水中联苯胺检测方案(固相萃取仪)

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LabTech 前言 4，4'-二氨基联苯俗称“联苯胺”，分子式为(C6H4NH2)2，系联苯的衍生物之一，为IARC第-_-类致癌物，有强烈的致癌作用，是染料合成的中间体，在染色的棉纺织品中容易超标。 联苯胺是重要的染料中间体，联苯及其衍生物广泛用于各种染料合成，其种类多达250种。4，4'-二氨基联苯及其盐都是有毒且会致癌的物质，进入体内，引起皮炎，刺激黏膜，损害肝和肾脏，且会造成膀胱癌和胰腺癌。联苯胺的浓度只要达到 6.7ppb，对人体就有致癌的风险，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，4，4'-二氨基联苯(联苯胺)在一类致癌物清单中，因此，建立一套快速处理、富 集水中联苯胺并检测的方法是非常有必要的。本文使用 SPE-1000 全自动固相萃取系统对水中联苯胺进行固相萃取富集，用高效液相色谱仪进行检测。 本文参考“HJ1014-2019 水质联苯胺的测定高效液相色谱法”采用 SPE1000 配置两种不同类型的固相萃取柱，测试其对联苯胺的回收效果，经过实验，SSCX 固相萃取柱的回收率在78.7%~94.2%之间，重现性 RSD在2.0%~6.4%之间； HLB固相萃取柱的回收率在81.0%~91.9%之间，重现性 RSD 为 6.0%。两种萃取柱均得到较好的回收率和良好的重现性，说明 SPE-1000 全自动固相萃取系统可靠稳定，适用于大体积水中的联苯胺样品前处理。 关键词：联苯胺， SPE-1000全自动固相萃取系统，高效液相色谱法(荧光检测器) 1 SCX 萃取柱实验过程 1.1仪器与试剂 SPE-1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司)； LC600 高压高效液相色谱仪(莱伯泰科公司)； 联苯胺，≥99.5%，远航试剂厂； 甲醇(色谱纯)；乙腈(色谱纯)；；甲酸(分析纯)；乙酸(分析纯)； SCX 固相萃取柱(500mg/3 mL莱伯泰科) 自来水；超纯水。 ( 电 话 ： 01 0-804 86450 (总部 )/ 649 73 11 9(市 场) ) 1.2混合标准工作液的配制 取一定量的联苯胺标品于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，浓度为1000 ug/mL，用甲醇稀释成 1 ug/mL 标准工作液，用甲醇水溶液(V：V=1：1)依次配置成浓度分别为 5ug/L、10 ug/L、50 ug/L、100 ug/L、200 ug/L 的混合标准工作液。 1.3试验方法 1.3.1样品准备 取150 mL水样，加入8 mg 硫代硫酸钠，超声10 min， 用盐酸或者氢氧化钠将水样调至 PH=5-6(蒸馏水无需调节 PH)， 在分别加入60 uL、150 uL的标准工作液，使待测水样中联苯胺的加标浓度分别为 0.40 ug/L， 将样品混匀待处理。 1.3.2固相萃取及浓缩 按照图1所示的方法进行 SPE-1000 方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，进行30℃氮吹至1mL，水定容至2mL，待检测。 图1水中联苯胺的SPE 富集方法 1.3.3 HPLC测定水中联苯胺 色谱柱：： C18， 5 um， 4.6mm*150 mm； 波长：激发波长：292nm，检测波长395 nm； 流速： 1.0 mL/min： 进样量：20uL； 流动相：乙酸铵：乙腈=85：15(0.05%甲酸) 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-804 86450 (总部 )/ 649 73 11 9(市 场) ) 传真：010-80486354(总部)/64974268(市场) 2试验结果 2.1水中联苯胺色谱图 2.1.1水中联苯胺标品色谱图 图2为取 30 pL的混合标准工作液用甲醇：水(1：1)定容到1.0 mL检测，联苯胺标品出峰色谱图，出峰时间分别为 6.1 min。 图2联苯胺标品出峰色谱图 2.1.2水中联苯胺加标样品色谱图 图3联苯胺加标样品出峰色谱图，出峰时间为 6.1 min， 图3联苯胺加标样品出峰色谱图 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-804 86450 (总部 )/ 649 73 11 9(市 场) ) 传真：010-80486354(总部)/64974268(市场) 联苯胺线性如下图4。 图4联苯胺线性图 2.3 HPLC测定水中联苯胺回收率 HPLC测定蒸馏水中联苯胺回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率均在78.7%~83.0%之间，重现性 RSD 为 2.0%。 表1蒸馏水中联苯胺的加标回收率(加标浓度 0.4 ug/L ) 名称 编号 回收率(%) 平均(%) RSD(%) 1 2 3 4 5 6 联苯胺 78.7 80.0 79.6 80.1 81.9 83.0 80.6 2.0 HPLC 测定自来水中联苯胺回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率均在79.4%~94.2%之间，重现性 RSD 在6.4%。 表1自来水中联苯胺的加标回收率(加标浓度0.4 ug/L) 名称 回收率(%) 平均 RSD(%) 编号 1 2 3 4 5 6 (%) 联苯胺 80.3 79.8 80.9 83.2 94.2 84.4 83.8 6.4 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-804 86450 (总部 )/ 649 73 11 9(市 场) ) 3 HLB萃取柱试验过程 3.1仪器与试剂 SPE-1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司)； LC600高压高效液相色谱仪(莱伯泰科公司)； 联苯胺，>99.5%，远航试剂厂； 甲醇(色谱纯)；乙腈(色谱纯)；甲酸(分析纯)；乙酸(分析纯)； HLB固相萃取柱(500 mg/6 mL 沃特世) 自来水，超纯水。 3.2标准工作液的配制 取又一定量的联苯胺标品于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，浓度为1000 ug/mL， 用甲醇稀释成1 ug/mL 标准工作液，用甲醇水溶液 (V：V=1：1)依次配置成浓度为 30 ug/L 的混合标准工作液。 3.3试验方法 3.3.1样品准备 取150 mL 自来水样品，加入8 mg 硫代硫酸钠，超声10 min， 用盐酸或者氢氧化钠将水样调至 PH=6~9，在分别加入60 uL的标准工作液，使待测水样中联苯胺的加标浓度分别为 0.40 ug/L，将样品混匀待处理。 3.3.2固相萃取及农缩 按照图5所示的方法进行 SPE-1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，进行32℃氮吹至1mL，水定容至2mL，待检测。 图5水中联苯胺的 SPE 富集方法 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-804 86450 (总部 )/ 649 73 11 9(市 场) ) 传真：010-80486354(总部)/64974268(市场) 3.3.3 HPLC测定水中联苯胺 色谱柱： C18， 5 um， 4.6 mm*150 mm； 波长：激发波长：292nm， 检测波长395 nm； 流速： 1.0mL/min： 进样量： 20pL； 流动相：乙酸铵：乙腈=85：15(0.05%甲酸) 4试验结果 4.1水中联苯胺色谱图 4.1.1水中联苯胺标品色谱图 图6为取 30 uL的混合标准工作液用甲醇：水(1：1)定容到1.0 mL检测，联苯胺标品出峰色谱图，出峰时间分别为 6.6min。 图6联苯胺标品出峰色谱图 4.1.2水中联苯胺加标样品色谱图 图7联郑胺加标样品出峰色谱图，出峰时间为 6.6min， 图7联苯胺加标样品出峰色谱图 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-804 86450 (总部 )/ 649 73 11 9(市 场) ) 传真：010-80486354(总部)/64974268(市场) 4.2HPLC测定水中联苯胺回收率 HPLC 测定自来水中联苯胺回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率均在81.0%~91.9%之间，重现性 RSD 为6.0%之间。 表1自来水中联苯胺的加标回收率(加标浓度0.4 ug/L) 名称 编号 回收率(%) 平均(%) RSD(%) 1 2 3 4 5 6 联苯胺 81.9 91.9 83.2 91.5 91.1 81.0 86.8 6.0 5结论与讨论 1从实验效果上来看，两种萃取柱均满足实验要求，可任意选择其中一种； 2!联苯胺属于二元弱碱，在使用阳离子交换柱时，将样品 PH 调至弱酸性，有利于固相萃取柱对于目标物勿吸附； 3SPE-1000处理水样，回收率好、稳定性高，适宜处理大体积水样； 4SPE-1000自动在线富集方便快捷，极大节省了实验成本。 5乙酸铵和乙腈体系的流动相，保留时间过短，容易产生杂质干扰，流动相中引入酸，既可以增大目标物的响应，又能延长目标物的保留时间。 ( 参考文献 ) 固相萃取-高效液相色谱法测地表水中的联苯胺 饮用水源中痕量联苯胺的检测方法 HJ 1014-2019 水质联苯胺的测定高效液相色谱法 撰稿人徐加乐 审稿人LN 北京莱伯泰科仪器有限公司 电话：010-80486450(总部)/64973119(市场) 传真：010-80486354(总部)/64974268(市场) 地址：北京空港工业区Your Lab， Our Techwww.labtechgroup.com 4,4'-二氨基联苯俗称“联苯胺”，分子式为(C6H4NH2)₂，系联苯的衍生物之一，为IARC第一类致癌物，有强烈的致癌作用，是染料合成的中间体，在染色的棉纺织品中容易超标。联苯胺是重要的染料中间体，联苯及其衍生物广泛用于各种染料合成，其种类多达250种。4,4'-二氨基联苯及其盐都是有毒且会致癌的物质，进入体内，引起皮炎，刺激黏膜，损害肝和肾脏，且会造成膀胱癌和胰腺癌  。联苯胺的浓度只要达到6.7ppb，对人体就有致癌的风险，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，4,4'-二氨基联苯（联苯胺）在一类致癌物清单中，因此，建立一套快速处理、富集水中联苯胺并检测的方法是非常有必要的。本文使用SPE-1000全自动固相萃取系统对水中联苯胺进行固相萃取富集，用高效液相色谱仪进行检测。本文参考“HJ 1014-2019 水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法”采用SPE1000配置两种不同类型的固相萃取柱，测试其对联苯胺的回收效果，经过实验， SCX固相萃取柱的回收率在78.7%~94.2%之间，重现性RSD在2.0%~6.4%之间；HLB固相萃取柱的回收率在81.0%~91.9%之间，重现性RSD为6.0%。两种萃取柱均得到较好的回收率和良好的重现性，说明SPE-1000全自动固相萃取系统可靠稳定，适用于大体积水中的联苯胺样品前处理。