酱油、米粉中亚硝酸盐检测方案(二手分析仪器)

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AN_C_IC-082 引言 硝酸盐和亚硝酸盐为常用食品添加剂中的发色剂护色剂，不但可以改善食品的色、香、味，还有一定的抑菌作用。但近年来的研究证实，亚硝酸盐在一定条件下可能与胺类化合物生成亚硝胺类化合物，而此类化合物是一种致癌物质。因此亚硝酸盐作为亚硝胺的前身物质已被人们广泛重视，各国对其在食品加工中的使用量都制定了严格的指标。但酱油中往往有较高含量的氯化物，采用抑制电导检测时，高含量的氯化物会严重干扰亚硝酸根离子的测定，甚至完全掩盖亚硝酸根离子的出峰，常规紫外法也有假阳性的情况，所以本方法用紫外衍生法测定亚硝酸盐，快速、准确、灵敏度高，确保食品安全。 仪器 Thermo ScientificTM ICS-5000*离子色谱系统，包括 -ICS-5000* DP 高压泵 -ICS-5000* EG 淋洗液发生器 -ICS-5000* DC 检测器 Thermo Scientific PDA 紫外检测器 Thermo Scientific AS-AP自动进样器 Thermo Scientific Sorvall ST16台式离心机(P/N：75004240) Thermo Scientific IKA MS 3 basic minishaker旋涡混匀器((P/N： T_2073617025) ( Therm o S cientific Ult r as o n i c bath S 40超声波 水 浴机 (P/N： T _ 701FB15052) ) 试剂和标准品 去离子水(Thermo Scientific GenPure Pro UV-TOC，P/N： 50131948) 乙腈(Fisher Scientific P/N A955-4) 亚硝酸根(Fisher Scientific P/N S347-250) 醋酸锌二水合物 ( Fisher Scientific P/N 207645000) 磺胺(Fisher Scientific P/N 132851000) ( 85% 磷 酸水 溶 液 (F i sher Scientific P/N 201 1 4500) ) ( N- ( 1 - 萘 基) -乙二胺二盐酸盐(F i sher S cientif i c P / N 423990250) ) 耗材 ( T herm o Scienti f ic Target2 Nyl o n S yringe F i l t ers ( 0. 4 5 p m ， 30 mm， P/N F2500 -1 ) ) ( Thermo Scientifi cT M OnGuar d II R P 柱( P/N057084 ) ) Thermo ScientificTM OnGuard II Na 柱 (P/N 062962) ( 一次 性 使用无菌注射器，1mL(上海米沙 瓦 医科工业有限公司) ) 标准溶液制备 准确称取一定量(精确到0.001g)的亚硝酸钠配制成浓度均为1.000 g/L的亚硝酸根标准品储备液。取上述标准品储备液配制含亚硝酸根的浓度分别为1.00 pg/L、5.00 pg/L、20.0pg/L、50.0 pg/L、100 pg/L的标准溶液。 衍生液及样品溶液的制备 衍生试剂的配制：取500mL烧杯，加入水250 mL，加入浓磷酸50 mL， 混匀后，加入磺胺20.0g，溶解后再加入N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐1.0 g，加水使最终体积为500mL，避光使用(不用时于冰箱中避光冷藏)。 亚铁氰化钾(K Fe(CN)e3H2O)：称取10.6g亚铁氰化钾至100 mL容量瓶中，加水溶解后，稀释至刻度。 乙酸锌(Zn(CHgCOO)22H2O)：称取22g乙酸锌至100mL容量瓶中，先加3mL冰醋酸溶解，用水至刻度。 酱油样品：样品1mL，稀释100倍，混匀后过OnGuard ⅡIRP柱，弃刃初滤液3 mL，收集后续滤出液，进离子色谱分析。 米粉样品：称取米粉2.5 g至100 mL容量瓶中，加水20 mL，涡旋振荡2 min， 超声10 min(如果样品仍然没有全部溶解，重复上述涡旋超声操作，直至样品完全溶解)加入亚铁氰化钾溶液1 mL，乙酸锌溶液1 mL，涡旋振荡2 min，加水至刻度，摇匀超声30 min， 放置至室温，4000 rpm离心10 min， 取上清液过OnGuard IIRP柱，弃去初滤液3mL， 收集后续滤出液，再过OnGuardⅡNa柱，弃去初滤液3 mL， 收集后续滤出液，进离子色谱分析。 色谱条件 分析柱： lonPac AG19 保护柱，50×4 mm，(P/N：062887)；lonPac AS19 分离柱， 250×4mm，(P/N： 062885)； 淋洗液： KOH 梯度：0-7 min， 30 mmol/LKOH， 7.1-12 min， 60 mmol/LKOH， 12.1-17 min， 30 mmol/LKOH 流速： 1mL/min 柱温： 30°℃ 衍生液流速： 0.3 mL/min 衍生反应管： 50uL (绿色peek管) 检测器： 紫外检测 检测波长： 540 nm 定量环： 100 pL 背压： 1921 psi 背景： 91.2 mAU 图1亚硝酸根标准溶液色谱图(色谱峰1-亚硝酸根) 配制不同浓度的混合标准溶液，从低到高浓度依次进样，每个浓度进样3针。以离子浓度(pg/L) 为横坐标，以峰面积的平均值为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表1。线性范围宽，线性相关系数良好，满足定量分析需要。 表1 NO的线性范围、标准工作曲线、方法定量限和精密度 名称 线性范围 线性方程 2 LOQ(pgL) RSD(%) (pgL) (pgL') (n=4) NO 1.00~100 Y=0.0425X+0.0036 99.95 1.00 3.51 样品测定 为确定本方法的回收率和精密度良好，设计以下实验方案：测定酱油和米粉中亚硝酸盐的含量，并在两种样品品中分别添加亚硝酸盐的标准溶液进行回收率试验。试验结果见表2。样品加标谱图见图2。 表2样品测定结果及加标回收率实验 名称 测得量(pg/L) 加标量(pg/L) 加标后含量(pg/L) 回收率% 酱油 一 5 4.86 97.2 米粉 18.29 5 23.80 110.2 图2米粉样品加标实验色谱图 结论 本方法利用离子色谱紫外衍生法测定酱油、米粉中的亚硝酸盐，快速、准确、灵敏度高，精密度和回收率均符合规定的要求，能满足实际工作的要求。 ( [1] GBT 5009.33 - 2008食品中的亚硝酸盐与硝酸盐 的 测 定 ) ( [ 2 ]张磊，刘肖，赵云峰等，离子色谱法 测 定食品中硝酸盐和亚硝酸盐.中 国食 品卫生杂 志 ，2008，20(4)： 294-297. ) 免费服务热线：800810 5118400 6505118(支持手机用户) 采用紫外衍生法检测，建立—种实用、灵敏、准确度高的离子色谱法测定酱油、米粉中的亚硝酸盐。线性回归系数大于0.9995,且样品加标回收率良好。本方法利用离子色谱紫外衍生法测定酱油、米粉中的亚硝酸盐，快速、准确、灵敏度高，精密度和回收率均符合规定的要求，能满足实际工作的要求。