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质粒DNA提取可以:(1)快速纯化质粒;(2)用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。 实验方法原理: 碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性,再将pH值调至中性使其复性,复性的为质粒DNA,而染色体DNA不会复性,缠结成网状物质,通过离心除去。 实验材料 大肠杆菌 试剂、试剂盒 Tris-Hcl EDTA 葡萄糖 NaOH KAac NaAc 异丙醇 溶菌酶 酚:氯仿 无水乙醇 LB培养基 仪器、耗材 超净工作台 培养箱 摇床 恒温水浴锅 台式离心机 取液器 低温冰箱 冷冻真空干燥机 电泳仪 水平电泳槽 紫外观测仪 实验步骤: 一、材料与试剂准备 1. 材料:大肠杆菌。 2. 仪器:超净工作台,培养箱,摇床,恒温水浴锅,台式离心机,取液器一套,低温冰箱,冷冻真空干燥机,电泳仪,水平电泳槽,紫外观测仪。 3. 试剂: (1)Solution I :25 mM Tris-Hcl(pH7.4),10 mM EDTA(pH8.0),50 mM葡萄糖,高压灭菌,4℃保存。 (2)Solution II :0.2 M NaOH, 1%SDS 现配现用。 (3)Solution III :5 N KAc pH4.8,高压灭菌,4℃保存。 (4)3 M NaAc pH5.2,高压灭菌,4℃保存。 (5)异丙醇,溶菌酶(8 mg/ml),酚/氯仿,无水乙醇,70%乙醇,LB培养基,电泳试剂。 二、操作步骤 1. 细菌繁殖:LB培养基,2 ml/20 ml,37℃,200 rpm,摇一摇,过夜。 2. 离心10 min,5 000 rpm, 4℃;弃上淸液。 3. 沉淀(菌体细胞)预冷的TES缓冲液洗涤,离心10 min,5 000 rpm, 4℃,加入预冷的1 ml Solution I,冰浴10 min。 4. 重新悬浮,加入150 ul溶菌酶母液,室温放置5 min。 5. 加入1.2 ml Solution II, 冰浴5 min。 6. 加入0.9 ml预冷乙酸钾,混匀,离心10 min,12 000 rpm,4℃。 7. 加入1.5 ml异丙醇,-20℃冰箱内放置15 min。 8. 离心10 min,12 000 rpm,4℃。 9. 取沉淀,悬于400 ul TE缓冲液中。 10. 加入40 ul,3 M NaAc。 11. 酚/氯仿,抽提,乙醇沉淀。 12. 离心10 min,12 000 rpm,4℃。 13. 取沉淀,冷冻干燥,再悬浮于50 ul TE缓冲液中。 14. 电泳检测提取DNA的质量。 质粒DNA提取可以:(1)快速纯化质粒;(2)用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。 实验方法原理:碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性,再将pH值调至中性使其复性,复性的为质粒DNA,而染色体DNA不会复性,缠结成网状物质,通过离心除去。 实验材料 大肠杆菌 试剂、试剂盒 Tris-Hcl EDTA 葡萄糖 NaOH KAac NaAc 异丙醇 溶菌酶 酚:氯仿 无水乙醇 LB培养基 仪器、耗材 超净工作台 培养箱 摇床 恒温水浴锅 台式离心机 取液器 低温冰箱 冷冻真空干燥机 电泳仪 水平电泳槽 紫外观测仪 实验步骤:一、材料与试剂准备 1. 材料:大肠杆菌。 2. 仪器:超净工作台,培养箱,摇床,恒温水浴锅,台式离心机,取液器一套,低温冰箱,冷冻真空干燥机,电泳仪,水平电泳槽,紫外观测仪。 3. 试剂:(1)Solution I :25 mM Tris-Hcl(pH7.4),10 mM EDTA(pH8.0),50 mM葡萄糖,高压灭菌,4℃保存。(2)Solution II :0.2 M NaOH, 1%SDS 现配现用。(3)Solution III :5 N KAc pH4.8,高压灭菌,4℃保存。(4)3 M NaAc pH5.2,高压灭菌,4℃保存。(5)异丙醇,溶菌酶(8 mg/ml),酚/氯仿,无水乙醇,70%乙醇,LB培养基,电泳试剂。 二、操作步骤1. 细菌繁殖:LB培养基,2 ml/20 ml,37℃,200 rpm,摇一摇,过夜。2. 离心10 min,5 000 rpm, 4℃;弃上淸液。3. 沉淀(菌体细胞)预冷的TES缓冲液洗涤,离心10 min,5 000 rpm, 4℃,加入预冷的1 ml Solution I,冰浴10 min。4. 重新悬浮,加入150 ul溶菌酶母液,室温放置5 min。5. 加入1.2 ml Solution II, 冰浴5 min。6. 加入0.9 ml预冷乙酸钾,混匀,离心10 min,12 000 rpm,4℃。7. 加入1.5 ml异丙醇,-20℃冰箱内放置15 min。8. 离心10 min,12 000 rpm,4℃。9. 取沉淀,悬于400 ul TE缓冲液中。10. 加入40 ul,3 M NaAc。11. 酚/氯仿,抽提,乙醇沉淀。12. 离心10 min,12 000 rpm,4℃。13. 取沉淀,冷冻干燥,再悬浮于50 ul TE缓冲液中。14. 电泳检测提取DNA的质量。
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上海远慕生物科技有限公司为您提供《大肠杆菌中DNA提取实验检测方案(化学试剂)》,该方案主要用于其他中DNA提取实验检测,参考标准《暂无》,《大肠杆菌中DNA提取实验检测方案(化学试剂)》用到的仪器有大肠杆菌检测试剂盒、大肠杆菌显色培养基、大肠杆菌成套(新国标)、进口β-半乳糖苷酶(来源于大肠杆菌)9031-11-2、大肠杆菌检测试剂盒价格。
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