水产品中硝基呋喃类代谢物残留检测方案(液质联用仪)

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200036_CHN_01 PKI 水产品中硝基呋喃类代谢物残留LC-MS-MS分析方法去 背景： 硝基呋喃类抗菌药物是一种广谱抗生素，包含了呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林， 被广泛应用于水产养殖业。这类化合物的母体在动物体内及其产品中代谢很快，但其代谢物以蛋白结合物的形式存在可残留较长时间，目前各国均将硝基呋喃代谢物作为指示硝基呋喃类药物残留的标示物。因硝基呋喃类药物及其代谢物具有相当大的毒副作用，世界上绝大部分国家规定在食用动物组织中不允许有硝基呋喃药物残留，美国21CFR530.14规定食源性动物禁止食用呋喃唑酮和呋喃妥因，欧盟EEC2377/90将硝基呋喃类药物及其代谢物列为A类禁用药物，我国也于2002年颁布了禁用硝基呋喃类抗生素的禁令。本文参照农业部783号公告-1-2006《水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定-液相色谱-串联质谱法》，研究了QSight210LC-MS/MS系统应用于水产品中硝基呋喃类代谢物残留的检测方法。 50s， 4000 r/min离心5 min， 取上层清液转移至10mL玻璃离心管中；再加入4 mL乙酸乙酯重复上述操作，合并上清液于40℃下氮气吹干。准确加入1.0mL95/5甲醇水溶液涡旋振荡溶解残留物，过0.45um滤膜， 待LCMSMS测定。 标准工作曲线制作 分别准确移取10 ng/mL混合标准工作溶液0.010mL、0.025mL、0.050mL、0.10mL和100ng/mL混合标准工作溶液0.025 mL、0.050mL、0.10mL于7个50mL离心管中，除不加样品外，其余操作步骤同样品制作过程。 LC-MS/MS仪器方法 称取均质鱼肉样品2.0g于50mL离心管中，加入0.05 mL100ng/mL混合内标工作溶液涡旋混合50s， 再加入5mL0.2mol/L盐酸溶液和0.15 mL 0.05 mol/L2-硝基苯甲醛溶液，涡旋振荡50s后，置于恒温水浴振荡器中37℃避光振荡16 h。 提取净化 取出离心管冷却至室温，加入3 mL-5mL1.0 mol/L磷酸氢二钾溶液调节pH至7.0-7.5，加入4mL乙酸乙酯，涡旋振荡 液相色谱和质谱参数分别参见表1，2和3。 表1液相色谱参数 色谱柱 PerkinElmer Quasar AQ， 100×2.1mm， 1.7 um (货号： N9308857) 流动相 A：0.5mM乙酸铵溶液 B：甲醇 Step Time Flow Rate %A %B Curve (min) (mL/min) 梯度洗脱程序 1 initial 0.4 60 40 2 0.25 0.4 60 40 Linear 3 6.25 0.4 40 60 Linear 4 7.00 0.4 1 99 Linear 5 7.10 0.4 60 40 Linear 6 10.00 0.4 60 40 Linear 柱温 40°℃ 进样量 20 uL 表2质谱参数 MS PerkinElmer QSight 210TM lonization Mode ESI positive Drying Gas Setting 75 HSID Temperature (C) 320 Nebulizer Gas Setting 220 Electrospray Voltage(V) 5500 Source Temperature (℃) 500 Multipole 1 RF 300 表3硝基呋喃类代谢物MRM参数 化合物 母离子(m/z) 子离子(m/z) 子离子(m/z)| 入口电压(v) CCL2(V) 碰撞能量(ev) NBA-SEM 209.1 166.00* 166.00* 26 -44 -11 209.1 192.00 192.00 18 -40 -13 NBA-SEM-13C-15N-2 212.1 168.00* 168.00* 26 -44 -11 NBA-AHD 249.1 104.00 104.00 28 -48 -30 249.1 134.00* 134.00* 30 -44 -14 NBA-AHD-13C. 252.1 134.00* 134.00* 30 -44 -14 NBA-AOZ 236.1 104.00 104.00 28 -48 -32 236.1 134.00* 134.00* 30 -48 -14 NBA-AOZ-D. 240.1 134.00* 134.00* 30 -48 -14 NBA-AMOZ 335.2 128.00 128.00 12 -72 -32 335.2 291.00* 291.00* 6 -72 -13 NBA-AMOZ-D5 340.2 296.00* 296.00* 6 -72 -13 实验结果 在上述实验条件下得到四种硝基呋喃代谢物的MRM色谱图，见图1. 图11.0ug/LNBA-SEM，NBA-AHD，NBA-AOZ和NBA-AMOZ的典型色谱图 NBA-SEM，NBA-AHD，NBA-AOZ和NBA-AMOZ在0.05 ug/L-10 ug/L浓度范围内均呈现良好的线性关系，相关系数≥0.995，见图2. 图2四种硝基呋喃代谢物标准曲线 定量限通过计算定量离子的信噪比≥10得到，四种硝基呋喃代谢物的定量限均小于0.05 ug/L， 低于法规规定的MRPL(1.0 ug/L)20倍。 将本方法应用鱼类样品中硝基呋喃代谢物的检测，得到添加水平0.5 ug/kg的典型色谱图，见图3. 图3鱼肉样品中添加水平0.5 ug/kg NBA-SEM，NBA-AHD，NBA-AOZ和NBA-AMOZ的定量色谱图 结论 PerkinElmer QSight 210系统完全可以遵从法规满足实验室对于水产品中硝基呋喃代谢物的日常监测工作。QSight 210系统具有优异的自清洁性能设计，可以大大提高仪器的抗污染能力，为实验室面对复杂基质样品时带来更大方便。 珀金埃尔默企业管理(上海)有限公司 地址：上海张江高科技园区张衡路1670号邮编：201203电话：021-60645888传真：021-60645999www.perkinelmer.com.cn 要获取我们全球办公室的完整列表，请访问 www.perkinelmer.com/ContactUs @2019， PerkinElmer， Inc.版权所有。保留所有权利。 PerkinElmer 是 PerkinElmer， Inc. 的注册商标。 所有其他商标均为其各自所有者的财产。所有解释权归PerkinElmer. ( 欲了解更多信息，请扫描二维码关注我们的微信公众账号 ) 本文参照农业部783号公告-1-2006《水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定-液相色谱-串联质谱法》，研究了QSight® 210 LC-MS/MS系统应用于水产品中硝基呋喃类代谢物残留的检测方法。