猪肉中辛基酚等5种酚类物质检测方案(固相萃取仪)

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Agela Technologies艾杰尔-飞诺美/客服热线：400-606-8099邮箱： cninfo@phenomenex.com/网址：www.agela.com.cn 猪肉中辛基酚等5种酚类物质的分析方法 AF10202 应用及技术服务部 摘要：本实验重现了《BJS201913 食品中辛基酚等5种酚类物质的测定方法》，使用 CleanertPEP 固相萃取柱结合 LC-MS/MS 对猪肉样品进行了测试。样品经乙腈提取后， Cleanert PEP固相萃取柱净化，乙腈洗脱， Kinetex EVO C18 液相色谱柱进行检测，自动进样器前连接Venusil XBP C18色谱柱作为捕集柱，采用内标法定量。结果表明，当添加水平为5 ug/kg和20 ug/kg 时，5种酚类物质相对回收率在80%~120%之间，能够满足检测要求。 关键词：辛基酚；壬基酚；正壬基酚；正辛基酚；双酚 A； Cleanert PEP； Kinetex EVO C18；Venusil XBP C18； 样品信息 表1.待测组分与内标物质信息 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 分子量 壬基酚 Nonylphenol 25154-52-3 C15H24O 220.35 正壬基酚 4-n-Nonylphenol 104-40-5 C15H24O 220.35 辛基酚 4-tert-Octyl phenol 140-66-9 C14H22O 206.33 正辛基酚 4-n-Octyl phenol 1806-26-4 C14H22O 206.33 双酚A BisphenolA 80-05-7 C15H16O2 228.29 双酚A-D4 Bisphenol A -3，3'，5，5'-D4 347841-41-2 C15H12 D402 232.31 壬基酚-13C6 3，6，3-Nonylphenol-13C6 1173020-38-6 C15H24O 226.40 正壬基酚-D4 4-n-Nonylphenol -2，3，5，6-D4，OD 358730-95-7 C15H19D5O 225.38 对辛基酚-13C6 4-tert-Octylphenol-13C6 1173020-24-0 C14H22O 212.28 正辛基酚-D17 4-n-Octyl phenol-D17 1219794-55-4 CD3(CD2)7C6H4OH 223.43 实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 液相色谱串联质谱仪 (SCIEX API 4000*)； 试剂材料 固相萃取小柱： Cleanert PEP， 200 mg/6 mL，使用前用 18 mL甲醇活化，6mL水平衡； 实验用乙腈、水、甲醇均为质谱级试剂； 标准储备溶液(100mg/L)：分别称取壬基酚、正壬基酚、辛基酚、正辛基酚和双酚A标准物质10 mg，用甲醇溶解，并转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为100 mg/L。于-20℃冰箱中保存。 混合标准中间溶液(1mg/L)：分别准确吸取壬基酚、正壬基酚、辛基酚、正辛基酚和双酚A标准储备液1mL至 100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1 mg/L的混合标准中间溶液，置于4℃冰箱中保存。 同位素内标标准储备溶液(100 mg/L)：分别称取壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、对辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、双酚A-D4同位素内标10 mg，用甲醇溶解，并转移至100 mL 容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为 100 mg/L。于-20℃冰箱中保存。 同位素内标混合标准中间溶液(1mg/L)：分别准确吸取壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、对辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、双酚A-D4同位素内标标准储备液各1mL 至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1 mg/L的混合标准中间溶液，，于4C冰箱中保存。 同位素内标混合标准工作液(100ug/L)：分别准确吸取同位素内标标准中间溶液1mL至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成100 ug /L的混合标准工作液。临用时配制。 混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液，加入同位素内标混合标准中间溶液，使壬基酚、正壬基酚、辛基酚、正辛基酚和双酚A浓度分别为0.5ug/L、1 pg/L、2 ug/L 、5 pg/L、10 ug/L、20 ug/L 和 50 ug/L 的混合标准系列工作溶液。临用时配制。 样品基质 实验采用的基质为猪后臀肉，均质后放冰箱冷冻备用。 样品制备 样品提取 称取1g已均质好的样品，置于50 mL离心管中，加入同位素内标混合标准工作溶液 0.1 mL 和5mL 乙腈，涡旋混匀1 min， 超声提取 15min， 8000 r/min离心5 min， 取上层清液；残渣再使用5mL 乙腈重复提取一次，合并乙腈相，置冰箱-20℃冷冻2小时，取出于8000 r/min 离心 5 min， 取上清液待净化。 样品净化 将上述待净化液加30 mL水稀释，混匀，全部经过预先活化、平衡的 CleanertPEP柱，控制流速为1~2mL/min， 弃去滤液，然后使用 12 mL的60%甲醇水溶液(V/V)淋洗，弃去淋洗液，再用6mL乙腈洗脱，接收洗脱液，，于50℃下氮吹，控制氮气流量，缓慢氮吹至近干，残渣用1mL甲醇复溶，8000 r/min 离心5 min，取上层清液待测。 实验条件 色谱条件 色谱柱： Kinetex EVO C18；；(2.6 um， 3.0×50mm)； 捕集柱：VenusilXBP C18；(5 um， 4.6×50 mm)； 流动相A： 0.05%氨水溶液； 流动相B：甲醇； 流 速：： 400 uL/min； 柱温：：30℃： 进样量：10pL； 梯度程序： 表2.梯度条件 时间 (min) 流速(uL/min) A (%) B(%) 0 400 70 30 免责声明 9 400 5 95 14.5 400 5 95 14.51 400 70 30 18 400 70 30 质谱条件 电喷雾电离负离子模式(ESI-)；采集方式：多反应监测(MRM)， 离子源温度：650℃；雾化气压力：55psi， 辅助气压力：65 psi；气帘气压力：20psi；电喷雾电压： -4500V。 表3.化合物定性、定量离子和质谱分析参数 化合物 Q1 Q3 DP/V CE/V 双酚A 227 212* -80 -25 227 133 -80 -35 壬基酚 219 133* -80 -40 219 147 -80 -40 正壬基酚 219 106* -80 -30 219 119 -80 -45 辛基酚 205 133* -80 -28 205 117 -80 -80 正辛基酚 205 106* -80 -28 205 119 -80 -54 双酚 A-D4 231 216* -80 -28 壬基基-13C6 225 139* -81 -39 正壬基酚-D4 223 110* -80 -28 对辛基酚-13C6 211 139* -73 -32 正辛基酚-D17 222 108* -80 -28 注：表3中标“*”为定量离子。 免责声明 结果与讨论 由表4可知，采用 Cleanert PEP 固相萃取柱结合 LC-MS/MS 对猪肉基质中的5种酚类物质进行测试，加标回收率在80%~120%之间， RSD 均小于10%，方法中5种酚类物质的检出限为 0.1 pg/kg ~1.0 ug/kg (S/N=3)，能够满足检测要求。 表4.不同添加水平下的加标回收实验结果(n=6) 化合物 添加水平 5 ug/kg 添加水平 20 ug/kg Recovery(%) RSD% Recovery (%) RSD% 双酚A 96.4 6.2 109.7 5.7 壬基酚 103.9 3.7 106.2 3.0 正壬基酚 101.0 6.5 98.3 4.6 辛基酚 101.5 6.9 100.8 5.3 正辛基酚 100.5 8.0 99.2 6.3 注：双酚A使用双酚A-D4校正，壬基酚使用壬基酚13C6校正，正壬基酚使用正壬基酚-D4校正，辛基酚使用辛基酚13C校正，正辛基酚使用正辛基酚-D17校正。 实验谱图 图3.5 pg/kg 猪肉基质加标色谱图 结论 本实验使用 Cleanert PEP 固相萃取柱结合 LC-MS/MS 对猪肉样品中的辛基酚等5种酚类物质进行检测。实验表明，加标量为 5 ug/kg、20 ug/kg 时，5种酚类物质的回收率在80%~120%之间， RSD 值均小于10%，平行性良好，能够满足实验要求。说明 Cleanert PEP 可用于猪肉中辛基酚等5种酚类物质的检测。 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Cleanert PEP 200 mg/6 mL 30支/包 PE2006-G Kinetex EVO C18 2.6 um， 3.0×50 mm 1支 00B-4725-Y0 Venusil XBP C18 5 pm， 4.6×50 mm 1支 VX950505-0 1.5 mL 样品瓶 短螺纹透明带书写处32×11.6mm 100/pk 1109-0519 1.5 mL 样品瓶盖 9mm中心孔蓝盖，红色 橡胶/米色 PTFE 隔垫 45° Shore A； 1.0 mm 100/pk 0915-1819 免责声明仅用于研究，不用于诊断程序。◎ 纳艾杰尔科技有限公司版权所有。 本实验重现了《BJS201913食品中辛基酚等5种酚类物质的测定方法》，使用Cleanert PEP固相萃取柱结合LC-MS/MS对猪肉样品进行了测试。样品经乙腈提取后，Cleanert PEP固相萃取柱净化，乙腈洗脱，Kinetex EVO C18液相色谱柱进行检测，自动进样器前连接Venusil XBP C18色谱柱作为捕集柱，采用内标法定量。结果表明，当添加水平为5 µg/kg和20 µg/kg时，5种酚类物质相对回收率在80% ~ 120%之间，能够满足检测要求。