花生油或猪油中不饱和脂肪酸检测方案(纤维测定仪)

智能文字提取功能测试中

来亨科学仪器Laiheng Lab-Equipment Folin-济试剂法(Lowry法)测定蛋白质含量 、S实验原理 蛋白质含有两个以上的肽键(—CO-NH)，因此有双双脲反应，在碱性溶液中，能与CU2+形成络合物。Folin-酚试剂反应是在双缩脲反应的基础上，引进 Folin 试剂(磷钼酸-钨酸试剂)，蛋白白-铜络合物能还原磷钼酸-磷钨酸试剂，生成蓝色物质。在一定条件下，蓝色强度与蛋白质的量成正比例。 本法的优点是操作简便、灵敏度高、较此外吸收法灵敏10~20倍，较双缩脲法灵敏100倍，反应约在15min 内有最大显色，并至少可稳定几小时。其不足之处是此反应受多种因素干扰。对双缩脲反应发生干扰的基团 ， Tris.HCL 缓冲剂以及蔗糖、硫酸铵、巯基化合物，酚类及柠檬酸，均对此反应有干扰作用。在测试时应排队干扰因素或做空白实验消除。含硫酸铵的溶液只需加浓 Na2CO3-NaOH溶液即可显色测定。若样品酸度较高，显色后色浅，则必须将 Na2CO3-NaOH 溶液的浓度提高1~2倍。 本法可测定范围是25~250ug蛋白质。 二、实验用品 (一)器材 (1)722型分光光度计。 (2)恒温水浴锅。 (3)试管及试管架。 (4)0.5ml， 1ml及5ml移液管 (二)试剂 (1)试剂甲。 (A)4%Na2CO3溶液； (B)0.2mol/LNaOH 溶液； (C)2%酒石酸钾钠溶液(或酒石酸钾、酒石酸钠)； (D)1% CuSO45H2O溶液； 临用前将(A)：(B)：(C)：(D)=50：50：1：1(体积比)混合，此混合液即为试剂甲。混合后的溶液1d内有效。 (2) Folin-酚试剂(试剂乙)：在1.5L容积的磨口回流瓶中加入100g 钨酸钠(Na2WO42H2O)，25g钼酸钠((Na2MoO42H20)， 及700ml蒸馏水， 50ml 85%磷酸， 100ml浓盐酸充分混合，烧瓶内加小玻璃珠数颗，以防溶液溢出，接上回流冷凝管以文火回流 10h。回流结束后，加入150g硫酸锂(LiSO4)，50m 重蒸水及数滴液溴，开口继续沸腾15min ，以除去多余的溴。冷却后溶液呈金黄色(如果仍呈绿色，须再重复滴加溴水的步骤)，定容至1L，过滤，滤液置棕色瓶中保存，可在冰箱长期保存。若此贮存液使用过久，颜色由黄变绿，可加几滴液溴，煮沸数分钟，恢复原色仍可继续使用。使用时用标准 NaOH 滴定酸度，以酚酞为指示剂。该试剂的酸度应为 2mol/L左右，将之稀释至相当于 1mol/L酸度使用， 即为 Folin-酚试剂。 (3)标准蛋白质溶液：可用结晶牛血清蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白质含量，再根据其纯度配制成 500pg蛋白/ml溶液。 (三)材料 血清使用前稀释100倍或约含20~250pg蛋白/ml溶液。 、实验程序 (一)操作方法 ( 销售中心：北京丰台区丰北路甲45号鼎恒中心6A ) 技术中心：北京金桥科技产业基地 景盛南二街33号4号楼4层 1.蛋白浓度标准曲线制作 取14支试管，分两组按表9-1平行操作。 表9-1 试管编号 0 1 2 3 4 5 6 试剂处理 蛋白含量/ug 150 200 标准蛋白溶液/ml 0 0.05 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 重蒸水/ml Folin-酚甲试剂/ml 各管加入4ml 混匀，于20~25℃放置 10min Folin-酚乙试剂/ml 各管加入0.5ml 迅速混匀，30℃(或室温20~25℃)水浴保温 30min ，以0号管为空白对照， 在650nm处比色 OD650 绘制标准曲线：以OD650值为纵坐标，标准蛋白量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。 2.样品溶液蛋白质浓度测定 取6支试管，分两组，按表9-2平行操作。 表9-2 试管编组 试剂处理 蛋白含量/ug 0 25 50 100 150 200 250 标准蛋白溶液/ml 0 0.05 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 Folin-酚甲试剂/ml 各管加入4ml 混匀，于20~25℃放置 10min Folin-酚乙试剂/ml 各管加入0.5ml 迅速混匀，于30℃(或室温20~25℃)水浴保温30min OD650 3.计算 3 ( 销售中心：北京丰台区丰北路甲45号鼎恒中心6A ) 北京来亨科学仪器有限公司销售中心：北京丰台区丰北路甲鼎恒中心A技术中心：北京金桥科技产业基地景盛南街楼层 京来亨科学仪器有限公司  一、实验原理在适当条件下，不饱和脂肪酸的不饱和键能与碘、溴或氯起加成反应。脂肪分子中如含有不饱和脂酰基，即能吸收碘。100g脂肪所吸收碘的克数称为碘价。碘价的高低表示脂肪不饱和程度的大小。由于碘与脂肪的加成作用很慢，故于Hanus试剂中加入适量溴，使产生溴化碘，再与脂肪作用。过量的溴化碘与脂肪作用后，测定溴化碘剩余量即可求得脂肪之碘价，本法的反应如下：一、实验用品（一）器材 （1）碘价滴定瓶（250~300ml），或用具塞锥形瓶代替。        （2）量筒（10~50ml）。        （3）样品管。（二）试剂   （1）Hanus溶液：取13.2g I，置于1500ml锥形瓶内，徐徐加入1000ml冰醋酸（AR，不应含有还原物质），边加边揺，同时略加温热，使碘溶解。冷却后，加溴约3ml。   （2）0.2mol/L标准硫代硫酸钠溶液。    （3）纯四氯化碳。    （4）1%淀粉溶液（溶于饱和氯化纳溶液中）。            （5）10% KI水溶液。    二、实验程序操作方法1.实验      准确称取0.3~0.4g花生油或0.5g猪油2份，放入两个干燥的碘价测定瓶内，切勿使油粘在瓶颈或壁上，各加四氯化碳10ml，轻轻摇动，使油全部溶解。用滴定管仔细地向每个碘测定瓶内加入Hanus溶液25ml，勿使溶液接触瓶颈，塞好玻璃塞，在玻璃塞与瓶口之间加数滴10%碘化钾溶液封装缝隙，以防止碘升华溢出造成测定误差，然后在20~30℃暗处放置30min.放置期间应不时摇动。卤素的加成反应是可逆反应，只有在卤素绝对过量时，该反应才能进行完全，所以油吸收的碘量不应超过Hanus溶液所含碘量的一半，若瓶内混合液的颜色很浅，表示油量过多，应再称取较少量的油重作。      放置30min后，立刻小心打开玻璃塞，使塞边KI溶液流入瓶内，切勿丢失，用新配制的１０％KI 10ml和蒸馏水50ml把玻璃和瓶颈上的液体冲入瓶内，混匀。用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液使碘由四氯化碳全部进入水溶液内。再滴至蓝色消失为止，即为滴定终点。       另作两分空白对照，除不加样外，其余操作同上。滴定后将废液到时入废液瓶，以便收回四氯化碳。