猪肉中兽药残留检测方案(液质联用仪)

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应用中心 前言 近年来，猪肉-这种人们较常食用的动物源性食品相继发生了一系列质量安全问题，引起了国内外的广泛关注。众所周知，在养殖过程中经常会添加多种类型的兽药，如磺胺类、四环素类、 喹诺酮类、硝基咪唑类、氯霉素类、激素类等， 保证猪肉质量，尤其是加强对其中兽药残留检测液相色谱条件： 至关重要。兽药残留问题关系到千家万户，甚至色谱柱： Waters CORTECH UPLC C18影响到国计民生和社会稳定。因此，需要对猪肉(2.1*100mm，2.6um) 中多兽药残留量进行检测。 本文使用谱育LC-MS/MS系统，参考液；B：甲醇，梯度洗脱程序见表1； 《GB31650-2019食品安全国家标准食品中兽药流速： 0.4mL/min；柱温：40℃ 最高残留量》，建立了测定猪肉张中多兽药残留进样量：10ul。 量的分析方法。 实验部分 仪器设备： ULC 510超高效液相普谱仪(具体配有二元超高压输液泵、超高压自动进样器(含冷却功能)、柱温箱)、EXPEC 5210三重四极杆串联质谱仪 标准品和试剂： 兽残标准品：150种兽药标准品均购自上海安谱，置于-20℃冰箱保存。 试剂：甲醇、水为色谱纯，甲酸、冰醋酸为LC-MS级，纯度98%；乙酸铵、EDTA-2Na为色谱纯，纯度99%；NaCl、无水硫酸钠和无水MgSO4为优级纯。 图1 EXPEC-5210三重四级杆串联质谱仪 流动相：A：0.1%甲酸-2mmol/L乙酸铵溶 表1梯度洗脱条件 时间 (min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 90 10 90 10 3.5 70 30 8.5 30 70 10.5 0 100 13 0 100 13.1 90 10 15 90 10 质谱条件： 监测模式为多反应监测(MRM)，各化合物监测离子对、碰撞电压(CE)等参数见表2。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各化合物。 表2各化合物参考离子对及参数 接上表2 应用简报： 编号： LC-MSMS 2019-007 *为定量离子 样品制备 提取：将猪肉样品打碎，充分匀浆，精密称取样品5.00g(精确到0.01g)，加入16ml5%甲酸乙腈和4mL 0.1mol/L Na，EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(pH=4.0)，涡旋混匀30s。随后加入1gNaCI和4g无水Na，SO4，均质5min， 涡旋3min。之后以12000r/min冷冻离心10min， 所得上清液转移至另一50mL离心管中。 净化：取一塑料离心管向其中加入50mgC18和300mg无水MgSO4，然后准确移取2.0mL上步的所得上清液于该塑料离心管中，涡旋30s， 在8000r/min的转速下冷冻离心5min。吸取1.0mL上清液于软质塑料管中，加入1.0mL超纯水，涡旋混匀，过0.22um有机滤膜，进样检测。 线性范围与定量限 本方法采取基质匹配标准曲线外标定量法。。120种兽药在浓度0.2-100ng/mL范围内线性相关，且线性相关系数(R)均大于0.99。 在S/N>3和S/N>10的信噪比下，测得120种兽药在空白基质中检出限和定量限完全能够满足我国标准方法限制中检出限和定量限的要求。 加标回收率和精密度 在空白供试品中分别加入混合对照品(5ug/kg)，各3份。120种兽药在空白基质的加标回收率均在72%-115%之间。取对照品溶液注入液相色谱质谱仪，连续平行测定6次，计算峰面积RSD。所得150种兽药的RSD范围为0.1-5.6%之间。图1所示为120种兽药的色谱图。 图1120种兽药MRM图谱 (1ng/ml) 结论 本文依据《GB31650-2019食品安全国家标准食品中兽药最高残留量》建立了高抗污染能力、高灵敏度的超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法测定猪肉中120种兽药残留量的分析方法。方法灵敏度、精密度和准确度均满足国内标准要求。 兽药残留问题关系到千家万户，甚至影响到国计民生和社会稳定。因此，需要对猪肉中多兽药残留量进行检测。本方案使用谱育LC-MS/MS系统， 参考《GB31650-2019食品安全国家标准食品中兽药 最高残留量》，建立了测定猪肉中多种兽药残留量的分析方法。