准食品营养强化剂使用标准》中规定，核苷酸的允许使用量为0.12 g/kg~0.58g/kg；(以核苷酸总量计)。 【溶液的配制】 混合标准溶液：分别称取核苷酸标准品 CMP、AMP、UMP各10 mg、GMP和 IMP 各5 mg(准确至0.1 mg)，用超纯水溶解转移至同一个100 mL容量瓶中，用水定容至100 mL。此标准溶液浓度为： CMP、AMP、UMP各 100 ug/mL； GMP、IMP各 50 ug/mL。每个组分称取的质量都要校正水分和钠盐含量，以酸型计。 磷酸盐缓冲液：称取1.360 g磷酸二氢钾，加 0.4753g四丁基硫酸氢铵，加900 mL水溶解，用磷酸氢二钾溶液(0.1 mol/L) 调pH至3.3，用水定容到1000mL。一周内使用。 【前处理步骤】 含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约5g(精确至0.1 mg)， 于100mL锥形瓶中，加入约0.2g淀粉酶，加入20mL热水(30℃~40℃)充分溶解试样，或称取混合均匀的液体试样约20g(精确至1mg)于100 mL锥瓶瓶中，加入约0.2g淀粉酶摇匀，于37℃±2℃培养箱内酶解 30 min。取出冷却至室温。 不含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约5g(精确至0.1mg)， 于100 mL锥形瓶中，加入20mL热水(50℃~60℃)充分溶解试样，冷却至室温，或称取混合均匀的液体试样约20g(精确至1mg)于100 mL锥形瓶中。 待测液的制备：用醋酸溶液调试容溶液 pH4.1， 移入50 mL 容量瓶中，定容，滤纸过滤，所得滤液用 0.45 um微膜过滤备用。 【分析条件】 仪器： Agilent 1120 色谱柱：TSKgel ODS-100V(4.6mm I.D.x250 mm， 5 um) 流动相：磷酸盐缓冲液+甲醇=94%+6% 流速：1.0mL/min 柱温：25C 检测器：紫外检测器 进样体积：10uL 分析结果： 图1混合标准溶液色谱图 图2奶粉样品溶液色谱图 No. 名称 保留时间(min) 理论塔板数 精密度 1 胞嘧啶核苷酸(CMP) 4.361 9682 2.73% 2 腺嘌呤核苷酸(AMP) 14.783 11536 0.95% 3 尿嘧啶核苷酸(UMP) 17.701 11257 0.52% 4 鸟嘌呤核苷酸 (GMP) 19.511 10730 3.34% 5 次黄嘌呤核苷酸(IMP) 21.693 10924 1.12% 结论： 采用上述方法可以满足国标 GB 5413.40-2016对核苷酸的分析测定要求。 采用东曹C18柱TSKgel ODS-100V（4.6 mmI.D.X250mm,5 μm），参照GB 5413.40-2016，对婴幼儿奶粉中的胞嘧啶核苷酸（CMP）、腺嘌呤核苷酸（AMP）、尿嘧啶核苷酸（UMP）、次黄嘌呤核苷酸（IMP）、鸟嘌呤核苷酸进行含量测定。实验结果表明，该方法可以满足国标中对核苷酸的分析测定要求。