动物源性食品中五氯酚检测方案

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应用简报 Agilent食品检测与农业Trusted Answers 动物源性食品中五氯酚残留量的测定 公敬欣，吴翠玲安捷伦科技(中国)有限公司 本文参照 GB 23200.92-2016，使用 Agilent Bond Elut PAX 小柱结合高灵敏度 Agilent 6470三重四极杆液质联用系统开发出一种测定动物源性食品中五氯酚残留量的方法。 五氯酚(pentachlorophenol， PCP) 作为氯代烃类杀虫剂和灭真菌剂，被广泛地用作农业杀虫剂、除虫剂等。五氯酚不仅具有致畸、致癌、致突变等作用，还具有生物蓄积作用，在高有机质含量的酸性土壤或沉积物中具有很高的吸附性，可被植物吸收并进入食物链，最终危害人体健康。农业部公告第235号规定所有的动物源性食品中禁用五氯酚钠，在动物源食品中不得检出h。 在常规方法中，提取、净化、氮吹等前处理操作会导致回收率偏低、重复性不好；色谱梯度条件会导致五氯酚附近出现明显基质干扰，使得分析结果不准确。本文参照GB23200.92-20162，通过优化各前处理步骤及色谱梯度条件，使五氯酚在肌肉、鸡蛋、虾和牛奶基质中回收率均大于80%，且重复性 RSD (n=3)小于5%，结果稳定可靠。 试剂和样品 乙腈、甲醇，色谱纯，购于 J&K Scientific；氨水、甲酸、乙酸，分析纯，购于 J&K Scientific；五氯酚钠标准品，纯度94.5%，购于Dr. Ehrensorfer；样品均为市售产品。 提取：肌肉、鸡蛋、虾等 称取均质试样2g， 置于 50mL 具螺旋盖聚丙烯离心管中，加入2mL水，均质化1 min， 加入5mL 5%氨水乙腈溶液，涡旋混合1 min，超声提取 5 min。在4℃下以9000 r/min 的转速离心5 min， 移取上清液置于另一试管中。离心后的残渣用5mL5%氨水乙腈溶液重复上述提取步骤1次，合并上清液，混匀。待净化。 ( 提取：牛奶 ) 称取均质试样2g， 置于 50mL具螺旋盖聚丙烯离心管中，加入10mL5%氨水乙腈溶液，涡旋混合1 min， 超声提取 5 min。 在4℃下以9000 r/min 的转速离心5 min， 移取上清液置于另一试管中。待净化。 净化 Agilent Bond Elut Plexa PAX 小柱经 5mL甲醇和5 mL 水活化。将提取步骤得到的上清液全部上样到 Bond Elut Plexa PAX小柱上，弃去流出液。依次用5 mL 5%氨水溶液、5mL甲醇、5 mL2%甲酸甲醇-水溶液(由4%甲酸甲醇溶液与水等体积混合得到)进行淋洗。待淋洗液完全通过小柱后，弃去流出液，用真空泵抽干固相萃取柱2 min。以3mL8%甲酸甲醇溶液洗脱，抽干小柱；将洗脱液收集到干净的 15 mL 具刻度式管中，加水定容至4mL， 混匀。溶液过 Agilent PTFE-Q 针头过滤器后待分析。 色谱条件 系统： Agilent 1290 Infinity II LC 色谱柱： Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 (2.1×50mm， 1.8 um) 流动相A： 5 mmol/L乙酸铵溶液 流动相B： 甲醇 进样量： 20pL 柱温： 25°℃ 梯度条件： 时间(min) B(%)40.0100.040.012.0 40.0 质谱条件 系统： Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统 离子源： ESI- 干燥气温度： 300°C 干燥器流速： 5L/min 雾化器压力： 45 psi 鞘气温度： 250°C 鞘气流速： 11 L/min 扫描模式： MRM 毛细管电压： 3500V(-) 喷嘴电压： 500 V(-) 表1.多反应监测模式监测的离子对 化合物 母离子 产物离子 裂解电压(V) 碰撞能量(eV) 五氯酚 264.7 264.7 120 5 262.7 262.7 120 5 266.7 266.7 120 5 本文所述方法适用于牛奶、肌肉、鸡蛋和虾中五氯酚残留量的测定。方法在0.25-2.5 ng/mL 范围内表现出良好的线性(基质匹配校准曲线)， R²>0.99，如图3-6所示。 基质效应 ME = K1/K2， K1 为基质匹配校准曲线斜率，K2为标准溶液曲线斜率。当ME 值为1时，表示无基质效应； ME 值小于1，则基质抑制； ME 值大于1，则基质增强。通常认为 ME 在0.8-1.2范围内，基质效应不显著。 从图7-10的色谱对比图中可以看出，通过对 GB 23200.92-20162梯度条件的调整，在猪肉、鸡蛋、虾肉和牛奶基质中，五氯酚的出峰位置无基质干扰，可以进行准确的定量分析。 如表3所示，五氯酚添加浓度为1、2、4 ug/kg 时，各种基质的回收率均在80%以上， RSD 均小于5%。本方法对五氯酚的定量限为1 ug/kg。 通过不同基质的基质效应 ME 的计算，说明 Bond Elut Plexa PAX对肌肉等基质有较好的净化效果，且基质效应不显著(见表2)。 表2.不同基质中五氯酚回归方程、相关系数及基质效应 基质 基质匹配校准曲线* 标准溶液曲线* ME 线性方程 相关系数 线性方程 相关系数 猪肉 Y=16282.4X-769.1 0.99 Y=15098.9X-1372.8 0.99 1.07 鸡蛋 Y=18457.1X-225.2 0.99 Y=18375.8X-1418.2 0.99 1.00 虾肉 Y=17928.9X-1040.2 0.99 Y=18375.8X-1418.2 0.99 0.97 牛奶 Y=8555.6X-417.5 0.99 Y=8889.7X-253.3 0.99 0.97 *标准溶液曲线使用8%甲酸甲醇溶液：水 (V/V，3：1)配制；基质匹配校准曲线使用空白样品基溶溶液配制，空白样品基质溶液按照样品前处理步骤制备得到 表3.不同基质中五氯酚的加标回收率及精密度 基质 加标浓度1 pg/kg 加标浓度2pg/kg 加标浓农4pg/kg 回收率(%) RSD (n=3) 回收率(%) RSD (n=3) 回收率(%) RSD (n=3) 猪肉 96.4 1.62 91.5 1.04 88.3 2.65 鸡蛋 90.2 0.95 91.8 0.66 86.2 4.13 虾肉 102.7 1.15 100.7 2.04 97.9 3.51 牛奶 89.6 4.45 90.5 0.85 85.0 2.64 3 3 图3.猪肉基质中五氯酚的标准曲线 图5.虾肉基质中五氯酚的标准曲线 3 3 浓度 (ng/mL) 图4.鸡蛋基质中五氯酚的标准曲线 图6.牛奶基质中五氯酚的标准曲线 图7.五氯酚的猪肉空白(黑色)、0.5ng/mL标样(红色)、0.5 ng/mL 基质标样(绿色)、1 ug/kg加标样品(蓝色)的MRM谱图 图8.五氯酚的鸡蛋空白(黑色)、0.5 ng/mL标样(红色)、0.5 ng/mL 基质标样(绿色)、1 pg/kg 加标样品(蓝色)的MRM 谱图 图9.五氯酚的虾肉空白(黑色)、0.5ng/mL标样(红色)、0.5 ng/mL 基质标样(绿色)、1 ug/kg 加标样品(蓝色)的 MRM谱图 图10.五氯酚的牛奶空白(黑色)、0.5 ng/mL标样(红色)、0.5 ng/ mL 基质标样(绿色)、1 pg/kg加标样品(蓝色)的 MRM谱图 本文采用 Bond Elut Plexa PAX 小柱结合 HPLC-MS/MS， 优化建立了动物源性食品中五氯酚残留量测定的分析方法。文中采用的Bond Elut Plexa PAX 小柱采用独特的新型羟基化外表面、疏水性内部结构和高级聚合物骨架，这种高级材料具有单分散粒径分布，流动特性出色，极少出现柱床堵塞。 Agilent PTFE-Q(亲水PTFE) 针头过滤器同时兼容水相和有机溶剂，通过严格的质控保证，具有极低的溶出，且对五氯酚没有吸附作用。 通过对以上耗材的选用及前处理步骤的优化，该方法五氯酚出峰附近无明显基质干扰，添加浓度为1、2、4 pg/kg 时，各种基质的回收率均在80%以上， RSD 均小于5%，结果稳定可靠。 ( 参考文献 ) 1.中华人民共和国农业部公告第235号动物性食品中兽药最高残留限量 2.中华人民共和国食品安全国家标准 GB 23200.92-2016动物源性食品中五氯酚残留量的测定液相色谱-质谱法 消耗品 部件号 Bond Elut Plexa PAX， 60 mg，3 mL 12107603 ZORBAX Eclipse Plus C18，2.1×50 mm， 1.8 pm 959757-902 Agilent PTFE-Q 针头过滤器， 0.2 pm， 13 mm 5191-4294 Agilent VacElut 20 固相萃取装置 12234104 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 ( 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 ) 5994-1794ZHCN 本文采用 Bond Elut Plexa PAX 小柱结合 HPLC-MS/MS，优化建立了动物源性食品中五氯酚残留量测定的分析方法。文中采用的Bond Elut Plexa PAX 小柱采用独特的新型羟基化外表面、疏水性内部结构和高级聚合物骨架，这种高级材料具有单分散粒径分布，流动特性出色，极少出现柱床堵塞。Agilent PTFE-Q（亲水PTFE）针头过滤器同时兼容水相和有机溶剂，通过严格的质控保证，具有极低的溶出，且对五氯酚没有吸附作用。通过对以上耗材的选用及前处理步骤的优化，该方法五氯酚出峰附近无明显基质干扰，添加浓度为 1、2、4 μg/kg 时，各种基质的回收率均在 80% 以上，RSD 均小于 5%，结果稳定可靠。