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自动化样品前处理解决方案-RK-2020-F004 自动化样品前处理解决方案-RK-2020-F004图-3. Fotector Plus 赭曲霉毒素A免疫亲和净化方法 解决方案 玉米、小麦中赭曲霉毒素A的测定 全自动固相萃取;高效液相色谱法;赭曲霉毒素A 介绍 赭曲霉毒素是继黄曲霉毒素后又一个引起世界广泛关注的霉菌毒素。:。它是由曲霉属的7种曲霉和青霉属的6种青霉菌产生的一组重要的、污染食品的真菌毒素。其中毒性最大、分布最广、产毒量最高、对农产品污染最严重、与人类健康关系最密切的是赭曲霉毒素A。 采用Raykol Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪分析食品中的赭曲霉毒素A,试样经过60%乙腈水提取,提取液经离心、稀释后用含有赭曲霉毒素A特异抗体的免疫亲和柱自动净化。用10 mL真菌毒素清洗缓冲液和10mL水淋洗柱子将免疫亲和柱上的杂质除去,以甲醇洗脱免疫亲和柱。将洗脱液在45℃条件下氮吹干,用0.5mL初始流动相定容,经高效液相色谱仪上机分析。 图-1.八种糖皮质激素的结构式 本文参考GB 5009.96-2016《食品中赭曲霉毒素A的测定》第一法,采用免疫亲和柱净化,高效液相色谱检测,建立了复杂粮油样品基质中赭曲霉毒素A高灵敏度的前处理和分析方法,得到常见粮油样品中赭曲霉毒素A的加标回收率在92-102%之间,RSD值小于5%。 1.仪器、耗材 Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪 Raykol Auto Prep 200 全自动液体样品处理工作站 Raykol AutoEVA-60全自动平行浓缩仪 赭曲霉毒素A免疫亲和柱(Romer, 60 mg/3mL) 高效液相色谱:: Waters ACQUITY UPLC I-Class配备大体积流通池 甲醇(Merck,色谱纯) 乙腈(Merck,色谱纯) 2.标准曲线配置 使用睿科 Auto Prep 200 全自动液体样品处理工作站可实现标准品的全自动化配置,可将购买的单标母液(100mg/L)通过工作站的直接稀释模式,配置成浓度为1 mg/L 的工作中间液,紧接着可通过程序设置,吸取该工作液,配置一条浓度分别为1.0 ug/L, 2.0 ug/L, 10 ug/L, 50 ug/L 和 100 ug/L 3.样品提取与前处理 玉米样品前处理 准确称取5 g玉米样品于50 mL离心管中,加入20 mL 60%乙水水溶液,涡旋震荡提取 20 min,以7000 r/min 的转速离心5 min, 取4mL上清液 小麦样品前处理 准确称取5g小麦样品于50 mL 离心管中,加入 20 mL 60%水腈水溶液,涡旋震荡提取20 min,以 7000 r/min 的转速离心5 min, 取4mL 上清液固相萃取净化条件 表-1固相萃取净化条件 全自动固相萃取仪 睿科 Fotector Plus 固相萃取柱 赭曲霉毒素A免疫亲和柱(Romer,60 mg/3mL) 淋洗 真菌毒素清洗缓冲液和超纯水 洗脱 甲醇 以2 mL/min 的速度精确上样30 mL 待测液, 吐温-20 (Sigma,试剂纯) PBS 盐包 氯化钠 碳酸氢钠 冰乙酸 超纯水(Waston) 真菌毒素清洗缓冲液:中取25.0g氯化钠、5. 0g碳酸氢钠溶于水中,加入0.1mL吐温-20,用水稀释至1L。 的标准工作曲线。 图-2. Auto Prep 200 液体工作站配标程序 于80 mL 玻璃上样管中,加入26 mL PBS 缓冲液稀释混匀,待用。 于80 mL 玻璃上样管中,加入26mL PBS缓冲液稀释混匀,待用。 用10 mL真菌毒素清洗缓冲液和10mL水淋洗免疫亲和柱,气推30 mL吹干免疫亲和柱,推速为80mL/min。最后用2mL甲醇以0.5 mL/min 的速度洗脱样品,收集洗脱液用睿科 AutoEVA-60 全自动平行浓缩仪于45°C、2 psi 条件下氮吹干,用初始流动相定容至0.5mL, 过滤膜上机分析。详细步骤见图-3。 序号 命令 溶剂 排出 体积 1 清洗样品通道 H20 2.8 2 填充样品路径 H20 40 3 1.3 3 特殊上样 废水 2 30 16.8 4 清洗样品瓶 ZJDSQXHCY 废水 80 10 3.2 5 淋洗 H20 废水 2 10 5.6 6 气推 废水 80 30 2.2.2 7 清洗注射泵 CH30H 80 1.5 8 洗脱 CH30H 收集 0.5 1.4 9 气推 收集 0.5 2 4.4 10 气推 收集 80 20 1.6 11 结束 12 4.检测条件 表-2赭曲霉毒素A液相色谱检测条件 色谱柱 Waters BEH-Ci8 (2.1×100 mm, 1.7 um) 流速 0.200 mL/min 流动相 乙腈:水:冰乙酸=96:102:2 柱温 35 进样体积 10uL 梯度洗脱 等度洗脱 荧光检测器 激发波长333nm 发射波长460nm 5.样品测试 玉米样品加标测试 取玉米样品5g, 添加1 ug/kg 的赭曲霉毒素A 如下表-3所示:标准品,进行上述步骤的前处理净化,样品回收率 表-3添加水平为1 ug/kg 玉米样品回收率 名称 回收率 平均回收率 RSD 1 2 3 4 5 6 OTA 95.7% 95.6% 92.5% 98.7% 97.3% 100.4% 96.7% 2.8% 小麦样品加标测试 小麦样品中添加水平为 1 ug/kg 的赭曲霉毒素 A回收率结果: 表-4添加水平为1 ug/kg 小麦样品回收率 名称 回收率 平均回收率 RSD 1 2 3 4 5 6 OTA 97.2% 92.7% 94.8% 101.2% 99.7% 96.7% 97.0% 3.2% 6.结果与讨论 淋洗柱子对回收率的影响 淋洗溶剂对回收率的有一定影响,应以10 mL真菌毒素清洗缓冲液和10 mL纯水除去免疫亲和柱上残留的色素和基质。若不用真菌毒素清洗缓冲液 淋洗而只是用水淋洗,6个样品的平行性降低,RSD值大于10%。 洗脱速度的影响 采用1 mL/min 的洗脱速度,洗脱效果不佳, 回收率在80%以下;降低洗脱速度至0.5 mL/min,洗脱效果有明显提升,回收率在90-102%之间。因 提取液与 PBS 缓冲液稀释混匀后若比较浑浊,可以再次高速离心方便后续过免疫亲和柱。 谷物中离心完成后,不可放置过长时间,否则 8.总结 本文采用睿科 Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪,结合Auto EVA-60 全自动平行浓缩仪,优化建立玉米、小麦中赭曲霉毒素A的测定前处理方法。 采用 Auto Prep 200全自动液体样品处理工作站可实现混标、标准曲线的自动配置,全程无需人为值守,让实验人员远离有毒有害的化学物质,保护身体健康。Fotector Plus 高通量全自动固相萃 谷物容易重新吸水,可能导致提取液的浓度过高,使样品的回收率偏高,影响测试结果。 取仪对样品进行检测能同步进行6个样品净化,连续自动处理60个样品,做样通量高,提高了工作效率。AutoEVA-60 全自动平行浓缩仪处理通量高,60个样品可同时进行氮吹,实验平行性好 本解决方案的准确性、重复性、再现性均满足实验要求,能够用于 GB 5009.96-2016《食品中赭曲霉毒素A的测定》方法对玉米和小麦样品的测定。 全自动液体样品处理工作站标液配制 高通量全自动固相萃取仪净化 全自动平行浓缩仪浓缩 RayKol 睿科集团股份有限公司 RayKol Group Corp., Ltd. 网址: www.raykol.com 电话:400-885-1816 邮箱: info@raykol.com 本文中的信息、说明和技术指标如有变更,恕不另行通知 @睿科集团股份有限公司 2020年5月版 邮箱: info@raykol.com热线:址:www.raykol.com 网址:www.raykol.com邮箱: info@raykol.com热线: 采用Raykol Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪分析食品中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇,试样经过去离子水提取,提取液经离心、稀释后用含有脱氧雪腐镰刀菌烯醇特异抗体的免疫亲和柱自动净化。用5 mL PBS缓冲盐溶液和5mL水淋洗柱子将免疫亲和柱上的杂质除去,以甲醇洗脱免疫亲和柱。将洗脱液在50°C条件下氮吹干,用1mL 10%乙腈水定容,经高效液相色谱仪上机分析。本文参考GB5009.111-2016《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》第二法,采用免疫亲和柱净化,高效液相色谱检测,建立了复杂粮油样品基质中脱氧雪腐镰刀菌烯醇高灵敏度的前处理和分析方法,得到常见粮油样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的加标回收率在88.9-103.9%之间,RSD值小于10%。
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睿科集团股份有限公司为您提供《玉米、小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测方案(固相萃取仪)》,该方案主要用于小麦粉中真菌毒素检测,参考标准《暂无》,《玉米、小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测方案(固相萃取仪)》用到的仪器有睿科Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪、睿科AutoEVA-60 全自动平行浓缩仪、睿科 Auto Prep 200全自动液体样品处理工作站。
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