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上海通微分析技术有限公司Unimicro (Shanghai) Technologies Co., Ltd.Application NoteAN0425-QT0046 基于高效微流电动液相色谱系统分离检测强阳离子交换亲水性多肽 1.背景介绍 毛细管电色谱(CEC) 是一种集高效液相色谱 (HPLC)的高选择性和高效毛细管电泳(CE)为一体的小型液相色谱技术。自1974年第一次报道 CEC 以来,随着理论和应用的发展, CEC已成为一种强大的分离技术。然而,这种技术的发展速度受到了实际问题和困难的阻碍,主要包括色谱柱的制造,再生和仪器有关。在“纯”CEC中,由于焦耳加热,经常遇到形成气泡和干涸的问题。并且因其没有注射阀,难以实现样品的定量注射。 为了减少气泡的形成,HPLC泵已经与 CEC 系统相耦合,最终形成一种被称为高效微流电动液相色谱系统(eHPLC)的混合技术。在这种新颖的分离技术中,压力和电场都可以施加在填充的毛细管色谱柱上,有利于中性和带电物质的分离。此外, eHPLC可实现溶剂的梯度洗脱和定量注射。 我们研制的eHPLC系统,,可用于高效微流电动液相色谱、微流液相和毛细管电泳等实验。并研究了 eHPLC 在亲水性和强离子交换混合模式下多肽的分离。对于多肽等带电物质, eHPLC模式下的保留机制是基于色谱分离和电泳迁移。因此,,可以通过改变电场和压力来调节多肽的洗脱。并且我们评价了亲水性相互作用、离子交换和电迁移对多肽分离的贡献,并讨论了保留机制。用梯度洗脱法分离 eHPLC 系统中的多肽,研究了压力、电场、有机溶剂、pH值、离子强度等因素对多肽混合物分离的影响。 2.测试条件 仪器: TriSep @-3000高效微流电动液相色谱系统 3.测试结果 图1 eHPLC 系统分离检测多肽 注: 1Met-Met;2 Gly-Leu; 3 Leu-Gly-Gly; 4 Gly-Cys; 5 Gly-Gly-Gly。 A CE:; BRP-eHPLC; C SCX-eHPLC. 图2 eHPLC 系统中压力对物质保留性的影响 图3 eHPLC 系统中施加电压强度对物质保留性的影响 Acetonitrile (%) 图4 eHPLC系统中有机溶剂浓度对物质保留性的影响 图5 eHPLC系统中离子强度对物质保留性的影响 图6 eHPLC系统中等度洗脱和梯度洗兑6种多肽的比较 注:A等度(75%乙腈);B等度(50%乙腈);C梯度。 4.结论 采用 TriSep @-3000 高效微流电动液相色谱系统,可以通过改变外加电压和压力来调节多肽等带电化合物的选择性,克服了纯 CEC 中形成气泡的问题。系统的研究了压力、电 场、有机溶剂、pH值、离子强度等因素对多肽混合物分离的影响。实验结果表明,高效微流电动液相色谱系统,可方便地进行连续梯度洗脱,并可通过液相型注射阀实现定量注射。并且是分离亲水性多肽的一种有效方式。 5.配置列表 仪器配置 TriSep -3000 高效微流电动液相色谱系统(配二元梯度泵、柱温箱、UV检测器、高压电源、自动进样器、微流控、控制器) Clarity Lite 色谱工作站 www.unimicrotech.com.cn TEL: E-mail:info@unimicrotech.comcn 毛细管电色谱(CEC)是一种集高效液相色谱(HPLC)的高选择性和高效毛细管电泳(CE)为一体的小型液相色谱技术。自1974年第一次报道CEC以来,随着理论和应用的发展,CEC已成为一种强大的分离技术。然而,这种技术的发展速度受到了实际问题和困难的阻碍,主要包括色谱柱的制造,再生和仪器有关。在“纯”CEC中,由于焦耳加热,经常遇到形成气泡和干涸的问题。并且因其没有注射阀,难以实现样品的定量注射。 为了减少气泡的形成,HPLC泵已经与CEC系统相耦合,最终形成一种被称为高效微流电动液相色谱系统(eHPLC)的混合技术。在这种新颖的分离技术中,压力和电场都可以施加在填充的毛细管色谱柱上,有利于中性和带电物质的分离。 此外,eHPLC可实现溶剂的梯度洗脱和定量注射。 我们研制的eHPLC系统,可用于高效微流电动液相色谱、微流液相和毛细管电泳等实验。并研究了eHPLC在亲水性和强离子交换混合模式下多肽的分离。对于多肽等带电物质,eHPLC模式下的保留机制是基于色谱分离和电泳迁移。因此,可以通过改变电场和压力来调节多肽的洗脱。并且我们评价了亲水性相互作用、离子交换和电迁移对多肽分离的贡献,并讨论了保留机制。用梯度洗脱法分离eHPLC系统中的多肽,研究了压力、电场、有机溶剂、pH值、离子强度等因素对多肽混合物分离的影响。
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上海通微分析技术有限公司为您提供《多肽混合物中分离纯化检测方案(液相色谱仪)》,该方案主要用于生物药品药物研发中含量测定检测,参考标准《暂无》,《多肽混合物中分离纯化检测方案(液相色谱仪)》用到的仪器有通微 TriSep®-3000高效微流电动液相色谱仪。
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